血吸虫病诊断方法及研究进展

血吸虫病诊断方法及研究进展长期以来，血吸虫病诊断研究，一直是血吸虫病研究的重点之一，并连续被列为国家医药卫生科技七五、八五、九五、十五攻关项目，成为血吸虫病防治中的热门课题。血吸虫病的诊断一般可以分为临床诊断和实验诊断。前者主要依据病史和体症，虽有一定参考价值，但往往缺乏足够的依据，不易和其他疾病相区别，难以确诊病人。因此，必须依赖实验诊断，实验诊断可分为病原学诊断、免疫学诊断及其他辅助诊断方法。一、病原学诊断研究进展（一）病原学诊断的地位传统的病原学检查方法，有粪检和直肠镜检。尼龙绢集卵法、水洗沉淀法及改良加藤氏法等粪检方法，依然是基层疫区常用并首选的诊断方法。粪检或无治疗史者直检，为确诊血吸虫病人的最好依据。只要在受检者粪便中或未经治疗的患者活体组织内发现了血吸虫卵，即可确诊为血吸虫病人，是确定感染的最直接、最可靠的指标。自从1903年Kasai氏首次在病人粪便中找到血吸虫卵以来，粪便检查一直是确诊血吸虫病和考核疗效常用的方法。粪便检查主要包括两大内容即检查虫卵和孵化毛蚴两种方法。检查虫卵：尼龙筛集卵法、沉淀法、透明法、改良加藤氏法；毛蚴孵化法：三角烧瓶法、塑料杯顶管法。由于新中国成立以来，党和政府高度重视血吸虫病的防治工作，我国血防取得举世瞩目的成绩，无论是从病人的感染率或是感染度方面都显著下降，病人粪便中虫卵数大大减少，同其他检查方法比较，粪检的阳性率较低，漏诊多，因而改进粪检方法，提高粪检质量就一直是查病工作中的一个重要课题。事实上，粪检方法随着血防工作形势的发展，一直在不断的改进和提高，大量的现场查病工作也积累了丰富的经验。此外，血吸虫并非肠道内寄生虫，故非所有的虫卵都能随便排出，在粪便中查到的虫卵仅占雌虫产卵数的16%。在成虫排卵前期或者是非排卵期，就缺乏诊断价值，粪检也就失去了意义。而在发病后期，肠壁组织纤维增生，肠壁增厚，虫卵不易穿透肠壁而造成粪便中虫卵数减少，粪检时不易获得阳性结果而导致漏检。（二）Kato-Katz法理想的病原学诊断方法应兼有简单、快速、经济、敏感性高、能确定感染度、重现性好、适于现场应用等优点。Kato-Katz法是当今WHO推荐的血吸虫病定量检测方法，我国多次血吸虫病抽样调查以及全国血吸虫病疫情、病情监测等都使用Kato-Katz法。然而Kato-Katz法检查粪量少，直接影响了该方法的敏感性，所以Kato-Katz法的漏检，特别是低感染度的漏检一直是大家关心的问题。为此，国内学者也做了一些新方法的探讨。表1Kato氏法在不同流行区查病的漏检率作者单位集卵法孵化法Kato氏法疫区人群钱小洪等四川25.9740.26大山区陈大林等安徽24.5355.66重度流行区(EPG20)刘晓明等安徽10.5752.85急性病人黄希宝等湖北40.70四个疫区村毛官祥等湖北47.50重疫区(7/41)罗建平等江苏60EPG10宋鸿焘等探讨了粪便检查在血吸虫病低度流行区查病的现场应用价值。采用尼龙绢集卵孵化法和改良加藤氏法对463人进行检查，两法阳性8例，孵化法阳性加藤法阴性9例，加藤法阳性孵化法阴性1例，孵化法漏检率为5.6%(1/18)，加藤法漏检率为50.0%(9/18)，尼龙绢集卵孵化法比改良加藤氏法阳性检出率高，漏检率低，经x2测验，两法差异有显著性。（中血2003；15（3）：218）采用Kato法与粪便集卵孵化法在重疫区检查了2513人，其中男性1503人，女性1010人，年龄最大者70岁，最小者三岁，均是农民和中小学生。两种方法共检出血吸虫阳性病例1027人，检出率为41.20%，孵化法检出率显著高于Kato法(P0.05)(表2)表22种方法诊断血吸虫病的对比方法检查例数阳性数检出率(%)Kato法25131767.00孵化法251399439.55[毛官祥等，湖北预防医学杂志6（2）：39]表表33不不同同感感染染者者KKaattoo法法检检出出率率比比较较感染度(EPG)沉淀虫卵计数法Kato法阳性例数检出数检出率(%)1~421228.5910~10770.0020以上181687.90分析加藤法漏检原因，可能与Kato法取粪量过少及经过反复查治，血吸虫病人的EPG低有关，另一方面，Kato法检出率高低与疫区人群感染度高低有关。在感染度低的疫区，若选用定量方法查病，作者认为采用尼龙绢筛集卵孵化法较为适宜。当EPG为8时，kato-katz法的检出率只有42.9%。用kato-katz法检测EPG真值≤5时很难找到虫卵,为10时其检出率只有55%,以往资料显示,kato-katz法在血吸虫病中，轻度流行区查病要遗漏部分病人。四川吴子松等研究并经相关性分析，发现孵化出的毛蚴数与Kato-Katz法的检出率呈正相关(r=0.9347)，作者认为在血吸虫病流行区广泛使用Kato-Katz法，进行流行趋势动态监测，针对群体而言，即使又部分漏检的情况下，Kato-Katz法优于孵化法。[实用寄生虫病杂志1995；3（1）：21]表4Kato-Katz法对不同感染度的检出率孵化结果平均毛蚴数受检例数阳性例数检出率(%)+以下(1～～5)2.5813138.27+(6～～10)7.51448357.64++(11～～20)15985960.20+++(21～～30)25815162.96++++(30)40635283.87四川作者近年探讨Kato-Katz法诊断血吸虫病时不同涂片数与检出率的差异，对四川省血吸虫病流行区的240人进行Kato-Katz法检查，按顺序制作4张涂片，镜检计数血吸虫卵，结果1片至4片的检出率分别为15.83%，20.00%，22.92%，25.83%，检出率随涂片数增加而提高，3片与4片的病人EPG几何均数差异无显著性，建议血吸虫病查病时使用3张Kato-Katz涂片。[中血2002；14（6）：436]表5EPG涂片数与检出率的关系EPG组检查数不同涂片数的检出例数12346-19610151912-201115172030-10810101054-1313131313合计6238485562（三）集卵直检法四川所在山丘型血吸虫病流行区对2160人进行集卵直检法、Kato-Katz法和集卵孵化法的对比试验。样本感染度和感染率越低，集卵直检法检测性能越佳。集卵直检法镜下虫卵形态清晰，基层血防技术人员容易掌握。方法检出率（%）材料费用（元）集卵直接法13.102.05Kato-Katz法8.292.02集卵孵化法7.362.47国家所钱珂等采用集卵薄涂片法检测牛粪中血吸虫卵，比较了薄涂片法和透明法的虫卵回收率。结果表明，在三种虫卵梯度，薄涂片法的虫卵回收率，分别为透明法的18、4.2和3.5倍，现场检查34头孵化阳性黄牛的结果也证实薄涂片法优于透明法。薄涂片法检查半量粪渣(制6张涂片)的虫卵估计值和标准差与全量粪渣结果相似，可以代替全量粪渣检查。在感染度高的地区，可以检查1/4粪渣，制3张涂片，从而减少工作量。（四）尼龙绢集卵法尼龙绢集卵法已成为血吸虫病普查的常规方法。但是，在流行区普查血吸虫病工作中发现该方法也存在血吸虫卵散失的现象。表649例阳性粪便尼龙绢不同淋洗次数检查结果组别检出毛蚴例数检出率(%)检出毛蚴只数构成比(%)Ⅰ4489.8294465.0Ⅱ3469.44139.1Ⅲ3265.31874.1Ⅳ4489.898821.8合计--4532100.0江苏省血吸虫病防治研究所曾有两个类似的结果，第一次是从已知的10份阳性粪便，共检出毛蚴2101只，其中沉淀内检出毛蚴1050只，弃去的粪渣中检出毛蚴917只，损失43.6％。第二次现场试验结果，粪渣中散失毛蚴38.1％。浙江张雪娟等以尼龙筛法铜筛杯内的粪渣再进行孵化，并与尼龙筛内孵出的毛蚴数进行比较，结果毛蚴散失28.7％～35.3％，基本与上述结果一致。（五）毛蚴孵化法（耕牛血吸虫病检测）1、直孵法检查的粪便既未经过铜筛杯过滤，也未经尼龙筛淘洗，粪渣多，色素浓，影响其毛蚴孵出。根据中国农科院上海家畜血吸虫病研究室诊断组50次试验结果，自然光照组比光照较弱组毛蚴孵出总数高出4倍多。有作者特意将已经孵化5小时后的粪渣保留，通过尼龙筛淘洗，再次加水孵化，2小时后孵出了大量毛蚴，说明许多虫卵可能由于光线等原因未能孵出毛蚴。[浙江农业学报2004；16（6）：381]2、顶管粪便孵化法根据毛蚴具有向上性、向光性、向清性的特性，普宪光等将三角烧瓶孵化法改进为顶管孵化法，将耕牛粪便置于铜丝筛中，在一个盛满水的茶缸中淘洗，取出铜丝筛，沉淀换水。在一个大于茶缸口的正方形木板中打孔插入玻璃管，加满水后倒盖在荼缸上（玻璃管口与茶缸内水面接触）孵化，在玻璃管中观察毛蚴。陈代荣、邵水康等对这一方法又作了进一步改进，设计了一种特制塑料杯和装有玻璃管的塑料盖。3、粪便沉淀孵化法该法最早用于诊断耕牛血吸虫病，该方法是取牛粪50g，经40一60目铜丝筛在盛有500ml水的茶杯或量杯中淘洗，取出铜丝筛，分别沉淀30分钟直至水清。滤去上清液将粪渣移入三角烧瓶中加满水在适宜温度(20—27℃)或温箱中孵化，分别在孵化后1、3、5小时或2、4、6小时各观察一次，发观毛蚴即判为阳性。4、尼龙兜淘冼孵化法粪便沉淀孵化法，需反复换水，很费时，费水，在高温季节还必须用1%盐水，以免毛蚴孵出倒掉。孙承铣等经反复试验比较，选择了一种孔目小于虫卵而粪便中色素可以滤过，型号为Nxl03的尼龙筛绢，将经钢丝筛淘洗过的粪水，倒入用尼龙绢兜内在清水中淘洗，再将兜内粪渣移入三角烧瓶内加水孵化，观察毛蚴。5、棉析粪便孵化法用尼龙绢兜淘洗法，免去多次换水的操作程序，缩短了工作时间，但用尼龙兜淘洗过的粪渣，其中一部分在孵化过程中将浮于三角烧瓶颈部，影响对毛蚴的观察，如在瓶颈下部加一隔层，阻止粪渣上浮，使观察部位保持清晰。有人曾进行这样有趣的试验，用一根一端为球形的玻璃管，在球底部放入水和毛蚴，水面上加一脱脂棉层，棉层上再加水，毛蚴可从棉层下的水中，穿过棉层进入上层水中。6、粪便湿管孵化法由于随粪便排出的虫卵，成熟期各不相同，毛蚴孵出时间也有长有短，毛蚴逸出数量一般呈抛物线状。观察毛蚴选择在孵化后1、3、5或2、4、6小时就是这个道理。有学者提出能否使成熟早的虫卵抑制其孵出，而成熟晚的虫卵促使其成熟，使毛蚴在同一时间内达孵出高峰。（六）直肠组织活检人体感染血吸虫病后，血吸虫卵在体内肠粘膜沉积，引起肠粘膜一系列病理变化，以直肠和乙状结肠尤为显著。因此，直肠镜、乙状结肠镜作为血吸虫病病原学检查的一种方法．可以补充粪检血吸虫孵化和集卵之不足。该法对无治疗史患者易作出正确判断。对有治疗史的患者，由于血吸虫卵在肠组织的演变形态较为复杂，需要一定识别虫卵形态的经验或进行染色才能作出较为正确的判断。直肠镜检的主要副作用是损伤性出血和肠穿孔：①强行插镜与强行拔出镜心所致损伤性出血；②当直肠镜筒与镜心末端接触肠壁粘膜过紧时，猛拉、急退、强行拔出镜心，远端势必产生负压，镜筒进腔越深，负压越大，致使肠壁粘膜与金属镜筒缘有力吸附，切割伤就越厉害；③原病变处的溃疡、息肉、孤立性小静脉瘤容易损伤而致出血；④活检肠粘膜时未避开较大血管和深部有血管搏动的部位。（七）胃纤维镜检查慢性和晚期血吸虫病患者的胃部病变尚未见胃纤维镜检查的详细报道。对109例慢性血吸虫病和109例晚期血吸虫病患者的胃粘膜病变作了内窥镜观察。纤维胃镜检查:使用OlympusGiF-Q20GiF-K2和国产XS一4型前视斜视胃镜观察胃粘膜病变和晚血患者食道静脉曲张情况。发现晚血的胃粘膜糜烂发生率明显高于溃疡（P＜0.01)，晚血和慢血患者的充血性(浅表性)胃炎发病率(86.2%和84.4%)均明显高于非血吸虫病患者的检出率（61.0%）。晚血的胃粘膜病变发病率明显高于慢血，特别是摩烂性胃炎的发病率高。晚血患者中胃粘膜病变有92.9%合并有幽门螺旋杆茵感染。（八）动物解剖检查解剖检查，即家畜尸体内收集血吸虫虫体，或在组织中检获虫卵，这是诊断血吸虫病最为准确的方法。在收集虫体时，首先必须了解血吸虫在宿主体内的主要寄生部位是