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课前背诵•1.植物组织培养的理论基础•2.组培的过程•3.影响组培的因素•4.植物组织培养的实验流程•5.植物激素的使用顺序和浓度比例对结果的影响•6.纤维素酶和果胶酶的比较（优化P236）课前准备学案56、学案57、582．处理方法—酶解法常用的酶及其作用特点如下：处理学案561、定义：（一）加酶洗衣粉含有酶制剂的洗衣粉。2、成分：除含有普通洗衣粉的成分外，还含有多种酶制剂：蛋白酶，脂肪酶，淀粉酶，纤维素酶，复合酶。课题2探讨加酶洗衣粉的洗涤效果酶制剂的种类与洗涤原理优化大本P236（一）子课题一：探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍的洗涤效果2、遵循原则设计时应遵循单一变量原则、对照性原则，有效的控制其他变量。如实验变量为洗涤剂，而水的用量、污染物的量，实验用布的质地大小、两种洗衣粉的用量，搅拌及洗涤时间等其他因素保持不变。学案57（2）实验过程①取两只大烧杯并编号，用量筒分别量500ml蒸馏水放入其中。②将制好的污染布和洗衣粉（一组为污染布和普通洗衣粉，另一组为污染布和加酶洗衣粉）分别放入两只烧杯中。③用玻璃棒同时充分搅拌一段时间。一段时间后搅拌可重复进行。④过相同的时间后观察洗涤效果。（3）实验结论：（一）子课题一：探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍的洗涤效果课题3酵母细胞的固定化基础知识（一）固定化酶的应用实例1.利用固定化酶技术生产高果糖浆的实例（1）高果糖浆的生产需要酶葡萄糖异构（2）葡萄糖异构酶的优点稳定性好、可以持续发挥作用（3）在生产中直接使用酶有什么缺点？酶溶解于葡萄糖溶液后，无法回收，造成浪费2.固定化酶的反应柱示意图（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋在细微网格里将酶（或细胞）相互连接起来将酶（或细胞）吸附在载体表面上包埋法化学结合法物理吸附法2.固定化酶和固定化细胞的联系与区别联系：应用相同，都能催化某些反应见学案57比较表格、优化P2373.固定化酶和固定化细胞常用的载体材料明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等，其共同的特点是不溶于水的多孔性载体（一）制备固定化酵母细胞实验操作1、酵母细胞的活化2、配制物质的量浓度为0.05mol/L的CaCl23、配制海藻酸钠的溶液4、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合5、固定化酵母细胞优化P239易错点2固定化酵母细胞的制备和应用(二).实验结果（1）观察凝胶珠的颜色和形状：如果制作的凝胶珠颜色过浅，呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再做尝试。（2）观察发酵的葡萄糖溶液：利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多气泡，同时会闻到酒味。学案571、4、5、10（三）.注意事项（1）酵母细胞的活化：酵母细胞所需要的活化时间较短，一般需要0.5～1h。此外，酵母细胞活化时体积会变大，因此活化前应该选择体积足够大的容器，以避免酵母细胞的活化液溢出容器。（2）加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环，关系到实验的成败。海藻酸钠的浓度关系到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。•PCR技术的基本操作和应用（Ⅱ）1.PCR的基本原理阅读课本P58-59,填写学案基本内容多聚酶链式反应扩增DNA片段体内复制PCR反应解旋在＿＿＿作用下，细胞提供能量，部分解开加热至＿＿℃，双链全部解开，不需要解旋酶引物一小段RNA可以是RNA或单链DNA分子片段特点边解旋边复制，半保留复制体外迅速扩增TaqDNA聚合酶＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿循环次数受生物体自身控制30多次相同点生物体内的DNA复制或PCR体外DNA扩增都需要模板，四种脱氧核苷酸，且都需要在一定的缓冲液中进行，都遵循半保留复制。解旋酶95不需要需要生物体内DNA复制与PCR反应的区别：第一轮PCR过程：引物1引物1引物1引物2引物2引物2PCR过程：第二轮PCR过程：第三轮引物1引物1引物1引物1引物1引物1引物1引物2引物2引物2引物2引物2引物2引物2【实验操作】一、PCR反应体系从配方表中总结出PCR的反应条件：（1）稳定的缓冲液环境（2）四种脱氧核苷酸（3）DNA模板（4）分别与模板DNA两条模板链相结合的两种引物（5）TaqDNA聚合酶（6）能严格控制温度变化的温控设备【实验操作】二、PCR的实验用具PCR仪、微量离心管、微量移液器【实验操作】三、PCR的实验操作1、准备：按照PCR反应体系的配方将所需试剂摆放在实验桌上2、移液：用＿＿按照配方在微量离心管中依次加入各组分3、混合：盖严离心管的盖子，用手指轻轻弹击壁管4、离心：将微量离心管放在离心机上，离心约10s，目的是＿＿＿。5、反应：将离心管放入PCR仪中，设置程序进行反应。微量移液器使反应液集中在离心管底部四、PCR反应程序变性复性延伸预变性94℃，5min30次94℃，30s55℃，30s72℃，1min最后一次94℃，1min55℃，30s72℃，1min【实验操作】注意事项：①为避免＿＿＿，PCR实验中使用的微量离心管、吸液枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行。②在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须＿＿。外源DNA等因素的污染高压灭菌更换结果分析与评价DNA含量的测定：稀释→对照调零→测定→计算（公式见P63）波长260nm处读数蒸馏水做对照50倍注意事项：详见操作提示【结果分析】2、计算公式：DNA含量（μg/mL）=50×（260nm的读数）×稀释倍数（其中50表示纵坐标为1时，相当于50μg/mL双链DNA的量；稀释倍数为实验操作中的稀释倍数，课本中为50。）1、理论上DNA扩增呈指数增长，即一条DNA片段循环n次后数目为＿＿＿＿2ｎ原理相对分子质量运动的路径运动的方式运动的速度运动的路程洗脱次序大小多孔凝胶颗粒的间隙多孔凝胶颗粒的内部垂直向下移动无规则扩散运动较快较慢较短较长先洗脱出来后洗脱出来•1、电泳的概念•2、电泳的原理•3、常用的电泳方法有哪些？带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。利用待分离样品中各分子带电性质的差异及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。琼脂糖凝胶电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳。2.电泳2、缓冲溶液的作用：能够抵制（）的对溶液的（）的影响，维持PH基本不变。外界的酸或碱PH值3、蛋白质的提取和分离的步聚：样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定①目的：②方法：(1)红细胞的洗涤去除杂质蛋白低速短时间离心(2)血红蛋白的释放①目的：②方法：(3)分离血红蛋白溶液①目的：②方法：使红细胞破裂释放血红蛋白加蒸馏水、甲苯，并搅拌得到血红蛋白溶液高速长时间离心有机溶剂无色透明的甲苯层脂类物质白色脂溶性物质沉淀层血红蛋白溶液红色透明液体红细胞破碎物沉淀暗红色沉淀物二、粗分离问题：1、目的？2、原理？三、纯化：凝胶色谱操作1、凝胶色谱柱的制作2、凝胶色谱柱的装填3、样品加入与洗脱四、纯度鉴定实验中对纯化的血红蛋白纯度进行鉴定方法是：电泳让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持结构和功能。1、在血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。2、如何判断色谱柱制作成功？4．答：血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。