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肠杆菌科南京医科大学临床检验系赵旺胜一.分布9版伯杰鉴定细菌手册分为24个属，108个种现增加到31个属,常见的15个属1.占临床分离菌总数50%2.占G-杆菌总数80%3.占败血症50%4.占尿路感染70二.临床意义有些菌属对人类有明显的致病作用1、鼠疫耶耳森菌--引起烈性传染病2、埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶耳森菌属可导致腹泻、食物中毒.伤寒有些菌属与医院感染有关1、肺炎2、脑膜炎3、菌血症4、各种部位的感染多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌与人类感染有关的肠杆菌科细菌有31个菌属，其中临床标本中常见的菌属有15种克雷伯菌属爱德华菌属邻单胞菌属变形杆菌属普罗威登斯菌属沙门菌属耶尔森菌属志贺菌属沙雷菌属肠杆菌属埃希菌属哈夫尼亚菌属枸橼酸杆菌属摩根菌属多源菌属三.微生物特性1.G-杆菌，多数有鞭毛、菌毛2.发酵葡萄糖，兼性厌氧3.氧化酶阴性4.还原硝酸盐为亚硝酸盐5.触酶（＋）6.营养条件不高，拉丝试验涂片：G-b氧化酶试验非发酵菌、弧菌－+肠杆菌科细菌、不动、嗜麦芽菌双糖试验FO不动、嗜麦芽肠杆菌科细菌苯丙,葡盐,枸,硝,赖,鸟,氨对,山,肌,侧,,吲哚硝酸盐还原+－嗜麦芽不动四、鉴定流程图种属鉴定科的特征硝酸盐还原＋葡萄糖发酵氧化酶－触酶＋属间鉴定特征属内种间鉴定特征血清学分型报告细菌种名报告细菌血清型概述分子生物学鉴定五、肠杆菌科的初步分群可用苯丙氨酸和葡萄糖酸盐试验将肠杆菌科分为四大组菌属名苯丙氨酸葡萄糖酸盐变形杆菌属+－普鲁维登斯菌属+－摩根氏菌属+－塔特姆菌属+－克雷伯菌属－+肠杆菌属－+多源菌属－+沙雷菌属－+西地西菌属－+哈夫尼亚菌－+埃希菌属－－志贺菌属－－沙门菌属－－枸橼酸杆菌属－－爱德华菌属－－耶尔森菌属－－克卢瓦菌属－－兰恩氏菌属++六.苯丙氨酸阳性组的各属鉴别试验变形杆菌属普鲁维登菌属摩根氏菌属塔特姆属H2S+---枸橼酸盐+/-+--靛基质+/-++-1.变形杆菌属内各种的鉴别试验普通变形杆菌奇异变形杆菌潘氏变形杆菌产粘液变形杆菌靛基质+---鸟基酸-+--木糖+++-2.普鲁维登菌属各种的鉴别试验产碱斯图雷极普鲁维登斯菌普鲁维登斯菌普鲁维登斯菌侧金盏花醇+-+甘露醇+--生化反应雷氏斯氏产碱拉氏海氏吲哚产生++++-肌醇++--V海藻糖-+---戊五醇+-+-+3.摩根菌属种的鉴定试验摩根摩根菌摩根菌(生物1群)赖氨酸-+动力+-4.塔特姆菌属的鉴定苯丙氨酸H2S枸橼酸盐鸟氨酸靛基质+----+_－+－+－+－+－+－+苯丙氨酸+H2S枸橼酸盐靛基质鸟氨酸靛基质侧金盏花醇甘露醇普通变形杆菌奇异变形杆菌潘氏变形杆菌产碱普鲁维登斯菌雷极普鲁维登斯菌斯图普鲁维登斯菌摩根菌塔特姆菌.苯丙氨酸阳性组菌属鉴别索引图5-七.葡萄糖酸盐阳性组各属鉴别试验克雷伯菌属沙雷菌属肠杆菌属哈夫尼亚菌属多源菌属动力-++++DNA酶-+---鸟氨酸-+++-枸橼酸盐+++-+原克雷伯菌属（klebsiella）有5个种，2个亚种肺炎克雷伯菌（K.pneumoniae）产酸克雷伯菌（K.oxytoca）解鸟氨酸克雷伯菌（K.ornithinolytica）植生克雷伯菌（K.planticola）土生克雷伯菌（K.terrigena）分类克雷伯菌属臭鼻亚种鼻硬结亚种解鸟氨酸柔特勒菌（R.ornithinolytica）植生柔特勒菌（R.planticola）土生柔特勒菌（R.terrigena）柔特勒菌属(Raoultella)Thisproposalisbaseon16SrDNAandrpoBgenesequencingandcarbonassimilationstudies.培养特征血琼脂上菌落较大，呈黏液状，以接种环挑取时易拉成丝在肠道培养基上呈发酵乳糖小菌落在液体培养基内生长混浊、浓厚、可见菌膜，管底有粘性沉淀物K.pneumoniae菌落（血平板）克雷伯菌属1.克雷伯菌属各种的鉴别试验产酸克雷伯菌肺炎克雷伯菌臭鼻克雷伯菌鼻硬结克雷伯菌靛基质+－－－甲基红－－++丙二酸盐++－+克雷伯菌和柔特勒菌种间鉴定表生化反应肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌解鸟氨酸柔特勒菌植生柔特勒菌肺炎克雷伯菌臭鼻亚种肺炎克雷伯菌鼻硬结亚种土生柔特勒菌脲酶++++---吲哚产生-++--(-)-鸟氨酸--+---(-)甲基红-(-)++++VV-P++V+--+丙二酸盐++++-++枸橼酸盐++++V-V克雷伯菌属S.marcescens菌落特征（普通营养平板）沙雷菌属S.marcescens菌落特征（普通营养平板）沙雷菌属2.沙雷菌属各种的鉴别试验粘质沙雷菌液化沙雷菌红色沙雷菌鸟氨酸++－阿拉伯糖－++分类：现有13个种2个生物型原有7个种2个生物型产气肠杆菌(E.aerogenes)阴沟肠杆菌(E.cloacae)杰高维肠杆菌坂崎肠杆菌泰洛肠杆菌中间肠杆菌聚团肠杆菌河生肠杆菌生物群1河生肠杆菌生物群2后增加7个菌阿氏肠杆菌何氏肠杆菌溶解肠杆菌超压肠杆菌克沃尼肠杆菌考伯肠杆菌帕瑞勒肠杆菌肠杆菌属3.肠杆菌属各种的鉴别试验坂崎杆菌阴沟杆菌产气杆菌格高菲杆菌赖氨酸－－++山梨醇－++－本菌属的细菌生化反应不典型，常用的商品化鉴定系统很难达到90％以上的鉴定正确率肠杆菌属种间鉴定表生化反应产气杰高维帕瑞勒聚团河生，生物群1癌生阪崎何氏阴沟克沃尼中间考伯阿氏河生，生物群2溶解超压赖氨酸脱羧酶+++-------------山梨醇+--V----++++++++VP试验++VV+++++++--+++七叶苷+++V+++-V++V++++蜜二糖++VV+-+-++++-+++蔗糖+++V+-++++V++-+-精氨酸脱氢酶-----++V+--+VV+-鸟氨酸脱羧酶+++-V++++-V+++++核糖醇+-------V-------鼠李糖+++V++++++++-+++α-甲基-D-葡萄糖苷+---V-+VV-++++++黄色素---V--+--V------肠杆菌属4.哈夫尼亚菌属鉴定葡萄糖酸盐枸橼酸盐棉子糖+－－5.多源菌属种的鉴定试验聚团多源菌弥散多源菌赖氨酸--鸟氨酸--水扬苷+-5.葡萄糖酸盐阳性菌属鉴别双岐索引图－－－+－－++－+－－++－－++－+－++--－－++－+葡萄糖酸盐+侧金盏花醇赖氨酸鸟氨酸赖氨酸鸟氨酸靛基质枸橼酸盐山梨醇丙二酸盐阴沟肠杆菌产酸克雷伯菌山梨醇肺炎克雷伯菌产气肠杆菌红色沙雷菌多源肠杆菌鼻硬结克雷伯菌臭鼻克雷伯菌哈夫尼亚菌山梨醇格高菲肠杆菌阿拉伯糖贩崎肠杆菌阴沟肠杆菌粘质沙雷菌液化沙雷菌八.苯丙氨酸葡萄糖酸盐阴性组的各属鉴别试验沙门菌属志贺菌属埃希菌属枸橼酸杆菌属耶尔森菌属爱德华菌属甘露醇+++++－ONPG－－+++－动力+－++++枸橼酸盐+/－－－+－－赖氨酸+－+－－+枸橼酸杆菌属分类枸橼酸杆菌属（Citrobacter）包括11个种弗劳地枸橼酸杆菌(C.freundii)差异枸橼酸杆菌（C.diversus）库斯枸橼酸杆菌无丙二酸盐枸橼酸杆菌(C.amalonaticus)（C.koseri）布拉吉枸橼酸杆菌（C.braakii）雷登枸橼酸杆菌（C.rodentium）塞拉克枸橼酸杆菌（C.sedlakii）魏克曼枸橼酸杆菌（C.werkmanii）扬哥枸橼酸杆菌（C.youngae）吉乐枸橼酸杆菌（C.gillenii）穆利枸橼酸杆菌（C.murliniae）法玛丽枸橼酸杆菌（C.farmeri）1.枸橼酸杆菌属各种的鉴别试验费劳地枸橼酸杆菌异型枸橼酸杆菌丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌鸟氨酸－++侧金盏花醇－+－注意：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类资料枸橼酸杆菌种间鉴定表生化反应弗劳地穆利杨格吉乐魏克曼无丙二酸盐法玛丽布拉吉库斯赛拉克雷登鸟氨酸脱羧酶-----++++++丙二酸盐利用---++---+++尿素水解VV+-++VVV++卫矛醇发酵-++----VV+-KCN生长++++++++-+-蔗糖发酵+V-V--+-V--D－阿拉伯醇发酵--------+--蜜二糖发酵+V-V--++-+-枸橼酸杆菌属2.爱德华菌属各种的鉴别试验迟缓爱德华菌保科爱德华菌鲶鱼爱德华菌H2S+－－甲基红++－3.埃希菌属种的鉴别试验大肠埃希菌大肠埃希菌（不活泼株）葡萄糖产气+－动力+－致泻性E.coli分为5类：肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)肠致病性大肠埃希菌(EPEC)肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)肠出血型大肠埃希菌(EHEC)肠凝聚型大肠埃希菌(EAggEC)埃希菌属临床意义(ClinicalSignificance)E.coli以肠道外感染多见，主要有泌尿系统感染E.coli中的致病菌株能引起各种类型的腹泻，根据其不同的血清型别、毒力和临床症状鉴定要点不活跃大肠埃希菌与志贺菌易混淆，需相互鉴别醋酸钠葡萄糖铵利用粘质酸盐产酸试验大肠埃希菌＋＋＋志贺菌属－－－埃希菌属大肠埃希菌在中国兰平板上为蓝色菌落大肠埃希菌在伊红美蓝平板上为紫黑色菌落大肠埃希菌在麦康凯和SS平板上为红色菌落培养特征兼性厌氧菌营养要求不高菌落呈中等大小、无色、半透明、光滑在SS平板上，因产生H2S可形成黑色中心的菌落伤寒沙门菌菌落形态（SS平板）四沙门菌属常用血清：O多价血清（含A～F群）O、H、Vi抗原因子血清方法：从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符合沙门菌属生物学特性，则采用A-F多价血清初步确定是否为Salmonella1.如阳性，即用O因子血清分群；再用第一相H因子血清定型，也可用第二相辅助定型2.如阴性：应考虑是否有Vi抗原?血清学分型加热或传代去除Vi抗原凝集：做O多价和单价凝集不凝集：可能为A～F以外沙门菌属③如是双相菌，进一步用复合血清1、2、5检查第2相抗原。群菌型Ｏ抗原Ｈ1相Ｈ2相A甲型副伤寒1,2,12a－B乙型副伤寒1,4,12b1.2鼠伤寒1,4,12i1.2C1丙型副伤寒6,7(Vi)C1.5C1猪霍乱6,7c1.5D伤寒1,9(Vi)d－肠炎1,9,12g,m－都柏林1,9,12(Vi)g,p－E火鸡3,10e,h1.w山夫顿3,15e,h1.bF河伯丁1,3,19g,t－兼性厌氧菌营养要求不高普通平板：中等大小、半透明、光滑鉴别培养基：乳糖不发酵的菌落培养特性菌落形态（麦康凯平板）志贺菌属种属鉴定菌属特征发酵葡萄糖产酸不产气赖氨酸（－）H2S（－）尿素（—）动力（—）志贺菌属5.志贺菌属的鉴定先用志贺多价血清与菌种凝集，如多价血清凝集为志贺菌，多价里不包含鲍氏C16-20再进一步用因子血清凝集而定群。亚群和种血清型痢疾A1－10福氏B1a,1b,2a,2b,3a,3b,4a,4b,5,6鲍氏C1－C15宋氏D6.耶尔森菌属各种的鉴别试验鼠疫耶耳森菌假结核耶耳森菌小肠耶耳森菌弗氏耶耳森菌中间耶耳森菌鸟氨酸--+++鼠李糖-+-++密二糖-+--+7、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性组菌属鉴别双歧索引图+－－－++－++－－++－－+－－+－++苯丙氨酸、葡萄糖酸盐－-甘露醇ONPG枸橼酸盐动力H2S侧金盏花醇赖氨酸沙门菌属志贺菌属迟缓爱德华菌甲基红异型枸橼酸杆菌鸟氨酸葡萄糖产气耶尔森菌属丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌费劳地枸橼酸杆菌大肠埃希菌大肠埃希菌（不活泼株）保科爱德华菌鲶鱼爱德华菌肠杆菌鉴定选用多少生化反应管为好：苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、赖氨酸、鸟氨酸、氨基酸对照、枸橼酸盐、硝酸盐、侧金盏花醇、山梨醇、甘露醇、ONPG、靛基质、双糖（H2S）九、兰恩氏菌属的鉴定苯丙氨酸葡萄糖酸盐枸橼酸盐靛基质+++－十.西地西菌属各种的鉴别试验戴氏西地西菌拉氏西地西菌奈氏西地西菌鸟氨酸+--山梨醇--+十一.克卢瓦菌属各种的鉴别试验抗坏血酸克卢瓦菌冷半月克卢瓦菌赖氨酸+-十二.API鉴定系统(20E)菌液制成0.5麦氏浊度,加入20E板条,火一样的热情浪一样的冲劲十三肠杆菌科某些菌株的特殊性质1.变形杆菌菌落呈迁延性生长2.克雷伯菌自身菌落可拉出丝来3.多源聚团菌在M-H