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摘要：Ascosphaera属真菌是影响蜂类幼虫成活率的主要疾病——白垩病的病原物。本研究根据GenBank收录的Ascosphaera属中20个种的核糖体DNA（rDNA）的内部转录间隔区ITS1和ITS2及5.8S（ITS1-5.8S-ITS2）区段序列资料，分别设计Ascosphaera属的和种的高特异性引物，构建一套以PCR为基础的Ascosphaera属和种的快速、可靠的鉴定方法，并对本实验室保存的9个不同来源的菌株进行鉴定。结果表明，Ascosphaera属和A.apis种特异引物可以扩增出稳定特异条带，A.aggragata种特异引物还需要进一步优化。（空一行）关键词：白垩病球囊菌特异性引物PCR鉴定（空二行）引言1.1蜜蜂白垩病的发生现状白垩病（Chalkbrood）又名“石灰子病”、“石灰质病”等，是当前养蜂生产上危害严重的一种顽固性真菌传染病[1]。蜜蜂白垩病是蜜蜂球囊菌（Ascosphaeraapis）引起的，该病最早是1913年由Massen在德国发现的[2]，其后该病很快蔓延至许多国家。1968年以前主要发现在欧洲各国，但到1970年以后迅速传播至美国、加拿大、日本等地[4,6]。1.2蜜蜂白垩病发生症状蜜蜂白垩拖出巢地面可看见石灰块状尸体。……1.5蜜蜂白垩病的防治蜜蜂白垩病的防治各学者提出不同方法，……1.5.1预防措施从大量观察的情况表明，凡是巢内饲料不足的蜂群、……1.6球囊菌属中种的鉴定研究进展目前自然界中所发现的Ascosphaera属孢囊真菌有22种[14-15]，都与Apoidea总科的社的腐生物[16]。（空一行）2材料与方法2.1材料2.1.1菌株……（空一行）3结果与分析3.1菌丝体基因组DNA的提取对9个采自不同地区的菌……要求。3.2高特异性引物的设计参照文献[23]所列的Ascosphaera属中20个种的ITS1-5.8S-ITS2rDNA区段序列，通过比特异性引物，1a-F2/AscoA112、3-F1/AscoA112和1b-F1/AscoA112分别为A.aggregata、A.apis和A.proliperda的高特异性引物。（空一行）4讨论（1）根据Ascosphaera属的ITS1-5.8S-ITS2rDNA序列资料设计的属高特异性引物，在Ascosphaera属中获得了理想的结果，说明该标记……Andersonetal.的研究发现，A.apis与EremascusalbusEidam有着较近的亲缘关系[23]。由于实验材料所限，在本研究中我们没能做这方面的对照研究。（2）本实验的结果中看出，…………（4）本实验……（空一行）参考文献[1]赵磊,杨永红,冯源.白垩病研究进展[J].中兽医医药杂志,2006,（2）:62-64.……[8]邵瑞宜,王丽华,赵安法,等.蜜蜂白垩病病原观察及其综合防治措施[J].福建农业大学学报,1997,26(3):345-348.[9]周顺伍.动物生物化学[M].北京:中国农业出版社,1999.178-253.