第三章_染色体工程与植物育种

第三章染色体工程与植物育种植物染色体工程的用途十分广泛，主要用在基因定位和异源基因的导入。我国自80年代开始进行染色体工程育种研究，经过“六五”和“七五”协作攻关，在小麦染色体工程育种方面有较大进展，创制了小麦与黑麦(Secalecereals)、山羊草(Aegilopstauschii)、簇毛麦(Haynaldiavillosa)、大麦(Hodeumvulgare)、类麦(Thinopyrum)等近缘种、属的双二倍体，转育了不同生态型的小麦单体系统和缺体系统，选育出了多种异附加系、异代换系和易位系。这是一批十分有用的染色体工程基础材料，是选育小麦良种的宝贵资源。本章内容提要第一节染色体工程的一般概念和主要内容第二节染色体组水平的操纵技术第三节染色体水平的细胞遗传学操纵第四节染色体片段的细胞遗传学操纵第五节染色体微切割和人工染色体第六节染色体工程和作物育种第一节染色体工程的一般概念和主要内容一、概念二、亲缘关系远近与遗传操作策略三、染色体的操纵的三个水平一、染色体工程概念该术语最早由里克（Rick）和库升（Khush）于1966年在论述番茄单体、三体和缺体时提出的。染色体工程：按照人们预定目标，采用一定的方法和步骤，通过染色体操纵改变生物染色体组，并进而改变其遗传性的过程。——陈佩度染色体工程：是人们按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体，从而达到定向改变遗传性和选育新品种的一种技术。——李志勇染色体工程：指某一种植物的染色体或染色体片段按照人们的意愿进行添加、消减、代换或易位，从而达到定向改变植物遗传性的一项技术。——陈耀锋陈佩度本课教材编者狭义和广义染色体工程：狭义：指人工分离染色体或染色体片段，导入受体原生质体，再经过原生质体培养再生细胞壁、愈伤组织，直至再生出完整植株的过程。广义的还应包括应用细胞遗传学技术通过有性杂交和回交、细胞组织培养和体细胞杂交等方法，按预定目标有计划有步骤地转移染色体组、染色体或染色体片段。注：导入的染色体必须是有活力的，导入原生质后，又涉及到如何与受体染色体“共处”或“重组”问题。染色体工程在培育抗病新品种上有重要意义，而且是基因定位和染色体转移等基础研究的有效手段。染色体组：生物体内维持生命活动所必须的一套非同源染色体（用x表示），它是遗传的生命单位。部分同源群：分别处于不同染色体组中，最早可能由同一条染色体演化而成的，具有不同程度同源关系的染色体互称为部分同源染色体并共同组成一个部分同源群。它们具有基本相似的核苷酸组成和排列次序，相互之间具有一定的补偿性。染色体组和部分同源群二、亲缘关系远近与遗传操作策略1、含有同源染色体组物种间的遗传操纵特点：有性杂交容易成功，F1雌雄配子的育性较好策略：采用一般的有性杂交技术，如果双亲间遗传性状差异大，要加大杂种群体、增加选择代数、或辅以花药花粉培养等技术诱导单倍体，然后加倍，加速形成纯合体。2、含有部分同源染色体组物种间的遗传操纵特点：没有相同的染色体组，但具有部分同源关系，有性杂交有难度，杂种后代双亲染色体间很少或基本不配对。策略：通过回交，育成异附加系或异代换系；通过操纵染色体配对控制体系（如小麦5B），可促进具有部分同源关系的染色体间配对，发生交换和重组；也可以通过理化因子或生物因子（如小麦近缘种中的杀配子基因）诱导染色体断裂、重接，产生易位。3、无同源染色体组物种间的遗传操纵特点：无同源性，有性杂交极其困难，或至今得不到有性杂种。策略：采用体细胞杂交技术获得体细胞杂种。三、染色体的操纵的三个水平1、染色体组操纵：添加或消减同种或异种染色体组，合成双二倍体或部分双二倍体，或者创造单倍体。2、染色体操纵：整条染色体的附加、消除、代换，导入的染色体要有完整的着丝粒和端粒，以保持其结构稳定性和进行正常的复制分裂。3、染色体片段操纵：指染色体片段的转移→易位、添加或消除。需要经过染色体断裂和重接，新形成的染色体具有且只具有一个着丝粒，而且染色体两端形成完好端粒。在育种中，不仅要求整组染色体、整条染色体或染色体片段的操纵成功，还要求经操纵后的个体在细胞遗传学上的稳定性，在遗传组成和形态特性上比原有亲本更加优良。第二节染色体组水平的操纵技术一、远缘杂交障碍及克服途径二、染色体组的消减：即单倍体产生和二倍体化三、染色体组的添加——异源多倍体、同源多倍体等一、远缘杂交障碍及克服途径障碍：花粉萌发不好、花粉管伸长缓慢、雄配子不能顺利通过珠孔进入胚囊壳完成受精、远缘杂种的某亲本的染色体全部或部分消失、杂种灭亡和杂种不育。克服途径：使用失活的母本花粉、生长素类物质（2，4—D）或利用可交配基因和桥梁亲本，采取幼胚拯救和染色体加倍等措施。二、染色体组的消减：即单倍体产生和二倍体化1、单倍体：含有配子染色体数目的孢子体单倍体包括：（1）整倍体单倍体：一倍体、多倍单倍体（同源多倍单倍体、异源多倍单倍体）（2）非整倍体单倍体：二体单倍体（n+1）、附加单倍体（n+1′）、缺体单倍体（n-1）、置换单倍体（n-1+1′）2、单倍体的产生①自然产生：双生苗（多胚现象）、半配合（精、卵各自分裂→嵌合体）②诱发产生：远源杂交蒙导、延迟授粉、单倍体的诱发基因（大麦中的hap基因）和核质互作、利用合子发育过程中染色体消减，以及花药、花粉核未授粉的子房、胚珠培养等。3、二倍体化可自然加倍，但频率很低，一般需要人工加倍。目前最常用的方法是用秋水仙素处理在细胞分裂时期的分生组织，使其新生器官的染色体加倍。4、单倍体在育种上的应用（1）提高选择效率，加速育种进程，因为单倍体的基因型核表现型是一致的，对于隐性基因控制的性状特别有效，常规杂交育种需要8～10年，而单倍体育种只须一个世代即可得到纯合二倍体。（2）加速纯系的获得，尤其对于玉米等异花授粉作物杂种优势利用来说具有特别重要意义。（3）利用花粉植株进行异源染色体或基因的转移，例如：小黑麦（AABBRR）×小麦（AABBDD）→F1（AABBRD）→R、D两组单体在减数分裂过程中将以0～7的各种可能出现于子细胞中。通过花粉培养可得到类型丰富的花粉植株，这些植株在遗传育种中具有重要的研究利用价值。（4）利用单倍体进行突变体的选择，由于单倍体没有显隐性关系，所以无论是培养过程中引起的体细胞变异还是在人工诱导产生的突变体，特别是隐性突变体，均可以有效地表现出来。5、单倍体育种的不足（1）基因重组的机会只有一次，缺少常规杂交育种各个分离世代的基因交换与重组的机会，后代不能积累更多的优良基因。（2）单倍体诱导技术还不是很完善，花培出愈率和绿苗率均较低，单倍体群体小，很多优良基因可能被淘汰。三、染色体组的添加——异源多倍体、同源多倍体等染色体组的添加可以自然发生，也可以人工诱导合成1、异源多倍体：在正常二倍体染色体组的基础上添加一个至多个异种染色体组的个体。如：小麦、燕麦、棉花等典型的例子是普通小麦和小黑麦一粒小麦（AA）2n＝14×？（BB）AB染色体自然加倍二粒小麦（AABB）2n＝28×节节麦（DD）2n＝14ABD染色体自然加倍普通小麦（AABBDD）2n＝42普通小麦AABBDD×黑麦RRABDR（不育）染色体加倍AABBDDRR八倍体小黑麦硬粒小麦（AABB）×黑麦（RR）ABR（不育）染色体加倍AABBRR（六倍体小黑麦）2、同源多倍体：在正常二倍体的染色体基础上添加一个至多个同种染色体组的个体。如：马铃薯等同源多倍体在有利基因剂量效应对植株的生长量和某些生物产物有促进作用。如三倍体甜菜、橡胶、香蕉、西瓜、草莓等。典型例子：三倍体无籽西瓜3、同源异源多倍体（如AAAAGG）是介于同源多倍体和异源多倍体之间的过渡类型。典型例子：三倍体无籽西瓜二倍体西瓜（BB2n＝2x＝22）0.2%秋水仙素处理生长点四倍体西瓜（BBBB）♀×二倍体西瓜♂三倍体西瓜（BBB）（*不育，不结籽，在外界花粉刺激下可结实）第三节染色体水平的细胞遗传学操纵一、染色体的消减二、染色体的添加三、染色体的代换一、染色体的消减从正常细胞中去掉一条染色体，染色体数变为（2n-1），叫做单体；去掉一对同源染色体，则叫缺体（2n-2）；如果去掉的是两条非同源染色体则称为双单体（2n-1-1）。除了消减正常的整条染色体外，还可以消减染色体的某一个臂，称为端体。单体在遗传上不稳定，自交后可分离出正常的二体、单体和缺体三种类型，除缺体外，多数单体和二体在外部形态上十分相似，直观上很难区分，必须进行细胞学观察，才能把单体植株挑选出来。因此，单体植株的保存很困难。以小偃6号1D单体（含14＋15）作为受体与含有5＋10优质亚基的品种杂交，进行优质亚基聚合的染色体工程法。2D单体小麦与遗4212杂交F1出现的单价体箭头示双单体4D缺体小麦PMC减数分裂MI2n=20Ⅱ八倍体小堰麦PMC减数分裂MI2n=28Ⅱ杂种F1根尖染色体2n=48簇毛麦6VS端体：a,T240-6-1(2n=41+t);b,T240-6-1(2n=41+2t)在染色体工程上，常用单体植物系统和缺体植物系统，它们是染色体工程和基因定位的重要材料。例如，已知某植物的某对性状是由A和a一对基因控制的，而且已获得该植物的所有单体或缺体，用单体法或缺体法确定A（a）基因所在的染色体。1、单体法2、缺体法单体、缺体在基因定位上的应用1、单体法（1）若测定的二体植株的基因是隐性纯合时，则单体系列为显性。Pa表现型二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×A表现型单体（n-1）Ⅱ+ⅠAG（n-1）Ⅰ+Ⅰa（n-1）Ⅰ（n-1）Ⅰ+ⅠAF1（n-1）Ⅱ+Ⅰa（n-1）Ⅱ+ⅡAa所有单体为a表现型所有二体为A表现型①若待测基因在某单体染色体上时，则aa基因型双体（2n）与A表现型的该染色体的单体（2n-1）杂交后，F1代表现型为：②若待测基因不在某单体染色体上时，则F1表现型为：Pa表现型二体（n-1）Ⅱaa+Ⅱ×A表现型单体（n-1）ⅡAA+ⅠG（n-1）Ⅰa+Ⅰ（n-1）ⅠA（n-1）ⅠA+ⅠF1（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）ⅡAa+Ⅱ无论单体还是二体，均为A表现型（2）若测定的基因为显性纯合时，则单体材料为隐性。①若待测基因在某单体染色体上时，则AA基因型二体（2n）与a基因型的该染色体单体（2n-1）杂交后，F2代的分离情况为：PA表现型二体（n-1）Ⅱ+ⅡAA×a表现型单体（n-1）Ⅱ+ⅠaG（n-1）Ⅰ+ⅠA（n-1）Ⅰ（n-1）Ⅰ+ⅠaF1（n-1）Ⅱ+ⅠA（n-1）Ⅱ+ⅡAaF2（n-1）Ⅱ+ⅡAA（n-1）Ⅱ+ⅡAA（n-1）Ⅱ+ⅠA（n-1）Ⅱ+ⅡAa（n-1）Ⅱ（n-1）Ⅱ+Ⅱaa因缺体的生活力较弱，占很少一部分几乎全部为显性性状显隐性比例为3︰1自交自交②若待测基因不在某单体染色体上，则F2分离情况为：PA表现型二体（n-1）ⅡAA+Ⅱ×a表现型单体（n-1）Ⅱaa+ⅠG（n-1）ⅠA+Ⅰ（n-1）Ⅰa（n-1）Ⅰa+ⅠF1（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）Ⅱ+ⅡAa自交自交F2（n-1）ⅡAA+Ⅱ（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）Ⅱaa+Ⅱ（n-1）ⅡAA+Ⅰ（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）Ⅱaa+Ⅰ（n-1）ⅡAA（n-1）ⅡAa（n-1）Ⅱaa显隐性比例为3︰1（n-1）ⅡAA+Ⅱ（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）Ⅱaa+Ⅱ显隐性比例为3︰1Pa表现型二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×缺体（n-1）ⅡF1（n-1）Ⅱ+Ⅰa全部为a表现型的单体自交F2（n-1）Ⅱ+Ⅱaa（n-1）Ⅱ+Ⅰa（n-1）Ⅱ2、缺体法（1）若待测定的是隐性基因a，则用显性缺体系统①若待测基因a在缺体染色体上，则：②若待测基因a不在缺体染色体上，则：Pa表现型二体（n-1）Ⅱaa+Ⅱ×缺体（n-1）ⅡAAF1（n-1）ⅡAa+Ⅰ全部为A表现型的单体F2（n-1）ⅡAA+Ⅱ（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）Ⅱaa+Ⅱ（n-1）ⅡAA+Ⅰ（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）Ⅱaa+Ⅰ（n-1）ⅡAA（n-1）ⅡAa（n-1）Ⅱaa显隐性比例为3︰1自交（2）若测定的是显性基因A，则用隐性缺体系统①若