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第十七章临床常用免疫学检查一、血清免疫球蛋白测定【原理】免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）是一组具有抗体活性的球蛋白，由B淋巴细胞受抗原刺激后增殖分化形成的浆细胞合成和分泌，存在于人体的血液、体液、外分泌液及某些细胞（如淋巴细胞）膜上。应用免疫电泳和超速离心分析，可将Ig分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五类。IgG主要由脾脏和淋巴结中浆细胞合成与分泌，约占血清中Ig的70％～80%，是唯一能够通过胎盘的Ig。血清中80％的抗细菌、抗病毒、抗毒素抗体属于IgG。IgA分为血清型IgA与分泌型IgA(slgA）两种。血清型IgA占血清中Ig的10％～15％;分泌型IgA由呼吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴样组织大量合成，在外分泌液系统中发挥其重要的免疫功能。IgM是分子量最大的Ig，占血清中Ig的5％～10％。是机体受抗原刺激后最先产生的抗体，其杀菌、溶菌、溶血、促吞噬及凝集作用比IgG高500～1000倍，在机体早期的免疫防御中占有重要地位。IgD在正常人血清中仅占Ig的0.02％～1%，且极易被纤溶酶和（或）胰蛋白酶水解。已发现有些抗核抗体、抗基底膜抗体、抗甲状腺抗体和抗链球菌溶血素“O”抗体等属于IgD。IgE主要由消化道、上呼吸道黏膜下浆细胞分泌，在血清中是最少的一种抗体(0.002%）。IgE是亲细胞抗体，在Ⅰ型变态反应性疾病的发病中具有重要作用。【参考值】单项免疫扩散法（RID）:IgG7.6～16.6g/L;IgA0.71～3.3g/L;IgM0.48～2.12g/L。酶联免疫吸附法（ELISA):IgD0.6～2.0mg/L;IgE0.1～0.9mg/L。【临床意义】1.Ig减低见于各类先天性和获得性体液免疫缺陷、联合免疫缺陷的病人及长期使用免疫抑制剂患者。此时五种Ig均有降低。2.Ig增高（1）单克隆性增高：表现为五种Ig中仅有某一种Ig增高而其他Ig不增高或可降低，主要见于免疫增殖性疾病。如：①原发性巨球蛋白血症时，表现为IgM单独明显增高；②多发性骨髓瘤时可分别见到IgG、IgA、IgD、IgE增高，并据此分为IgG型、IgA型、IgD型和IgE型多发性骨髓瘤；③过敏性皮炎、外源性哮喘及某些寄生虫感染可表现为IgE增高。（2）多克隆性增高：表现为IgG、IgA、IgM均增高。常见于各种慢性感染、慢性肝病、肝癌、淋巴瘤以及系统性红斑狼疮（IgG、IgA或IgG、IgM同时升高）、类风湿性关节炎(IgM增高为主）等自身免疫性疾病。二、血清补体的检查补体（complement,C）是血清中具有酶活性的一组不耐热的大分子球蛋白。补体由三组球蛋白大分子组成：第一组分由9种球蛋白大分子组成，即C1～C9，其中C1还有3个亚单位，即C1q、C1r和C1s；第二组分包括B因子、D因子和P因子等；第三组分包括C1抑制物、I因子、H因子、C4结合蛋白、过敏毒素灭活因子等。补体分子分别由肝细胞、巨噬细胞以及肠系膜上皮细胞等多种细胞分泌，它的产生与抗原刺激无关，但可被抗原-抗体的复合物所活化而产生溶菌和溶细胞现象，亦参与破坏自身组织或自身细胞而造成的免疫损伤。（一）总补体溶血活性（totalhemolyticcomplementactivity,CH5）测定【原理】补体系统能被溶血素致敏的绵羊红细胞（抗原-抗体复合物）所激活，导致补体的连锁性活化，引起致敏绵羊红细胞溶解（溶血）。补体活性与溶血程度之间在一定范围内(20％～80％溶血率）呈正相关系，故一般以50％溶血作为终点（即CH50）较为准确。【参考值】试管法：5万～10万U/L。【临床意义】主要反映补体经典激活途径（C1～C9）活化的活化程度。①CH50增高：见于各种急性炎症、组织损伤和某些恶性肿瘤，妊娠时亦可见升高。②CH50减低意义更大，见于补体成分大量消耗，如血清病、链球菌感染后肾小球肾炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血、类风湿性关节炎及同种异体移植排斥反应等；也见于补体大量丢失，如外伤、手术和大失血的病人；还可见于补体合成不足，如肝硬化、慢性肝炎和重型肝炎等。（二）血清C3测定【原理】C3是一种β2球蛋白，主要由肝细胞合成与分泌，是血清中含量最多的补体成分，无论经典途径还是旁路途径C3都参与，因而可以反映出补体的活化情况。【参考值】免疫比浊法：0.85～1.70g/L。【临床意义】由于C3在经典激活途经与旁路激活途经中均发挥重要作用，所以C3的检查对于反映非特异性免疫相关疾病更具意义。①C3增高：C3作为急性时相反应蛋白，在各种急性炎症、传染病早期、某些恶性肿瘤（以肝癌最明显）病人及排异反应时增高。②C3减低可作为肾脏病的鉴别诊断：如70％以上的急性肾小球肾炎病人（病程≤6周）血清C3减少，这对一些轻型、不典型急性肾炎的诊断有帮助；85％以上的链球菌感染后肾炎患者血清C3下降，而病毒性肾炎患者则85％以上的病例血清C3含量正常，这有助于肾炎的病因鉴别；78％的狼疮性肾炎患者血清C3减低，当治疗后病情转为稳定时C3含量又恢复正常。三、细胞免疫检查淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群体，人体的淋巴细胞分为T细胞、B细胞、K细胞（killercell）和NK细胞（naturalkillercell）等细胞群，它们又分别有若干亚群，各有其特异的表面标志和功能。临床上各种免疫病均可出现不同群淋巴细胞数量和功能的变化，对它们进行检查可用以判断细胞免疫功能。（一）T细胞免疫检测1.T细胞花结形成试验【原理】T细胞表面具有特异性绵羊红细胞（SRBC）受体，可与绵羊红细胞结合形成玫瑰花结样细胞，称为红细胞玫瑰花结形成试验E玫瑰花结形成试验（erythrocyterosetteformationtest,ERFT）。以黏附3个或3个以上绵羊红细胞者为花结形成细胞。本试验所得花结的百分率，基本代表了被检标本中T细胞占淋巴细胞的百分率。【参考值】64.4％±6.7％。【临床意义】升高见于：甲状腺功能亢进症、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无力、中度慢性肝炎、系统性红斑狼疮活动期及器官移植排斥反应等。降低见于：免疫缺陷性疾病，如AIDS、联合免疫缺陷病等。亦见于恶性肿瘤、系统性红斑狼疮、麻疹、流感等病毒感染，以及放疗、化疗和应用糖皮质激素等。2.T细胞转化试验【原理】T淋巴细胞表面存在着有丝分裂原受体，在有丝分裂原如植物血凝素(PHA）、刀豆蛋白A(ConA）、美洲商陆（PWM）等作用下，T淋巴细胞代谢活跃，蛋白质、RNA和DNA的合成增加，从而转化为淋巴母细胞，部分细胞发生有丝分裂。可依照形态学方法计数淋巴细胞及转化母细胞数，求出转化百分率。也可以用放射免疫的方法反映转化情况，以刺激指数（SI）表示，反映T细胞的免疫功能。【参考值】形态学法：转化百分率为60.1％±7.6.％。3H-TdR掺入法：正常SI2。【临床意义】①判定机体细胞免疫功能：转化率降低，见于细胞免疫缺陷或细胞免疫功能低下患者，如恶性肿瘤、重症结核、重症真菌感染、慢性肝病及接受放疗、化疗或应用免疫抑制剂治疗等。②判定疾病的疗效和预后：如恶性肿瘤经治疗后，T细胞转化率升至正常，提示治疗有效，反之则预后不良。3.T细胞分化抗原测定【原理】白细胞（包括血小板、血管内皮细胞等）在正常分化成熟和激活过程中细胞表面存在被单克隆抗体（monoclonalantibodies）识别膜表面分子，称为分化抗原（clusterofdifferentiating,CD分子）。T细胞是由一群功能不同的异质性淋巴细胞组成，在镜下按形态难以区分，但借助于其细胞膜表面分子具有不同的抗原性（有100多种特异性抗原）加以区别，现已制备了多种单克隆抗体。CD分子是主要的T细胞分化抗原，比较明确地表达在T细胞表面的CD分子有CD2、CD3、CD4、CD8，等。应用这些细胞的单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后，再与荧光标记二抗（兔或羊抗鼠IgG）反应（免疫荧光法），用荧光激活细胞分离仪（FACS）进行分析，计数CD阳性细胞的百分率。【参考值】CD3+T细胞：61％～85%CD4+T细胞：28％～58％。CD8+T细胞：19％～48％。CD4+T细胞／CD8+T细胞比值为：1.66±0.33（1）。【临床意义】(1)CD3+T细胞：CD3+T分子表达于所有成熟T淋巴细胞表面，是T细胞表面所特有的标志，能反映T细胞总数的变化。CD3+T细胞降低见于免疫缺陷性疾病，如AIDS、联合免疫缺陷病等，亦见于恶性肿瘤、系统性红斑狼疮、采用放疗及化疗或应用免疫抑制剂等。CD3+T细胞升高见于甲状腺功能亢进症、慢性淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无力、中度慢性肝炎及器官移植后排斥反应等。(2)CD4+T细胞：辅助性T细胞（Th）表面表达CD4分子。CD4分子是人类免疫缺陷病毒（HIV）主要受体。CD4+T细胞降低见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、巨细胞病毒感染、全身麻醉、严重创伤及应用免疫抑制剂等。CD4+T细胞升高见于类风湿性关节炎活动期。(3)CD8+T细胞：CD8分子是抑制、杀伤性T细胞的标志，CD8+T细胞减低见于类风湿性关节炎、重症肌无力、2型糖尿病、膜性肾小球肾炎等；CD8+T细胞升高见于传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、慢性乙型肝炎等。(4)CD4+T细胞／CD8+T细胞比值：降低常见于AIDS（常＜0.5）、恶性肿瘤进行期和复发时，亦见于传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染等。增高见于类风湿性关节炎活动期、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、重症肌无力、膜性肾小球肾炎等。器官移植后CD4+T细胞／CD8+T细胞比值动态增高，预示可能发生排斥反应。（二）B细胞免疫检侧B淋巴细胞是机体免疫系统的抗体产生细胞，其表面有多种表面抗原和表面受体。表面抗原主要包括CD19、CD20、CD22等；表面受体主要包括B细胞抗原受体（BCR）、补体受体(CR）及Fc受体等。1．红细胞-抗体-补体花结形成试验【原理】B细胞表面存在着膜表面免疫球蛋白（Smlg）、Fc受体和补体受体等。鸡（羊）红细胞经相应的抗红细胞抗体（EA）致敏后，当与B细胞混合时，EA的Fc段与B细胞表面Fc受体结合所形成的花结样细胞称为EA花结形成细胞（EA-RFC）。如在EA致敏红细胞中再加人补体，与B细胞表面的补体受体结合，则形成EAC花结形成细胞(EAC-RFC）。B细胞表面还具有小鼠红细胞受体，能与小鼠红细胞结合，形成鼠红细胞花结（M-RFC）。这组试验总称为红细胞-抗体-补体花结形成试验（erythrocyte-antibody-complement–rosetteformationtest）。【参考值】EA–RFC:8％～12%;EAC–RFC:8％～12%;M-RFC:8.5％±2.8％。【临床意义】降低见于：免疫缺陷性疾病，如原发性和继发性免疫缺陷病等，尤以M-RFC降低更明显。升高见于：淋巴增殖性疾病，如慢性淋巴细胞白血病、多毛细胞白血病等。2.B细胞分化抗原测定【原理】CD19和CD20分子是B细胞特有表面标志，存在于前B细胞、未成熟B细胞和成熟的B细胞表面，其主要功能是调节B细胞活化。CD19是全部B细胞共有的表面抗原，B细胞活化后不消失，是最重要的B细胞标记分子。CD20在B细胞激活后消失。CD22分子只存在于成熟的B细胞中。应用CD19、CD20和CD22等单克隆抗体，分别与B细胞表面抗原结合，通过免疫荧光法、免疫酶标法或流式细胞术进行检测，分别求出CD19、CD20和CD22等阳性细胞百分率和B淋巴细胞数。主要检测CD19。【参考值】荧光激活细胞分离仪（FACS):CD1911.7％±3.37％。【临床意义】CD19+细胞升高见于B细胞系统恶性肿瘤；CD19+细胞降低见于体液免疫缺陷病及使用化疗或免疫抑制剂后。四、感染免疫检测病原体及其代谢产物（抗原）刺激人体免疫系统可产生相应的抗体，采用现代检验手段对抗原、抗体进行检测，有利于感染性疾病诊断。包括：①特异性试验，即所用的抗原为病原体特异性抗原（整个病原体、病原体成分或产物），为较常用的方法；②非特异性