药物分析课件第04章药物定量分析与分析方法验证.

第四章药物的含量测定方法与验证《药物分析》课件上一内容下一内容回主目录返回基本要求掌握：药物含量的容量、光谱和色谱分析法，滴定度与含量计算，色谱系统适用性试验的内容、要求及相关计算，样品分析的前处理方法，药物分析方法的验证与内容。熟悉:各类分析法的基本原理与条件选择，样品分析前处理方法的适用范围，不同分析方法对验证内容的基本要求。了解：滴定液的配制与标定，分析仪器的校正和检定。上一内容下一内容回主目录返回基本内容一、定量分析法的分类与特点二、样品分析的前处理方法三、药品质量标准分析方法验证练习与思考上一内容下一内容回主目录返回第一节定量分析方法分类与特点一、容量分析法（一）容量分析法的特点几个概念：容量分析法、滴定终点、滴定误差操作简单、快速；比较准确（相对误差＜0.2%）；仪器普通易得常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测定首选上一内容下一内容回主目录返回（二）容量分析法的计算问题2.滴定度的计算aA（待测物）+bB（滴定液）cC+dDabT/M1×cT=c×a/b×Mc：滴定液浓度(mol/L)M：被测物分子量1.滴定度（T）：每1ml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量(mg)上一内容下一内容回主目录返回用溴酸钾法测定异烟肼[M(C6H7N3O)＝137.14]的含量时，溴酸钾滴定液的摩尔浓度为0.02mol/L（以KBrO3为单元），化学反应式如下：3C6H7N3O＋2KBrO3→3C6H5NO2+3N2↑+KBr+3H2O上一内容下一内容回主目录返回3.百分含量的计算W：供试品取样量设至终点时，消耗滴定液体积为Vml则药物理论质量为V·T％％＝供试品取样量实测药物质量＝含量100WTFV100%浓度校正因数规定实际＝CCF（1）直接滴定法上一内容下一内容回主目录返回（2）间接滴定法1）生成物滴定法药物+A→B滴定滴定剂％）－（含量％＝100WFTVV02）剩余滴定法（回滴法）药物+A（定、过量）→················剩余的A+B→·······（回滴）······V空白试验···········································V0W司可巴比妥钠=0.1022g，cBr2=0.05mol/L，cNa2S2O3＝0.1mol/L；V1=15.73ml，V0=23.21ml；MC12H17N2NaO3=260.27，FNa2S2O3＝1.038。司可巴比妥钠的含量测定1.计算滴定度；2.计算百分含量。上一内容下一内容回主目录返回上一内容下一内容回主目录返回光谱分析法紫外—可见分光光度法UV—Vis原子吸收分光光度法AAS荧光分析法二、光谱分析法上一内容下一内容回主目录返回（一）紫外-可见分光光度法灵敏度高，可达10-4g/ml～10-7g/ml1.特点准确度高，RSD（%）为2%～5%仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛2.朗伯-比耳定律A=ECL吸收系数：摩尔吸收系数ε——研究分子结构百分吸收系数——含量测定%11cmE吸收光谱范围：紫外：200～400nm可见：400～760nm上一内容下一内容回主目录返回3.仪器的校正和检定吸收度准确性的检定：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波长处测定，应符合P91表1中规定%11cmE波长的校正：汞灯中的几根较强的谱线或用仪器自身所带的氘灯的特定谱线为参照进行校正杂散光的检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，规定波长处测定透光率，应符合P91表2中规定上一内容下一内容回主目录返回4.对溶剂的要求:含杂原子的有机溶剂通常具有很强的末端吸收它们的使用范围均不能小于截止使用波长石英吸收池、空气为空白λ(nm)溶剂+吸收池A220～240≤0.40241～250≤0.20251～300≤0.10300以上≤0.05上一内容下一内容回主目录返回5.测定方法确定波长要求供试品溶液的A应在0.3～0.7狭缝调整上一内容下一内容回主目录返回RXRXRXRXAACCCCAALCELCEAARXRX%1cm1%1cm1供试品溶液的吸光度对照品溶液的吸光度供试品溶液的浓度对照品溶液的浓度LCEALCEARcmRXcmX%11%115.测定方法1）对照品比较法：条件：A.待测物与对照品在相同条件下测定B.待测物与对照品浓度相近上一内容下一内容回主目录返回％标示量＝片标示含量片实测含量标示量％＝供100WWD//C％＝供试品取样量实测药物质量含量％＝供100WDC片数总片重＝Ｗ制剂：原料药：稀释倍数取样量平均片重片粉量上一内容下一内容回主目录返回100g/mlg/100ml%11%11%11LEACLEACCLEAcmcmcm）（）（2）吸收系数法（绝对法）吸光度百分吸收系数液层厚度，cm，如无特别注明，L=1cm可在手册或文献中查到上一内容下一内容回主目录返回盐酸氯丙嗪（规格1ml:10mg，E1%1cm＝915)的含量测定：精密量取本品5ml，置200ml量瓶中，用盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，在254nm波长处测定吸光度为0.469。计算其百分含量。上一内容下一内容回主目录返回3）计算分光光度法：多种，具体按每种药物规定的方法进行如：VA的三点校正法4）比色法加入显色剂后，按照对照品比较法测定。影响显色因素很多，故需注意平行操作。空白溶剂：溶剂+显色剂，同法处理上一内容下一内容回主目录返回三、色谱分析法特点：高灵敏度、高效能、高速度、应用广泛按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱分类按分离方法：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC根据混合物中各组分的色谱行为差异，先行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的方法，是分离分析混合物的最有力手段。上一内容下一内容回主目录返回1.对仪器一般要求固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变其他均可适当改变色谱图20分钟内记录完毕2.系统适用性试验色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)2分离度：R=2（tR2–tR1)/(W1+W2);应大于1.5重复性：对照液连续进样5次，峰面积RSD≤2.0％拖尾因子：T=W0.05h/2Ａ应在0.95～1.05流出方向（一）HPLC法上一内容下一内容回主目录返回（1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量对照品+内标物→对照溶液，进样，测定，计算校正因子3.在含量测定中的应用ssRRAcAcf）校正因子（供试品+内标→供试品溶液，进样，测定供试品和内标物质的峰面积或峰高，计算含量%100%WVDCX含量sSXXCAAfC）含量（上一内容下一内容回主目录返回（2）外标法测定供试品主成分含量供试品→供试品溶液对照品→对照品溶液RXRXAACC）含量（进样，测定，计算含量%100%100%WDAACWDCRXRX含量缺点：不易准确控制进样量，宜用定量环进样上一内容下一内容回主目录返回1.对GC仪器一般要求载气：氮气色谱柱：填充柱或毛细管柱填充柱：内径2～4mm，长1～10m，内装吸附剂高分子多孔小球或涂渍固定液的载体毛细管柱：内径0.2～0.5mm，长10～100m，一般为空心柱，内壁或载体经涂渍或交联固定液检测器：氢火焰离子化检测器色谱图：30分钟内记录完毕（二）GC法色谱适用性实验、测定法：同HPLC上一内容下一内容回主目录返回第二节样品分析的前处理方法第一节定量分析样品的前处理方法一、概述1.结构特征与分析方法之间的关系(2)含金属有机药物(1)含卤素有机药物R-X（F，Cl,Br,I）卤素与脂肪链相连R-X结合较不牢固，不需有机破坏含金属有机药物R-O-Me，有机酸或酚的金属盐/配位化合物；结合不牢固，可直接测定有机金属药物R-Me，结合牢固，适当处理后测定卤素与芳环相连Ar-X结合牢固，需/不需有机破坏COOHIIINHCOCH3CH3CONHCCH3OHCH3CCl3CCHCCOOOFeOMg(C17H35COO)2HgOCOCH3泛影酸三氯叔丁醇富马酸亚铁硬脂酸镁醋酸苯汞上一内容下一内容回主目录返回2.药物分析中常用的分析方法经有机破坏的分析方法不经有机破坏的分析方法上一内容下一内容回主目录返回二、不经有机破坏的分析方法终点：邻二氮菲(+Fe3+)溶于热稀矿酸Fe2+铈量法Ce4+Fe3+指示剂:邻二氮菲(+Fe2+)红色淡蓝色（一）直接测定法例如：富马酸亚铁的含量测定上一内容下一内容回主目录返回（二）经水解后测定法CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH(CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3AgCl↓+NaNO3AgNO3+NH4SCNAgSCN↓+NH4NO3△Mg(C17H35COO)2+H2SO4MgSO4+2C17H35COOHH2SO4+2NaOHNa2SO4+2H2O1.碱水解后测定法适用于X与脂肪链相连的卤代烷烃例如：三氯叔丁醇的含量测定2.酸水解后测定法例如：硬脂酸镁的含量测定上一内容下一内容回主目录返回（三）经还原分解后测定法COOHIIINHCOCH3CH3CONHCOOHH2NNH2+11NaOH+3Zn+3NaI+2CH3COONa+3NaZnO2+3H2ONaI+AgNO3AgI+NaNO3指示剂：曙红钠终点：黄→红适用于Ar-I的药物例如：泛影酸的含量测定上一内容下一内容回主目录返回三、经有机破坏的分析方法－－－－凯氏定氮法34244442)(SOHN42NHSONHHSONHNaOHSOH药物含碱滴定酸吸收液吸收/金属原子、卤素等与C结合牢固者，必须有机破坏药物分析中常用的有机破坏的方法有干法破坏湿法破坏(一)湿法破坏H2SO4-HNO3法H2SO4-HClO4法H2SO4-硫酸盐法H2SO4-H2O2,HNO3-KMnO4法等上一内容下一内容回主目录返回（二）干法破坏2.氧瓶燃烧法测定吸收无机离子有机药物、、、含吸收液、燃烧2OSePSX适用于含卤素、S、P等有机药物分析的前处理，也用于某些药物中Se及砷盐的检查1.高温炽灼法加无水Na2CO3、硝酸镁、氢氧化钙或ZnO以助灰化上一内容下一内容回主目录返回1）仪器装置500ml,1000ml,2000ml,磨口、硬质玻璃锥形瓶2）称样固体样；液体样；软膏类样品要求3）燃烧分解操作法4）吸收液的选择用于X、S、Se等的鉴别、检查、含量测定时多数是H2O或H2O-NaOH；少数为H2O-NaOH-H2O2.上一内容下一内容回主目录返回应用示例：碘苯酯的测定返回上一内容下一内容回主目录返回第三节药品质量标准分析方法验证均需对分析方法进行验证验证内容：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性目的：证明采用的方法适合于相应检测要求。起草药品质量标准生产工艺变更制剂组分改变原分析方法修订上一内容下一内容回主目录返回一、准确度％加入量测得量回收率％＝100是指用该方法测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示（一）含量测定方法的准确度1.原料药：可用已知纯度对照品或供试品进行测定；或与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较上一内容下一内容回主目录返回2.制剂：考察其他组分和辅料对回收率的影响①用含已知量被测物的制剂各组分混合物（包括制剂辅料）进行测定，回收率计算同原料药②向制剂中加入已知量的被测物进行测定③与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较上一内容下一内容回主目录返回（二）具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3,共9个数据来评价回收率；用UV和HPLC法时，一般回收率可达98.0%～