芳香胺类药物分析.

第七章芳香胺类药物的分析常见的芳胺类药物对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构COOR2NR1H第一节芳胺类药物的分析COOC2H5H2N苯佐卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl盐酸普鲁卡因COOCH2CH2N(C2H5)2CH3(CH2)3NHHCl盐酸丁卡因CONHCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl盐酸普鲁卡因胺酰胺类药物的基本结构NHCR2OR1R3R4HONHCOCH3NHCOCH3C2H5O非那西丁（对乙酰氨基苯乙醚）对乙酰氨基酚（扑热息痛）SOONHCOCH3CH3CONH醋氨苯砜NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HCl盐酸利多卡因NHCONC4H9CH3CH3HCl盐酸布比卡因一、结构与性质（一）具有芳伯氨基或潜在的芳伯氨基，可用重氮化—偶合反应鉴别或亚硝酸钠滴定法测定含量。（二）酯键或酰胺键易水解（三）具脂烃胺侧链，弱碱性，可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应进行鉴别或非水碱量法测定含量。（四）游离碱多为碱性油状液体或低熔点固体，难溶于水，易溶于有机溶剂，其盐酸盐具有一定的熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂。（六）UV（七）IR（五）某些特征取代基（如酚羟基）的反应二、鉴别试验（一）重氮化—偶合反应芳香第一胺类鉴别反应ArNH2HClNaNO2重氮盐橙黄～猩红色萘酚OH-直接：盐酸普鲁卡因、对氨基水杨酸钠、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因Ch.P（2010）【鉴别】（4）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录Ⅲ）取供试品约50mg，加稀盐酸1ml,必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。间接：对乙酰氨基酚、非那西丁、醋氨苯砜、贝诺酯对乙酰氨基酚Ch.P（2005）【鉴别】（2）取本品约0.1g，加稀盐酸5ml，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5ml，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性β-萘酚试液2ml，振摇，即显红色。对氨基酚对乙酰氨基酚、HCl（乳白色）盐酸丁卡因H2NaNO（二）三氯化铁反应对乙酰氨基酚（三）与重金属离子反应1.与铜和钴离子反应黄色蓝紫色硫酸铜盐酸利多卡因氯仿碳酸钠亮绿色细小盐酸利多卡因H2CoCl棕黑色）暗棕色羟肟酸铁（紫红色羟肟酸盐酸普鲁卡因胺322FeClOH2．羟肟酸铁盐反应黄色）（盐酸利多卡因、3HNO23NOHg红色或橙黄色）（对氨基苯甲酸酯类、3HNO23NOHg3．与汞离子的反应（四）水解产物的反应1.盐酸普鲁卡因Ch.P（2005）【鉴别】（1）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10％氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。溶解）对氨基苯甲酸（白色对氨基苯甲酸钠纸变兰色）（使湿润的红色石蕊试二乙氨基乙醇对氨基苯甲酸钠油状物普鲁卡因盐酸普鲁卡因HClHClNaOH2.苯佐卡因Ch.P（2005）【鉴别】（1）取本品约0.1g，加氢氧化钠试液5ml，煮沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。）（碘仿臭气，黄色乙醇乙醇苯佐卡因32CHINaOHINaOH（五）氯化物的反应药典附录“一般鉴别试验”。1.沉淀反应AgClCl)Ag(NHOHNHAgClAgClAgNOCl33HNO2323HNO32.氧化还原反应纸显蓝色使湿润的淀粉碘化钾试ClMnOCl2、SOH242（六）制备衍生物测熔点1．三硝基苯酚衍生物盐酸利多卡因Ch.P（2005）【鉴别】取本品0.2g，加水20ml溶解。（1）取溶液10ml，加三硝基苯酚试液10ml，即生成沉淀；滤过，沉淀用水洗涤后，干燥，依法测定（附录ⅥC），熔点为228～232℃，熔融时同时分解。盐酸布比卡因Ch.P（2005）2.硫氰酸盐衍生物盐酸丁卡因Ch.P（2005）【鉴别】（1）取本品约0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸铵溶液1ml，即析出白色结晶；滤过，结晶用水洗涤，在80℃干燥，依法测定（附录ⅥC），熔点约为131℃。盐酸布比卡因Ch.P（2005）【鉴别】（2）取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA）测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸光度分别为0.53～0.58与0.43～0.48。（七）UV（八）IR盐酸布比卡因Ch.P（2005）【鉴别】（3）本品的红外光吸收图谱与对照的图谱（光谱集324图）一致。三、特殊杂质检查（一）对乙酰氨基酚1.有关物质杂质来源中间体、副产物及分解产物对氯乙酰苯胺杂质对照品法检查方法TLC其他杂质参比杂质对照品法2.对氨基酚杂质来源中间体、水解产物反应原理兰色亚硝基铁氰化钠对氨基酚OH检查方法对照法取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml，摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50g用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.005％）。%005.0%1000.11050%1006供试品量允许杂质存在的最大量L（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查检查方法TLC杂质对照品法杂质来源水解产生精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml中含30g的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅤB）试验，吸取上述两种溶液各10l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14∶1∶1∶4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。%2.1%100105.2101030%1003供试品量允许杂质存在的最大量L（一）亚硝酸钠滴定法1.原理具芳伯氨基的药物Cl-+22+2+++ArNH2NaNO2HClArNNNaClH2O四、含量测定具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定。具潜在芳伯氨基的药物，如具酰胺基药物（对乙酰氨基酚等）经水解，芳香族硝基化合物（如无味氯霉素）经还原，也可用本法测定。NHCOR+H2ONH2+RCOOHH+△NO2+6[H]NH2+2H2O2.主要测定条件（1）加入适量KBr加速反应KBr为催化剂NaNO2+HCl→HNO2+NaClHNO2+HCl→NOCl+H2O在盐酸存在下，重氮化反应的机理为：NN+Cl-快NNOH快NNOH慢NO+Cl-NH2OHNOBrHBrHNO22OHNOClHClHNO22（1）K1（2）K2∵K1≈300K2加入KBr，可增大被测溶液中NO+的浓度，所以能加快重氮化反应速度（2）加过量盐酸加速反应在不同酸中重氮化反应的速度为：HBr＞HCl＞H2SO4＞HNO3盐酸1:2.5～6；加入盐酸：①重氮化反应速度加快；②重氮盐在酸性溶液中稳定；③防止生成偶氮氨基化合物，而影响测定结果NN+Cl-+H2NNNNH+HCl（3）室温条件下滴定10～30℃（4）滴定速度：先快后慢滴定管尖端插入液面下2/3处，滴定液一次大部分放下，近终点时方改为慢速滴定3.指示终点的方法（1）永停滴定法Ch.P（2005）、BP（2004）永停滴定法（附录ⅦA）用作重氮化法的终点指示时，调节R1使加于电极上的电压约为50mV。取供试品适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水40ml与盐酸溶液（1→2）15ml，而后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化钾2g，插入铂—铂电极后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L或0.05mol/L）迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。（2）电位法USP（28）（3）外指示剂法KI—淀粉糊剂或试纸2NaNO2+2KI+4HCl→2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O（4）内指示剂法中性红不可逆指示剂4.测定方法盐酸普鲁卡因Ch.P（2005）取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（附录ⅦA），在15～25℃，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.28mg的C13H20N2O2·HCl（二）非水溶液滴定法脂烃胺侧链，具弱碱性（三）分光光度法对乙酰氨基酚在0.4％氢氧化钠溶液中，于257nm波长处有最大吸收，其紫外吸收光谱特征，可用于其原料及其制剂的含量测定。对乙酰氨基酚原料、片剂、咀嚼片、泡腾片、注射液、栓剂、胶囊、颗粒。对乙酰氨基酚Ch.P（2005）取本品约40mg，精密称定，置25ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，在257nm的波长处测定吸光度，按C8H9NO2的吸收系数为715计算，即得。%11cmEUSP（28）对照法例精密称取对乙酰氨基酚42mg，置250ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，在257nm的波长处测定吸光度为0.594，按C8H9NO2的吸收系数为715计算百分含量。%11cmE%9.98%100421025051001001715594.0%3含量%100100%%11WVDLEAcm含量W=42mg→V=250ml5ml→100mlD=100/5片剂，吸收系数法定量：%100100%%11标示量标示量WWVDLEAcm例取标示量为0.3g的对乙酰氨基酚片10片，总重为3.3660g，称出44.9mg，置250ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml及水50ml，振摇15min，加水至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过。弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，在257nm的波长处测的吸光度为0.583，按C8H9NO2的吸收系数为715计算本片剂的标示量%。%11cmE%9.101%1003.0103660.3109.4425051001001715583.0%100100%3%11标示量标示量WWVDLEAcm片剂，吸收系数法（四）比色法Anm处测定棕红色化合物，磺酸钠萘醌，盐酸普鲁卡因482421max94pH（五）荧光法——荧光探针技术使荧光衍生化试剂与本身无荧光或荧光效率低的化合物反应，其产物具有强荧光，从而使检测灵敏度大大提高。荧光物荧胺盐酸普鲁卡因胺pH7.5激发波长：λex400nm发射波长：λem485nm测定荧光强度，标准曲线法定量。（六）HPLC法盐酸普鲁卡因注射液可同时测定盐酸普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸离子抑制色谱法内标法定量七、生物样品分析（一）分光光度法测定人唾液中对乙酰氨基酚的含量1.预处理方法唾液+三氯醋酸去蛋白2.测定方法分光光度法Anm处测定蓝色，于亚硝酰铁氰化钠对氨基酚对乙酰氨基酚6.695maxOHHCl（二）对乙酰氨基酚急性中毒的血药浓度检测分析1.预处理方法血浆+硫酸锌去蛋白，乙醚提取，氮气流挥干，水溶解2.测定方法加预