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项目十五：药用植物组织培养的基本知识姓名：学号：班级：引言：中国野生药用植物种质资源非常丰富，据统计在5000种以上，但传统的中草药获取方法是以采集和消耗大量的野生植物资源为代价的，当采集和消耗量超过自然资源的再生能力时，必然会导致物种濒危甚至灭绝。近年来，药用植物组织培养技术渗入到了古老的中药研究中，它丰富了传统药用植物研究的内容，借助组织培养，保存和繁殖濒临灭绝的药材资源，保持自然界生物的多样性。（脱毒地黄，使其稳定的增产幅度在90%左右。人参愈伤组织发根培养生产人参皂苷。细胞培养培养含有特殊抗癌活性物质的药用植物红豆杉，提高了天然植株药物活性成分含量。）主要内容：一）、药用植物组织培养的定义、类型和原理1.含义：药用植物组织培养（planttissueculture）即药用植物的无菌培养技术或药用植物的克隆技术，是根据植物细胞具有全能性（totipotency）的理论，利用药用植物体的离体器官、组织或细胞，(如根、茎、叶、花、果实、种子、胚、胚珠、子房、花药、花粉以及贮藏器官的薄壁组织、维管束组织等)，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后分化、生长形成完整植株的过程。简言之，即将植物体的一部分，从母体分离出来，在无菌的适宜条件下培养而使之发育成与母体植株相同的新的植物体的技术。由于培养的是脱离植物母体的培养物，在试管内培养，也叫离体培养或试管培养。2.原理：细胞全能性(指细胞携带着一套完整的基因组并具有产生完整植株的潜在能力。植物细胞全能性为药用植物组织培养的理论基础)3.药用植物组织培养的类型：（根据培养过程，先是初代培养（从植物体上分离外植体进行的第一次培养。），再是继代培养（将初代培养的培养物（愈伤组织、芽等）重新切割转移到新的培养基中继续扩大培养的过程。）1、为什么利用植物的一个花瓣就可以培育出完整的植株？细胞为什么具有全能性？为什么在生物体内的细胞不能表现出全能性？生物的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质,都有发育成完整个体所必需的全部基因。基因在特定的时间和空间条件下选择性表达，细胞分化为不同的组织、器官。根据培养基的状态，分为固体培养、液体培养、半液半固体培养（在培养皿底部先铺一层固体培养基，待凝固后再在其上进行液体浅层培养。固体培养基中的营养成分可以被液体层中的原生质体吸收利用，而原生质体产生的有毒物质可以被固体培养基吸收）根据培养方法有振荡培养、旋转培养和静止培养等。根据培养对象的不同，分为器官培养（胚、花药、子房、根和茎的培养等）、分生组织培养、愈伤组织培养、悬浮细胞培养、原生质体培养等。其中愈伤组织培养是最常见的一种培养方式。二）、相关概念１．外植体（explant）:从植物体上分离下来的用于离体培养活的材料。2.接种：是将已消毒好的根、茎、叶等离体器官，经切割或剪裁成小段或小块，放入培养基的过程。3.培养基（medium）:用于满足植物正常生长发育需要的各种营养物质的总和。其组成：1）、高盐浓度培养基：MS、B5、SH等。适用于多数营养需求量较大的植物。2）、中等盐浓度培养基：Nitsh、Miller等大量元素浓度约为MS的1/2。3）、低盐培养基：WPM、White等。大量元素浓度约为MS的1/4左右。适用于木本植物的培养。4.繁殖系数：也叫增殖率。指每块外植体在一个培养周期内增殖的倍数。5.试管苗：指在无菌离体条件下的人工培养基上，对植物细胞、组织或器官进行培养所获得的再生植株。6.植株再生：指通过组织培养技术将植物的细胞、组织、器官等培养成完整植株的过程。其其它它添添加加物物碳碳水水化化合合物物植植物物生生长长调调节节剂剂有有机机营营养养物物无无机机营营养养物物培培养养基基组组成成7.人工种子（artificialseed）：亦称人造种子或体细胞种子。它是指任何一种经涂膜囊包裹的、裸露的、经过干燥的人工繁殖体。人工种子胚状体8.愈伤组织：原植物在受伤后，于伤口表面形成的一团薄壁细胞。现指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团无序生长的薄壁细胞，多在外植体切面上产生。常见的愈伤组织类型有：（1）结构致密型：表面光滑有光泽，结构致密，多为淡黄色或白色，易于再生芽；（2）结构松散型：多为白色，可以用于悬浮系的建立。（3）胚性愈伤组织：具有产生胚状体能力。（胚状体：亦称体细胞胚。在离体培养条件下，植物离体培养的细胞、组织、器官也可以产生类似胚的结构，其形成也经历一个类似胚胎的发生和发育过程，这种类似胚的结构称为胚状体。成熟的胚状体也可以像合子胚一样长出根、芽，萌发再生植株。）9.分化：是指个体发育过程中，不同部位的细胞形态结构和生理功能发生改变，形成不同组织或器官。10.脱分化（也称去分化）：指离体条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态，形成无组织的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞的过程。11.再分化：离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的变化和明显的机能分化，从而形成各种类型的细胞。三）、药用植物组织培养的优越性1、繁植物速度快，繁殖系数高；2、不受季节限制，可周年大规模工厂化生产；3、经济效益高；4、所用繁殖材料少；5、种苗去除病毒、真菌、细菌等病害；6、能够获得完全具有高度一致而同时具有优良表型的组培苗；查阅资料总结：决定细胞脱分化、再分化的关键因素是什么？植物激素的种类和比例浓度。当细胞分裂素与生长素共同使用时，能强烈促进愈伤组织的形成。当细胞分裂素与生长素浓度比高时，有利于芽的发生；浓度比低时，有利于根的发生。一般情况下外植体越幼小，分化的程度就越低，组织培养的成功率就越高。7、生长快，周期短，重复性好；8、药作植物生理活性物质的生产和次生代谢产物的生产。四）、药用植物组织培养的应用1、药用植物的快速繁殖；2、去除病毒；3、药用植物育种；4、药用植物有效成分的形成和生产；5、种质资源的离体保存五）药用植物组织培养的一般过程1.选取植物种类和组织器官作为培养对象2.母液及培养基配制3.无菌接种（外植体消毒、无菌苗继代培养）4.无菌条件培养（诱导、增殖、生根）5．炼苗移栽六）植物组织培养需要哪些培养条件？①营养物质②激素③环境条件调查亳州地区药用植物组织培养应用的实例？（3—5例）