药物血浆半衰期的测定

药理学实验方法的改进——药物血浆半衰期的测定【摘要】目的：探讨药理学实验方法——药物血浆半衰期的测定的实验方法改进。方法：通过改进实验方法，将药物血浆半衰期的测定的实验中的家兔采血方法由耳缘静脉切口取血改为耳中央小动脉取血。结果：改进后的实验方法简单易行，可达到准时、多次、足量采血的实验要求，明显提高了教学效率，使实验结果更准确、稳定。【关键词】改进；实验方法；药物血浆；半衰期11材料与方法1.1材料1.1.1实验动物健康的家兔1只，雌雄不拘，体重为2～4千克。1.1.2实验器材、药品及试剂7号头皮针、三通管、注射器、试管；10%水杨酸钠溶液、10%三氯化铁溶液、500U/ml肝素钠生理盐水溶液；分光光度计、台式离心机。1.2方法1.2.1实验目的根据绝大多数药物在体内按一级动力学消除的规律，用给药后各时间点测出的家兔血药浓度数据测定药物血浆半衰期。1.2.2实验方法1.2.2.1传统实验方法取试管3支，编号，各管加入10%的三氯醋酸3.5ml。取家兔一只，称重，以刀片划破其耳缘静脉，让其自然滴血15~16滴（约1ml），置于1号试管中，搅拌均匀，静置。从家兔耳缘静脉注射10%的水杨酸钠溶液200mg/kg，待药液全部注入后，每隔30分钟，以刀片划破其耳缘静脉，让其自然滴血各15~16滴，置于2号和3号试管中，搅拌均匀。将1、2、3号试管同时离心，速度为3000转/分，离心时间为5分钟。将血浆蛋白沉淀分离，制成清凉的去蛋白血滤液。分别吸取三管中的上清液3ml，依次置于另三个编号的试管中，每管加入10%的三氯化铁溶液0.5ml，摇匀，若血滤液中含水杨酸，即显紫色。以1号管为对照，用分光光度计在520nm的波长下测定给药后各管上清液的光密度值。在半对数座标纸上，以时间为横座标(等方格)，血药浓度为纵座标(对数值)，将测算的浓度值作点连线，即为药时曲线，在此线上找出血药浓度下降一半所对应的时间即为该药的血浆半衰期。1.2.2.2改进实验方法取试管7支，按0～6编号，在0号管加入生理盐水3ml，其余各管均加入生理盐水4ml。取家兔一只，称重，将家兔固定于兔盒中。使用充满肝素的7号头皮针从家兔耳中央的小动脉插入，用输液夹固定。从三通管往小动脉方向注入500U/ml肝素钠生理盐水溶液1ml/kg，致使家兔全身肝素化，以抗凝。用连接在三通管上的注射器反复抽吸3～5次后，从三通管处（动脉方向）准确抽取药前血0.2ml于1号管中作为药前对照管。用注射器从家兔耳缘静脉注入10％水杨酸钠溶液2ml/kg。分别于给药后5、10、20、40、60分钟时，从三通管(动脉方向)准确吸取血样0.2ml于2、3、4、5、6号试管中，摇匀，静置，记录取到血样的时间。因三通管内含有上次残存血样，所以每次取血前应用注射器反复抽吸3～5次。将各试管离心速度为3000转/分，离心时间为5分钟。精确吸取离心后的上清液3ml分别放入另一组编好号的试管中，每管加10％三氯化铁溶液0.2ml，摇匀，使其显色。以0号管为对照，用分光光度计在520nm的波长下测定给药后各管上清液的光密度值。在半对数座标纸上，以时间为横座标(等方格)，血药浓度为纵座标(对数值)，将6次测算的浓度值作点连线，即为药时曲线，在此线上找出血药浓度下降一半所对应的时间即为该药的血浆半衰期。2结果本实验用传统实验方法与改进实验方法均可达到测定药物血浆半衰期的实验效果，但改进后的实验能明显缩短实验所需时间，减小实验误差，实验结果也更准确、稳定。3讨论药物血浆半衰期的测定实验，是药理学教学实验中的一项常规实验，但因为这个实验对象为家兔，对学生动手操作能力要求较高。在传统实验中的家兔耳缘静脉切口采血的方法容易造成家兔多次采血损伤、甚至切口过深，而且采血量并不能次次都达到1ml，若用物理方法（如涂搽酒精、用手术台灯烘烤等）促进其出血则容易延误采血时间点，因此家兔耳缘静脉切口采血的方法并不能达到令人满意的效果。而用家兔耳中央小动脉采血的方法代替家兔耳缘静脉切口采血的方法，改进后的实验方法简单易行，学生只需熟练掌握家兔耳缘静脉注射的操作，也避免了反复切割家兔耳朵造成家兔多次采血损伤、切口过深、延误采血时间点的缺点，用此法采血时只需在7号头皮针上连接一个三通管，再连接一个1ml注射器，即可随时通过打开三通管采血、关闭三通管停止采血，并不会出现采血量不足的问题，而且采血时间可根据实验要求随时调整，这就达到了准时、多次、足量采血的实验要求，因此家兔耳中央小动脉采血的方法在实践中取得了令人满意的效果，明显提高了教学效率，使实验结果更准确、稳定。