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硫酸－苯酚法测定多糖含量标准曲线实验序号试剂12345678葡萄糖标准液00.10.20.30.40.50.60.7蒸馏水1.00.90.80.70.60.50.40.35%苯酚1.01.01.01.01.01.01.01.0振摇混匀浓H2SO46.06.06.06.06.06.06.06.0迅速振摇混匀，于室温放置30min后测定490处吸光度葡萄糖浓度（横坐标）0.00.01250.0250.03750.050.06250.0750.0875吸光度A（纵坐标）调01、葡萄糖标准液（0.1mg/mL）:精密称取无水葡萄糖10mg，用蒸馏水定容到100mL，混匀。2、5%苯酚：精密称取重结晶苯酚10g，用蒸馏水定容到200mL，混匀棕色瓶保存。硫酸－蒽酮法测定多糖含量标准曲线实验序号试剂1234567葡萄糖标准液00.20.40.60.81.01.2蒸馏水2.01.81.61.41.21.00.8蒽酮试剂6.06.06.06.06.06.06.0混匀，置于沸水中加热15min，取出放冷水中15min后测定625处吸光度葡萄糖浓度（横坐标）0.00.0250.050.0750.10.1250.15吸光度A（纵坐标）调01、葡萄糖标准液（0.1mg/mL）:精密称取无水葡萄糖10mg，用蒸馏水定容到100mL，混匀。2、蒽酮试剂：称取蒽酮0.2g，用浓H2SO4定容到100mL，混匀。临用时现配。3、苯酚－硫酸法测定葡萄糖标准曲线试剂序号空白123456789标准G0.00.10.20.40.60.81.01.21.41.6蒸馏水2.01.91.81.61.41.21.00.80.60.45%苯酚1.01.01.01.01.01.01.01.01.01.0混匀浓硫酸5.05.05.05.05.05.05.05.05.05.0振摇5min,静置于10min，沸水20min冷却，490nm空白调出，比色葡萄糖浓度0．00．01250．0250．050．0750．10．1250．150．1750．20吸光度A0．04、试剂：5、1、标准G（0.1mg/mL）:精确称取105℃干燥恒重的葡萄糖10mg，加水定容到100mL。6、2、5%苯酚：精确称取10重结晶苯酚5g，加水定容到100mL7、8、9、黄酮标准曲线的制备试剂序号空白123456芦丁0.00.51．02．03．04．05．05％亚硝酸钠0．30．30．30．30．30．30．3静置于6min10％硝酸铝0．30．30．30．30．30．30．3静置于6min4％氢氧化钠444444460%乙醇（到10ml）5．44．94．43．42．41．40．4摇匀，放置15min，在51Onm处测定其吸光度值；样品浓度00．010．020．040．060．080．1吸光度A10、1、芦丁对照品溶液精密称取120℃干燥至恒重的芦丁20mg，加入60%乙醇（提取剂浓度一至）溶解，定容至100ml容量瓶中，摇匀，制成0.2mg/ml的芦丁对照品溶液。11、12、13、多酚测定14、1.1.3试剂及溶液没食子酸、酒石酸钾钠、硫酸亚铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、石油醚、乙醇等均为国产分析纯。本试验用水均为双蒸水。15、各种溶液的配制：16、（1）没食子酸母液：精确称取没食子酸500mg，溶于蒸馏水中，定容至100mL作为母液，分别吸取2.5、17、5、7.5、10、12.5、15mL于25mL容量瓶中，用蒸馏水定容，制备成0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3mg/mL的标准液。18、（2）pH7.5磷酸缓冲液1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液（A液）：称取磷酸氢二钠（GB1263）23.877g，加水溶解并定容至1L。1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液（B液）：称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钾（GB1274）9.073g，加水溶解并定容至1L。19、取A液85mL和B液15mL混匀，即得pH7.5的缓冲液。20、（3）酒石酸铁溶液：称取硫酸亚铁（GB664）0.1g，酒石酸钾钠（GB1288）0.5g，加水溶解定容至100mL，此液可稳定10天。21、1.3多酚的提取22、1.3.1标准曲线的绘制吸取不同浓度的标准液和对照品160μL于5mL离心管中，加入酒石酸铁溶液800μL，23、加磷酸缓冲液至4mL，用水代替没食子酸作为对照，用1cm的比色皿，在540nm处测定吸光度（A），用吸24、光度与对应的浓度进行线性回归，得标准工作曲线，如图1所示。25、实验结果表明对于橄榄干粉多酚的提取，其最优组合为A2B2C1D2，即以50%乙醇溶液为提取剂，在40℃条件下浸提2h，料液比为1:30，提取2次，此时的橄榄干粉多酚提取得率为32.13%。多酚标准曲线的制备试剂序号空白123456没食子酸0.00.10．20．30．40．50．6蒸馏水0.16酒石酸铁溶液0.80.80.80.80.80.80.8磷酸缓冲液1111111摇匀，在540nm处测定其吸光度值样品浓度mg/mL00．0010．0020．0030．0040．0050．006吸光度A