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学习目标1.简述动物细胞与组织培养的过程。3.举例说出细胞融合和单克隆抗体。2.简述运用动物细胞核移植技术克隆动物的过程。4.关注克隆技术的伦理问题。克隆羊“多利”新华网2010.12.3.消息克隆羊多利重生这4只克隆羊在遗传上与多莉毫无差异。多莉诞生于14年前，是第一个使用成熟细胞克隆的哺乳动物。克隆羊多莉(Dolly)已经获得“重生”。最初进行此项克隆研究的英国科学家又培育出4只克隆羊，被形象地称之为“Dollies”(多莉的复数)。它们是多莉的复制品，在遗传上与多莉丝毫不差，多莉在7年前离开这个世界。[问题]：2、许多动物细胞能够分泌蛋白质，如抗体等。但是单个细胞分泌的蛋白质的量是很少的，怎样才能获得大量的分泌蛋白呢？必须借助于大规模的动物细胞培养1、在治疗烧伤病人时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对一个大面积烧伤的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人的皮肤来源不足，而且会产生排异反应。那么。怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢？1、动物细胞与组织培养的概念？2、组织分散成单个细胞的方法是什么？3、如何界定原代培养和传代培养？4、动物组织与细胞培养的条件？阅读课本P61-P62回答以下问题一、动物细胞与组织培养在体外模拟动物体内环境，将动物体细胞或组织，在无菌、温度适宜和营养充足条件下培养，使其继续生长、增值并维持原有结构和功能的技术。1、概念2、条件（1）无菌、无毒的环境：（添加一定量的抗生素；定期更换培养液，以便清除代谢产物。）（2）营养物质(区分天然培养基与合成培养基)（无机盐、葡萄糖、氨基酸、促生长因子、维生素、动物血清等）（3）温度和pH：37℃,7.2-7.4（4）气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2）3、过程（图2-13）（1）动物细胞培养取动物组织块胰蛋白酶等处理细胞悬液分散成单个细胞培养皿中培养（原代培养）形成一层细胞移到新培养液中培养（传代培养）（2）动物组织培养剪取动物组织块生理盐水冲洗、自然沉降移入培养瓶（贴壁培养）4、相关概念原代培养：是指从供体获取组织或细胞后的初次培养。传代培养：将原代培养的细胞分离稀释后转入新的培养瓶中继续培养，称为传代培养。细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。动物细胞生长特性细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等5、应用培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植1、为什么要将组织细胞分散成单个细胞？2、为什么选用胰蛋白酶做上述处理？3、动物细胞培养能否象植物组培那样最终培养成生物个体？使每个细胞能与培养液接触因为动物细胞间隙中有弹性纤维等蛋白质和一些其它物质。不能，因为动物细胞的全能性受到抑制。思考与探究：如何用细胞培养技术，为烧伤病人植皮？取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植动物细胞培养技术应用这只老鼠身上的“人耳”是由我国科学家曹谊林教授利用细胞工程技术复制出来的。器官克隆一例二、动物细胞核移植技术与体细胞克隆克隆遗传上完全相同的分子、细胞或来自同一祖先的生物个体的无性繁殖群体。用体细胞核移植技术进行的克隆称为体细胞克隆原理：动物体细胞核的全能性克隆羊“多利”的产生过程:问题：1）上述多利羊的成功培育过程表明了什么？也反映出了什么问题？.2）书上说治疗性克隆和生殖性克隆的大讨论，你有何观点，请说出来。你认为生殖性克隆会带来哪些伦理上的问题？3）克隆羊“多利”六岁就离开了这个世界，换了关节炎和肺病，这表明______________，如果克隆人是否也存在健康隐患？4）你对克隆技术有哪些期望？5）细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？②在治疗人类疾病时，转基因克隆动物细胞、组织和器官可以作为异体移植的供体。（1）医药卫生：①转基因克隆动物可以作为生物反应器，生产许多珍贵的医用蛋白；③研究克隆动物和克隆细胞可使人类更深入地了解胚胎发育及衰老过程；④用克隆动物做疾病模型，能使人们更好的追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病。应用（2）畜牧业：利用体细胞克隆技术可以加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育；在保护濒危物种方面，可望利用体细胞核移植技术增加这些动物的存活数量。三、动物细胞融合和单克隆抗体强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。B淋巴细胞效应B淋巴细胞记忆B淋巴细胞分化抗体的传统生产方法抗原反复注射动物从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。单克隆抗体！提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？②会有几种融合方式？③杂交瘤细胞有何特点？④是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？⑤如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？阅读课本P66回答以下问题免疫小鼠培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B淋巴细胞注射特定抗原蛋白选择培养基上培养注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体具有能产生特定抗体的杂交细胞杂交细胞克隆产生特定抗体的杂交细胞多种杂交细胞融合[思考]：1、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理。2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体。单克隆抗体最主要的优点：化学性质单一，特异性强，灵敏度高，能大量制备。应用主要有：1、临床诊断2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤生物导弹：单克隆抗体作为载体分子，同抗癌药物相结合，将他们运载到肿瘤部位，杀死癌细胞，这种抗体——药物结合物称之为生物导弹。它能定向杀灭癌细胞，避免或减少对正常细胞的伤害，大大减轻了抗癌药物的副作用。总结一、动物细胞与组织培养二、动物细胞核移植技术与体细胞克隆三、动物细胞融合和单克隆抗体2、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A．经过免疫的B淋巴细胞B．不经过免疫的T淋巴细胞C．经过免疫的T淋巴细胞D．不经过免疫的B淋巴细胞1、单克隆抗体与血清抗体相比，优越之处在于（）A、单克隆抗体能够制成“生物导弹”B、单克隆抗体可以在体外制备C、单克隆抗体的特异性强，灵敏度高，产量也大大高于血清抗体D、单克隆抗体的制备过程简单CA3、（多选题）将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体，其依据是（）A．B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖B．B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体C．骨随瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体D．骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖AC4.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）d过程是一个_____________过程，该过程的进行常用_____________或_____________的诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成种类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是，其特点是_________________________________________。效应B抗原细胞融合聚乙二醇灭活的病毒选择性3既能无限增殖又能产生特异性抗体杂交瘤细胞(4)在培养时通过________分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项）__________________________________。（5）单克隆抗体与常规抗体相比，其特点是_______________________。特异性强、灵敏度高有丝无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适宜的气体环境作业优化探究p67评价指南