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血凝的基本知识一、定义：血液凝固（凝血）形态：血液由液体状态转变为凝胶状态。本质：纤维蛋白原（可溶）变为纤维蛋白（不溶）。基本学说：凝血瀑布学说（血液凝固是一系列凝血因子酶反应过程；每个凝血因子都被其前一因子所激活；最后激活凝血酶原生成凝血酶；凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，生成纤维蛋白凝块。二、凝血功能的常规检测手段（检测凝血功能是否正常）：1、Prothrombintime（PT）-凝血酶原时间测定（外源性凝血途径检测）。2、ActivatedPartialThromboplastinTime（APTT）-活化部分凝血活酶时间测定（内源性凝血途径检测）。3、ThrombinTime（TT）-凝血酶时间测定（共凝血途径检测）4、特殊物质检测（检测引起凝血功能异常的原因）：Fibinogen（FIB）-纤维蛋白原测定。以上即为血凝常规四项检测。PT、APTT、TT为定性检验，FIB为定量检测。三、凝血酶原时间测定（PT）1、原理：PT试剂中主要含组织因子（TF）和Ca2+，试剂中加入血浆后，TF和Ca2+与血浆中Ⅶ因子，形成TF-Ⅶa-Ca2+复合物，启动外源性凝血途径。最后使凝血酶原形成凝血酶，凝血酶可使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白。纤维蛋白的交联、聚合成凝胶状态。记录凝固时间，即为PT检测结果，一般以S表示。2、PT检测的临床应用1）PT检测用于筛选评估外源性凝血途径各因子是否正常。2）监控口服抗凝药病人的凝血功能：口服抗凝药治疗时间比较长，治疗过程血药监控；剂量增加或减少，回引起出血或凝血；口服抗凝药治疗病人的治疗剂量、治疗时间由PT检测决定，一般要控制在INR2.0~3.0之间。INR（InternationalNormalizedRatio）国际标准化比值INR=（数）正常人血浆常人血浆P）待测测血浆PT值（秒）ISI3、PT的ISI值：ISIInternationalSensitivityIndex——国际敏感指数ISI值是生产厂商生产的PT试剂与国际标准PT试剂测值相比的值，凡是出厂的PT试剂必须标明其正确的ISI值。如果ISI=1，则表示该试剂敏感度与国际标准试剂测值一致；ISI值越大，则表明该试剂越不敏感。目前国内冻干PT试剂的ISI值标识基本都不精确，而且偏高，大部分厂家的ISI值大于1.3。如果ISI＞1.6，则说明该PT试剂敏感性太低，不建议使用。4、选择PT试剂的要点：1）ISI值：ISI≤1.2最好ISI≤1.4一般ISI＞1.6不建议使用2）试剂成分来源：重组组织因子（基因工程方法）最好（我公司和DADE，长岛）人胚胎组织（DADE）新鲜兔脑粉（库尔特（贝克曼）、STAGO、太阳）陈旧兔脑粉（大多数国产PT冻干试剂）3）开瓶后稳定性我公司PT试剂：开瓶后37℃稳定10天以上同行冻干试剂：开瓶后37℃稳定8小时建议：随着技术的发展，目前已经解决了PT试剂的稳定性问题，所以用户可以放心的使用PT液体试剂，而且，PT液体试剂具有冻干试剂无可比拟的优点：第一：稳定性好，用户不必担心一瓶试剂万一当天不能用完，开瓶后2-8℃一个月内可放心使用。第二：批间差差异微小：彻底解决了冻干试剂由于受原料限制而导致的批间差大的问题。第三：全液体试剂，均一稳定，无需复溶。四、活化部分凝血活酶时间测定试剂（APTT）1、原理：1）主要成分：鞣花酸或白陶土、磷脂、钙离子。2）鞣花酸或白陶土均为带负电荷异物，能激活待测血浆中Ⅻ因子，启动内源性凝血途径。3）磷脂代替血小板磷脂（待测血浆为贫血小板血浆）。4）加入氯化钙，根据瀑布学说原理：Ⅸ、Ⅺ、Ⅷ因子等参与了反应，最后形成FlXa—Ⅷa—Ca2+磷脂复合物；此复合物又能激活因子X，形成凝血活酶。5）凝血活酶又使凝血酶原转变为凝血酶。6）凝血酶使纤维蛋白原变成纤维蛋白而凝固。7）加入氯化钙后，记录血浆从流动状态到凝固状态所需的时间即为活化部分凝血活酶时间。2、临床应用：1）临床上对静脉注射肝素抗凝治疗的病人必须进行APTT检测，以便监控。2）APTT的值应控制在1.5-2.5×基础秒数基础秒数-肝素治疗前的APTT秒数。不同的试剂，对肝素敏感度不同，白陶土试剂对肝素敏感，鞣花酸试剂使用方便，所以大多数用户选用鞣花酸试剂。3、国内APTT试剂（白陶土）现状：目前，只有贝克曼库尔特、上海长岛、我公司提供液体白陶土试剂。我公司APTT试剂稳定性好，开瓶后37℃稳定20天以上。五、凝血酶时间测定试剂（TT）1、原理：凝血酶使纤维蛋白原变成纤维蛋白而凝固。TT的测定不同于PT、APTT，血浆本身的凝血因子除了纤维蛋白原外，均未参加反应。2、临床应用：1）鉴定是否有抗凝物质如肝素、抗凝血酶Ⅲ等的存在。2）鉴定纤维蛋白原的质、量是否异常。注意：TT没有国际标准，生产厂家根据自己的试剂给出一个正常范围。检测时，试剂与血浆的比例，不同厂家会有所不同，正常范围也不同，应以说明书为准。3、我公司TT试剂稳定性好，开瓶后37℃稳定12天以上。六、纤维蛋白原测定试剂（FIB）：1、原理：过量凝血酶加入待测血浆，凝固时间与纤维蛋白原含量成反比（双对数）2、测定方法：1）直接法：取已知靶值纤维蛋白原参比血浆，用缓冲液稀释成不同浓度，测定各浓度凝固时间，然后在双对数图上做图，横坐标为浓度，纵坐标为时间，应为直线。我公司可提供我公司FIB测定试剂的标准曲线（根据用户需求，有些用户不愿意自己做标准曲线）。样本测定：1/10稀释血浆（1份血浆+9份缓冲液）测得凝固时间，在曲线上从纵坐标找到凝固时间，从此点画一平行于横坐标的直线与曲线相交，此交点垂直于横坐标的交点，即为该样本的FIB浓度。全自动、半自动血凝仪输入标准曲线后可自动给出所测样本的FIB浓度。2）衍算法：也称间接法，即在测定PT时，用PT的值计算出FIB含量。单该法不准确，逐渐会被淘汰。3、我公司标准曲线相关性r≥0.995.开瓶后37℃稳定12天以上。FIB有国际标准：WHO标准品98/612；可追溯性。七、同行厂家：1、国内：1）上海太阳：市场占有量最大，以干粉试剂为主，目前已经推出液体试剂，逐步淘汰干粉试剂。2）上海太阳：全液体试剂，试剂质量好，目前，只有长岛和我公司PT试剂为基因工程重组原料。为美国太平洋中国总代理（天津美德太平洋的进口试剂即从长岛处获得）。3）保定天岳：全液体试剂，质量一般，PT试剂为兔脑粉液体试剂，不稳定。无APTT白陶土试剂。4）厦门信道：全液体试剂，试剂质量中等，PT试剂为兔脑粉液体试剂。5）武汉中太：冻干试剂，质量中等。6）西安交大开元：冻干试剂，质量中等。7）陕西方舟：冻干试剂，质量中等。8）北京中勤世帝：采用部分法国技术，主要配套他们自己的仪器。9）北京普利生：OEM长岛试剂，主要配套他们自己的仪器。10）南昌百特：07年推出血凝试剂，质量没有做对比。11）四川麦克：06年底推出血凝试剂，质量未知，没有做对比。12）长春曼特诺：质量一般。2、国外同行：1）DADE试剂：配套东亚CA系列全自动血凝仪，市场占有量大，试剂质量好，我公司血凝试剂在CA500系列血凝仪上与该试剂做过对比，相关性良好。2）STAGO试剂：配套STAGO血凝仪，试剂质量优异，是血凝业界的佼佼者。3）德国美创：号称第一家把全液体血凝试剂引入中国（没有求证），质量好，既卖试剂也卖仪器。4）美国太平洋：第一家全液体血凝试剂，血凝检验的革命者，首先采用基因工程重组原料和人工合成原料，试剂质量优异。5）库尔特（贝克曼）：试剂质量优异，主要配套自己的系列血凝仪，APTT白陶土试剂目前还没有其他厂家的质量超过他。八、仪器厂家：1、国内仪器厂家：1）普利生：磁珠法，半自动全自动均有，简便易懂，无专用试剂。2）中勤世帝：磁珠法，，半自动全自动均有，简便易懂，无专用试剂。3）英诺华：透射比浊法（光学法），只有半自动，APTT只能用鞣花酸。4）南京瑞麦：透射比浊法（光学法），只有半自动。5）深圳鹏瑞嘉：透射比浊法（光学法），只有半自动。6）山东高密彩虹：磁珠法，半自动。7）北京普朗：光学法，半自动，APTT只能用鞣花酸。。8）陕西亚森：光学法，半自动。2、国外仪器厂家：1）东亚CA系列（SYSMEX，希森美康系列）：光学法，市场占有率高，半自动有CA-50，CA-100等，全自动有CA-500系列，CA-1500系列，CA6000系列，CA-7000系列。DADE配套试剂。一般医院为1500以下血凝仪，APTT不能用白陶土。2）德国BE系列：光学法，6种半自动、5种全自动，CL-1和CL-4测定时需要加白陶土悬液。3）美国ACL（库尔特）系列：光学法，目前ACL被贝克曼收购，有ACL-100、ACL-200,ACL-300,ACL-400,ACL6000，ACL7000等为一代产品，ACL8000，ACL9000，ACL-TOP，ACL-advance等为二代产品，贝克曼原装试剂，试剂质量好。我公司血凝试剂在ACL7000上与原装试剂做对比相关性良好。4）法国STAGO系列，磁珠法，世界最好的血凝仪，全自动配套自己的实际，有条形码。半自动试剂通用。5）美国太平洋：光学法，主要为半自动，目前也已推出两种全自动，光学法，自配试剂6）德国德高TECO，光学法，主要为半自动，太平洋试剂。7）德国美创（MC）：光学法，半自动居多，有两台全自动，自配试剂，试剂开放。我公司试剂与该试剂相关性良好。8）法国蓝波：光学法，半自动，市场少。9）荷兰欧加侬：光学法，半自动，市场少。10）法国生物梅里埃：光学法，半自动，市场少。除了STAGO血凝仪外其余仪器试剂开放