PBS缓冲溶液的配制

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资源描述

PBS标准配方如下(1L):成分分子量终浓度(mM)用量(g)近似用量(g)半数用量(g)NaCl58.441378.0068.004.00KCl74.5512.70.2010.200.10Na2HPO4·12H2O358.14103.5813.581.79KH2PO4136.0861.760.2400.240.12理论上需要调pH,但在实际操作中,用蒸馏水或者超纯水配制后,pH在7.3左右,所以通常不用调pH。10×PBS配方如下(1L):成分近似用量(g)NaCl80.0KCl2.0Na2HPO4·12H2O35.8KH2PO42.410×PBS保存于4℃时,会析出晶体,且不易复溶,因此10×PBS要在室温保存。PBS在室温保存时容易长菌,应保存于4℃。关于PBS配方的比较与讨论:我们平时会用到PBS,但网上PBS的配方有多种,不知如何选择?参考一:看你的用途了。配方虽然有多种,但在“等渗”这个概念上相差都不大。常见的配方一般有三种:1、0.9%的生理盐水有些人也把它叫做PBS,实际上是错误的概念,它并没有“PB”,没有缓冲能力,纯化少用。2、pH7.3,137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,1.8mMKH2PO4。经验证,这种配方是没有办法加钙离子和镁离子的,会形成沉淀。此配方为0.01M的PBS,所对应的质量分别为8gNaCl,0.2gKCl,1.44g(1.42g)Na2HPO4和0.24g(0.27g)KH2PO4。考虑到Na2HPO4通常为Na2HPO4·12H20,所以应该加3.58g。(修正过的)。这个配方比较常用的,含K,特别在分子生物学上常用。通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na离子或K离子的浓度,Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100u/ml青霉素和链霉素之后再调pH、定容、灭菌消毒。3、pH7.2~7.4,20mMPB,150mMNaCl这个配方是蛋白质纯化常用的PBS,配制起来比较方便。具体到称量方面,要注意试剂是否有结晶水,分子量是不同的。参考二:关键看用途,如果是要活性,要考虑你的目的蛋白在什么样的环境下稳定,主要是掌握好钠钾平衡和生理状态下离子强度,在此前提下有一定的缓冲能力。参考三:PBS是phosphate-bufferedsaline的意思。看看下面这个,或许对你有用ApplicationsPBShasmanyusesbecauseitisisotonicandnon-toxictocells.Itcanbeusedtodilutesubstances.Itisusedtorinsecontainerscontainingcells.PBScanbeusedasadiluentinmethodstodrybiomolecules,aswatermoleculeswithinitwillbestructuredaroundthesubstance(protein,forexample)tobe'dried'andimmobilizedtoasolidsurface.Thethinfilmofwaterthatbindstothesubstancepreventsdenaturationorotherconformationalchanges.Carbonatebuffersmaybeusedforthesamepurposebutwithlesseffectiveness.PBScanbeusedtotakeareferencespectrumwhenmeasuringtheproteinadsorptioninellipsometry.Additivescanbeusedtoaddfunction.Forexample,PBSwithEDTAisalsousedtodisengageattachedandclumpedcells.Divalentmetalssuchaszinc,however,cannotbeaddedasthiswillresultinprecipitation.Forthesetypesofapplications,Good'sbuffersarerecommended.PreparationTherearemanydifferentwaystopreparePBS.Someformulationsdonotcontainpotassium,whileotherscontaincalciumormagnesium.Oneofthemostcommonpreparationsisdescribedbelow.ThesimplestwaytoprepareaPBSsolutionistousePBSbuffertablets.TheyareformulatedtogiveareadytousePBSsolutionupondissolutioninaspecifiedquantityofdistilledwater.Theyareavailableinthestandardvolumes:100,200,500and1000ml.A10literstockof10xPBScanbepreparedbydissolving800gNaCl,20gKCl,144gNa2HPO4and24gKH2PO4in8Lofdistilledwater,andtoppingupto10L.ThepHis~6.8,butwhendilutedto1xPBSitshouldchangeto7.4.Whenmakingbuffersolutions,itisgoodpracticetoalwaysmeasurethepHdirectlyusingapHmeter.Ifnecessary,pHcanbeadjustedusinghydrochloricacidorsodiumhydroxide.Ondilution,theresultant1xPBSshouldhaveafinalconcentrationof137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMSodiumPhosphatedibasic,2mMPotassiumPhosphatemonobasicandapHof7.4.AnotherpreparationisdescribedinMolecularCloningbySambrook,FritschandManiatis,ApendixB.12asfollows:For1litreof1xPhosphate-bufferedsaline(1xPBSbuffer)use:-Dissolvein800mlofdistilledH2O:-8gofNaCl(137mM)-0.2gofKCl(2.7mM)-1.44gofNa2HPO4(10mM)-0.24gofKH2PO4(1.76mM)-AdjustthepHto7.4withHClorNaOH-AddH2Oto1liter.Dispensethesolutionintoaliquotsandsterilizethembyautoclaving(20min,121℃,liquidcycle).Storeatroomtemperature.参考四:含钾盐的PBS应该和生理条件最为接近,可能是保持某些生物大分子功能性的要求,如酶的活性。而在蛋白质纯化过程中,钠盐或钾盐所提供的就是离子强度,从方便性考虑,用一种就够了。钠盐最普通,就选择氯化钠了。但也不是绝对的,在GST亲和柱纯化中所用的平衡缓冲液就是含钾盐的PBS,可能因为它的结合是酶和底物之间的关系吧。PBS(Phosphate-bufferedSaline)分子克隆上的配方NaCl8g137mMKCl0.2g2.7mMNa2HPO41.44g10mMKH2PO40.24g2mM溶到800ml蒸馏水中,用HCl调pH到7.4,然后加水补充到1000ml,15psi(1.034×105)20min高压灭菌或者滤膜除菌,室温保存。一般用于实验室中的PBS缓冲液都是这样配制,而不用摩尔分数表示。分子克隆上补充“PBS是一种通用试剂。值得指出的是本文列出的配方缺乏双价阳离子,如果需要,PBS可以补加成1mMCaCl2和0.5mMMgCl2”。但本人在试验过,加入后立马形成沉淀,不明何故。免疫学手册上的配方:NaCl19.00g154mMNa2HPO41.15g8.1mMNaH2PO40.23g1.9mM加水900ml调pH7.2~7.4再加水补充到1L0.05M储存液NaCl100.00gNa2HPO412H2O66.15gNaH2PO4H2O6.66gKCl4.50g加双蒸水至4500ml,用HCl或NaOH调pH到7.4即可。使用时稀释5倍,即0.01M。PBS(0.1M,pH7.4)贮存液配方(10倍浓缩)NaCl80gNa2HPO412H2O32.3gNaH2PO42H2O4.5g加蒸馏水至1000ml或者NaCl80gNa2HPO42H2O11.5gKH2PO42gKCl2g加蒸馏水至1000ml天津百浩生物科技有限公司PBS(0.01M)NaCl8gNa2HPO4·12H2O2.9gNaH2PO4·2H2O0.2964g加蒸馏水至1000mltakara公司:与分子克隆基本相同,不同之处为Na2HPO41.42g(分子克隆是1.44g),并且也提示可以加入钙镁离子。

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