血液检测误差分析.

误差的来源：分析前分析中分析后1.患者本身：饮食、情绪、运动2.样本采集：样本是否需特殊处理、抗凝剂的使用等3.样本的运送是否及时等。1.小红细胞干扰2.巨大血小板综合症3.某些血液病患者4.细胞碎片5.冷球蛋白干扰6.新生儿1.检验结果的审核与发出2.检验样本的保存与标本的处理3.咨询服务：加强与临床的沟通4白细胞假性增高1235红细胞凝集细胞碎片常见误差因素：血小板聚集巨大血小板Q1:DMC含义是什么？5报警原理•提高了异常标本的筛选效率•完善实验室的镜检规则数值数据散点图直方图仪器状态IPU综合分析SuspectAbnormalERRORNEGATIVEPOSITIVEIP信息NEGATIVE/阴性结果正常结果可直接报告POSITIVE/阳性D（DIFF）WBC分类出现了异常情况M（Morph）细胞形态出现了异常。C（Count）血细胞计数出现了异常。ERROR/错误Func.仪器故障或操作错误Result标本有问题例如：凝集Q2：仪器的怀疑类报警含义分别是什么？WBCQ3：思考白细胞计数受哪些影响？Q4:什么情况下外周血会出现有核红？•新生儿、溶贫、呼吸衰竭缺氧•骨髓纤维化、MDS、再障髓外造血•造血系统恶性疾病髓血屏障受损血常规特点：1.WBC显示低可信度2.显示NRBC？可疑报警（XN仪器除外）对策：1.手工计数100个WBC并记录见到的NRBC2.对于XE机型，加做NRBC3.选用XN机型，NRBC自动修正病例--外周血出现有核红镜检图片：Q5：思考为何两个通道WBC总数相差较大？该如何处理？MenuRBC溶血不良RBC溶血不良的原因：肝功能低下(肝硬化、肝癌晚期、胆道堵塞)异常血红蛋白症(Hgb-S症、Hgb-C症)高脂血症高胆固醇制剂输液治疗过程中难溶红细胞电镜下正常RBC电镜下难溶RBC滴加溶血素后血常规特点：1.DIFF通道与BASO通道WBC差值较大2.存在“难溶红细胞”报警对策：1.手工计数2.参考DIFF通道WBC总数病例--红细胞溶血不良19WBC聚集时新增WBC的切换功能•TargetInthecasethatthebloodincludingHyaluronicacid(metastatictumor)ismeasured-becauseofWBCaggregationinWNRchWBCbecomefalselylow.(WBCinWDFchhasnotbeenaffected.)•Modification1.Flaggingof“WBCAbnormalScattergram”,2.maskingofWBC[----]willbeexecutedwhensuchphenomenaaredetected.WNRchWDFchRef(eye)复习：Ver.00-15（WBCAbnScg报警和WBC结果不显示[----]）DetectionAreaofWBCaggregation20新分析演算软件：Ver.00-16SoftwareVersionDiscreteFlagWBC(主页)WBC-NWBC-D00-15DIFF无WBCAbnScg--------（空白）DIFF有WBCAbnScg--------有数值显示00-16DIFF无WBCAbnScg--------（空白）DIFF有WBCAbnScg有数值显示WBC&D----有数值显示有WDF通道测定时，从WBC-N（WNR通道）的结果切换为WBC-D（WDF通道）Ver.00-15推荐的规则设定Ver.00-16推荐的规则设定条件式动作ItemMask(WBC)Refex(LW_DIFF)条件式动作ItemMask(WBC)Refex(DIFF)★相关资料「XNflaggingalgorithm」有更新。WBC聚集时WBC的切换功能总结WBC误差：白细胞聚集导致白细胞减少红细胞溶血不良导致白细胞假性增高有核红存在导致白细胞假性增高RBCQ6:血象有何特点？下一步如何处理？血常规特点：1.RBC数减少；HCT假性减低2.MCH、MCHC增高；对策：1.37°C水浴15min后2.对于严重凝集，采用血浆置换病例--红细胞凝集该标本镜检图像该标本镜检：高倍视野下可见大量RBC聚集讨论：对于冷凝集素效价较的标本，可以采用热水浴３７℃，２０ｍｉｎ的方法进行纠正；对于冷凝集素效价较高的标本，可先进行热水浴３７℃２０ｍｉｎ，然后上机测定标本，可获得ＷＢＣ和ＰＬＴ值；再进行置换血浆，可获得ＲＢＣ、红细胞比容、血红蛋白、ＭＣＶ、ＭＣＨ和ＭＣＨＣ各值总结RBC干扰：1.红细胞凝集导致红细胞假性减少2.巨大血小板导致红细胞假性增多PLTQ7:为什么血小板计数差异这么大？某病人，男性，药物过敏，体表有出血点查血常规：嗜酸细胞30%，PLT263×109/L（阻抗法）。镜下核查嗜酸细胞时发现：有大量细胞碎片，血小板不多见重新用计数板计数血小板为：35×109/L细胞碎片干扰•细胞碎片或大量小红细胞(MCV60fl)–与血小板体积接近–PLT假性增高，与临床不符–影响RBC结果，与临床不符–异常RBC直方图和异常PLT直方图细胞碎片和大量小红细胞“异常PLT直方图”和“异常RBC直方图”PLT计数通过以下方式纠正!–计数池计数–显微镜浏览评估–光学法测定PLT计数150250fl60RLRUPLPU10fl20fl30fl40flRBC直方图PLT直方图注:当PLT和RBC不能被清晰分离时就会发生!PLT计数可能有偏差(高或低)红细胞碎片对血小板计数的干扰结果报告XN以PLT-F结果为最终报告结果Q8：某血小板减少症患者，药物治疗后复查血小板为19×109/L（阻抗法），临床医生疑惑为什么一直治疗无效果？巨大血小板•血小板板龄越小，体积越大•巨大血小板与红细胞体积接近•单纯的体积测定(阻抗法)使PLT计数偏低PL100%20%PU10fl20fl30fl巨大血小板分析：1、在WNR和WDF通道上，由于大血小板形成出现的异常散点图（○）。2、PLT-I比PLT-F低，同时报警出现血小板直方图异常。3、在IPF散点图绿色区域出现大量散点，同时IPF升高到22.2%，推测有大血小板。镜下见到多个体积大小为2个红细胞的巨大血小板。门诊病例，血小板减少IPF巨大血小板解决方法：•RET通道:—光学法检测血小板就可避免干扰（PLT-O）•PLT-F通道：—针对血小板线粒体DNA染色，特异性更高网织血小板）PLT-FIPFSFLPLT-OIPFSFLFSCFSCQ9：思考为何会出现此现象？•某医院做血常规时发现一例PLT仅47×109/L，半小时后仪器再次复查PLT，为180×109/L•因使用流水线，前一份样本符合推片规则已推片，镜下观察该血片，可见较多成簇的血小板。血小板聚集解离现象Q10：某标本，XNA1机型检测，首次结果，PLT23*109/L，思考下一步如何处理？EDTA-K2依赖血小板聚集分析：1、PLT减低；报警信息提示PLTClumps?(血小板聚集)，报警更灵敏；2、在WNR,WDF、PLT直方图有聚集报警（○）；3、PLT-F通道，散点图增加了FSCW（前向散色光分布宽度），FSCW(←)扩展是血小板聚集的明显特征。正常凝集EDTA-K2依赖血小板聚集对策：用其他的抗凝剂（枸掾酸钠）采血来鉴别是否由于抗凝不良造成的。同时比较EDTA抗凝和枸掾酸盐抗凝结果是证明EDTA依赖性假性血小板减少症病例的重要方法，可以排除采血错误的原因。放置30min后，检测推荐抗凝方法：①用10倍浓度的EDTA(10mg/ml以上)采血②EDTA+桔橼酸(10:1)③桔橼酸钠(3.13%、3.8%)④肝素(65IU)⑤MgSO4(14%)⑥预稀释模式进行检测血常规特点：1.PLT计数假性偏低2.有怀疑类报警血小板聚集对策：1.更换枸缘酸盐抗凝剂，若凝集现象消除，证明原抗凝不良。2.用干试管采血并且推片病例--EDTA-K2依赖血小板聚集更换枸缘酸盐抗凝剂后结果为220*109/L讨论：在EDTA依赖性假性血小板减少患者抽取后1h的抗凝血样本中加入6.5mg/ml丁胺卡那霉素能有效地解离凝集的血小板,并可进行准确计数,同时不影响其他主要血常规参数的测定。。影响PLT检测的常见因素1.小红细胞及红细胞碎片对PLT检测的干扰：仪器在35-250fl的范围内分析红细胞,正常红细胞主要分布在50～150fl范围内，当RBC体积小于35fL会干扰PLT计数；RBC碎片会使计数假性增高。2.EDTA诱导假性血小板减少：由标本内特殊蛋白质与EDTA抗凝剂发生反应，产生血小板聚3.大血小板增多至计数减少：PLT正常直径约2～4μm，在病理情况下，特别是巨核系统病态造血(如MDS)，会出现大量的大血小板、甚至巨大血小板。影响PLT检测的常见因素4.采样技术的影响5.PLT卫星现象所致假性血小板减少：PLT在体外黏附与成熟中性分叶核粒细胞周围的现象。可能与自身免疫、血小板反应素等有关。6.冷球蛋白血症:冷球蛋白是免疫球蛋白，在温度低于37°C时会产生沉淀解决方案血小板特殊颗粒(α颗粒-特异性蛋白质)线粒体(DNA)•颗粒大小PLT-I•α颗粒（特异性蛋白质）PLT-O•线粒体（DNA）PLT-FPLTRBC利用PLT-F专用试剂明显染色的细胞与血小板特异抗原（CD41）阳性细胞一致,下层的红细胞碎片只有细胞膜被轻度染色.同时再根据前向散射光所代表的细胞大小信息，能够清晰地区别血小板和红细胞碎片异常值--最容易出临床差错的临检项目之一PLT低值计数重复性差：无法连续观测结果，指导临床用药假性增高：受小RBC、碎片干扰，误导临床手术，出血风险假性降低：大PLT误计为RBC误导临床输血，增加不必要的经济负担和输血风险。低值PLT5倍颗粒计数特异标记线粒体PLT（低值PLT通道——PLT-F）KeioUniversityHospitalAllsample（n=100)LowPLTsamples(50x109/L)白血病漏诊：异常细胞检出率低，假阴性率高，导致漏诊WBC低值计数重复性差：化疗病人需要准确的WBC数、NEU、IG数连续观察指导用药WBC过低分类不准确：WBC过低，计数颗粒少，分类结果不可靠，无法指导诊疗。3倍颗粒计数0.7%的灵敏度WBC（WPC、低值WBC模式）异常值--最容易出临床差错的临检项目之二低值WBC重现性新鲜血液CBC+DIFF+WPC+RET+PLT-FLWmodeandWBmode低值白细胞模式检测精度较全血模式高田中雄三(东海大学医院)：SysmexJournalVol.34Suppl.220113倍计数，令LW模式结果更准确Q:如何减少试验误差？仪器的自动复检功能-3R•3R是指XN系列的三个复检方式•仪器可以根据规则判定结果，执行［Repeat］分析、［Rerun］分析、［Reflex］分析以获得第二次分析结果。类型触发原因复检内容Repeat检测过程中，仪器动作异常（故障）重新执行初检。Rerun结果低可信度在保留初检结果的同时再次分析样本。Reflex某项结果因干扰或异常细胞出现引起低可信度结果初检结果提示应测试更多参数。流程的建立—LABOMAN筛选软件Laboman6.0重新计数（Rerun)复检规则动作MCHC]380设置为另一台仪器重新检测[MCV]75OR[MCV]105[HGB]70OR[HGB]180OR(HGB,50%,3,)[MCHC]300AND[MCV]=80[PLT]=100OR[PLT]=300and(PLT,50%,3,)改变计数方式复检（Reflex)复检规则动作[WBC]1LWBlasts/AbnLympho?WPC[PLT]50andFragments?^PLTAbnDistribution^AbnScattergramPLT-F[PLT]=80,初诊PLT-F计数复检规则：小结：1.哪些因素可能导致白细胞计数误差？2.RBC凝集血常规参数有那些变化？该如何处理？