贵州大学南区分析测试中心开放实验报告郭思远

1贵州大学南区分析测试中心面向学生开放实验报告书学生姓名：郭思远学院：生命科学学院班级：生物技术131班学号：1307040079联系电话：[phone]电子邮件：[e-mail]开放实验名称：电子显微技术开放实验类别：自主实验依托项目名称：重点实验室名称：实验指导教师：刘忠伟开放实验时间：贵州大学南区分析测试中心二○一一年制表2贵州大学实验报告学院：生命科学学院专业:生物技术班级：131班姓名郭思远学号1307040079实验组三组实验时间指导教师刘忠伟成绩实验项目名称微生物、小动物的扫描电子显微镜观察实验目的掌握扫描电镜的基本知识和工作原理，掌握扫描电镜微生物、动物样品常规制备技术；了解扫描电镜下微生物、动物组织的微观结构形态，熟悉扫描电子显微镜的操作。实验原理当具有一定能量的入射电子束轰击样品表面时，电子与元素的原子核及外层电子发生单次或多次弹性与非弹性碰撞，一些电子被反射出样品表面，而其余的电子则渗入样品中，逐渐失去其动能，最后停止运动，并被样品吸收。在此过程中有99%以上的入射电子能量转变成样品热能，而其余约1%的入射电子能量从样品中激发出各种信号。如图1所示，这些信号主要包括二次电子、背散射电子、吸收电子、透射电子、俄歇电子、电子电动势、阴极发光、X射线等。扫描电镜设备就是通过这些信号得到讯息，从而对样品进行分析的。而我们本次通过离子溅射仪对材料进行镀膜，避免材料荷电。荷电是入射电子的量大于产生的二次电子或者背散射电子的数量，从而导致在材料表面形成电子的富集（产生负电位）。由于负负相斥的原理，使得后形成一道一道白色的二次电子突然放电的现象。因此要得到满意的形貌，应该在材料表面形成一个有效的电子通路，即在样品台和材料表面有导电通路。最佳的办法就是在表面镀膜。而且能增加二次电子发射率，使图像信噪比增强，看上去清楚。而某些运用低压成像和低真空成像的电镜则不需要这一步。实验仪器离子溅射仪S-3400N扫描电镜3实验步骤1、微生物样品的制样方法：细菌液体培养一段时间后，2000转离心弃上清，而后用2.5％戊二醛在4℃条件下固定12h，用0.1mol/L磷酸缓冲液（PBS）清洗数次，以便洗去固定剂；然后用1%锇酸溶液后固定1h，0.1mol/L磷酸缓冲液（PBS）清洗数次。在叔丁醇液态条件下用30%、50％、70％、90％的叔丁醇/酒精混合液各脱水5min；100％叔丁醇脱水两次，每次5min；将试管中叔丁醇抽干，置4℃5～10min，待叔丁醇变为固态，冷冻干燥30～60min；将脱水处理过的样品用导电胶粘在样品台上，离子溅射仪镀金膜，S-3400N扫描电镜观察并拍照。2、小动物及动物组织的制样方法：取样品清洗后，用2.5％戊二醛4℃固定12h以上，再用0.1mol/L磷酸缓冲液（PBS）清洗数次，然后用1%锇酸溶液后固定1h，0.1mol/L磷酸缓冲液（PBS）清洗数次。余下的步骤与1相同实验数据图为蚂蚁在电镜下的观察图4实验总结这是我第一次使用电镜，无疑是让我感到非常新鲜的。令我感触比较深的是在实验的过程中刘老师对我们操作的要求非常严格，每一步都要按照规定的步骤来，非常的严谨，这是我们在以后的实验中值得铭记和注意的。另外，印象比较深的还有扫描电镜独特的观察机制，即需要给材料镀上金膜那一步，让我深刻的见识到了扫描电镜的独特之处，也对扫描电镜的工作原理有了更直观而深刻的认识。指导教师意见签名：201年月日注：双面打印，如不够填写，可另附页。