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实验1：茯砖茶中黄酮含量的测定前言：茯砖茶是古老茶类，属黑茶中的高档品种。黑茶是我国特有的产后发酵茶，拥有悠久的历史。黑茶中有丰富的茶多酚和黄酮类物质，其中大部分黄酮化合物具有生理活性，是极具开发前景的天然抗氧化剂，研究黑茶尤其是黑茶中的黄酮有着重要的实际意义。目前，已有一些学者对茶叶及其黄酮进行了一些研究，如刘勤晋等人“以食饵性高胆固醇血症家兔进行造模研究，观察康砖茶浸提液对高胆固醇血症的影响，证明黑茶有明显的降血脂作用；翟所强等53以患有高血脂并有不同程度感音神经性聋的男性作为对象观察饮用黑茶前后的血脂和听力变化。结果表明，黑茶可降低血胆固醇、甘油三酷，并能降低过氧化脂质的活性；杨宏等人通过动物学实验研究表明，金花茶叶的水浸出物，主要含黄酮类物质，具有降血糖、降血脂、抑制肿瘤生长、提高机体免疫能力等多种生理功能，是一种十分优良的功能性食品原料。而近年来许多药理研究也表明，黄酮类物质在防止皮肤疾病、增强免疫力和预防心血管疾病以及抗氧化活性等方面具有重要生物活性与功效。而对黑茶中黄酮的提取检测研究，却很少有文献报道。黄酮的检测主要是以其含芦丁为标准来衡量的，本文主要对湖南益阳产茯砖茶中黄酮的提取方法、提取时间和显色条件等进行了探究，以芦丁为对照品，用分光光度法对其含量进行了测定一、实验目的1.采用提取法从茯砖茶中提取黄酮类化合物。2.熟练测定黄酮总含量的方法，并可以进行准确测定。二、仪器及试剂1.仪器722型可见光分光光度计，电子天平2.试剂芦丁、95%乙醇、5%的亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、氢氧化钠溶液三、实验原理黄酮类化合物多为结晶性固体，难溶或不溶于水，易溶甲醇、乙醇等有机溶剂。所以可以用乙醇来提取黄酮类化合物。先用芦丁标准品配得一定浓度标准溶液，然后选择标准溶液的测定波长（一般为最大吸收波长），接着根据浓度梯度的不同绘制标准曲线得浓度与吸光度的对应关系，最后根据提取液所测得的吸光度来计算茯砖茶中的黄酮浓度，从而计算出含量。四、实验步骤及现象1.标准溶液的制备：精密称取0.5442g芦丁于1L容量瓶中，加适量甲醇，水浴上微热使其溶解，加乙醇定容至刻度，溶液为前绿色，得到0.5mg/ml标准溶液。2.测定波长的选择及标准曲线的制备：准备6个干净的25ml容量瓶，贴上编号分别为1-6，按下表顺序分别加入下列试剂。先加入一定量标准溶液和1ml亚硝酸钠，溶液颜色由浅绿色转变为亮黄色，放置6min后加入硝酸铝溶液1ml，混匀，溶液由亮黄色变为深红棕色，放置6min，加10ml氢氧化钠溶液并加水稀释至刻度，混匀。编号溶液1234560.5mg/ml标准溶液/ml0123455%亚硝酸钠/ml11111110%硝酸铝溶液/ml111111氢氧化钠溶液/ml1010101010103.取三号样，在420nm--540nm波长范围内测定吸收曲线，作图如下：结果表明在510nm处有最大吸收，故选择510nm作为总黄酮测定波长。4204404604805005205400.340.360.380.400.420.440.460.480.50吸光度波长吸光度4.标准曲线的制备：将配好的1—6号样品分别在510nm下测定吸光度，记录数据如下，做得标准曲线：编号类别123456吸光度0.0150.2630.4950.7170.9241.150标准品浓度mg/ml0.000.020.040.060.080.100.000.020.040.060.080.100.00.20.40.60.81.01.2吸光度浓度Equationy=a+b*xWeightNoWeightiResidualSumofSquares7.05143E-4Pearson'sr0.9996Adj.R-Squ0.99901ValueStandardEr吸光度Intercept0.03110.00961吸光度Slope11.2570.15869由上图可得：吸光度y与浓度x的关系为y=11.257x+0.03115.精密称取5.0012g茯砖茶于250ml圆底烧瓶中，加入95%乙醇100ml，将其置于85℃水浴锅中回流60min，抽滤，得滤液100ml。（注：若滤液不足100ml，加入95%乙醇至100ml，方便计算）6.取以下四份份滤液于25ml容量瓶中，按表中的顺序进行实验。种类编号1（对照）23（对照）4滤液/ml0.50.511亚硝酸钠溶液/ml0101硝酸铝溶液/ml0101氢氧化钠溶液/ml010010加水至/ml25252525测得吸光度0.5671.121五、数据处理计算过程如下：根据标准曲线得：吸光度y与浓度x的关系为y=11.257x+0.0311滤液0.5ml、1.0ml对应的吸光度分别为：y1=0.567，y2=1.121代入公式可得：x1=0.0476mg/mlx2=0.0968mg/ml实验称取茯砖茶5.0012g○10.5ml滤液溶于25ml容量瓶中，所得浓度为0.0476mg/ml，所以0.5ml滤液中的黄酮含量为25×0.0476，所以总的100ml滤液中的黄酮含量为：25×0.0476×（100/0.5）=238mg茯砖茶中黄酮含量为：0.238g/5.0012g×100%=4.76%○21.0ml滤液溶于25ml容量瓶中，所得浓度为0.0968mg/ml，所以1.0ml滤液中的黄酮含量为25×0.0968，所以总的100ml滤液中的黄酮含量为：25×0.0968×（100/1）=242mg茯砖茶中黄酮含量为：0.242g/5.0012g×100%=4.84%综合○1○2得黄酮的平均百分含量为4.8%，绝对误差○1○2分别为：4.76%—4.8%=—0.04%；4.84%—4.8%=0.04%，相对误差分别为：（0.04%/4.8%）×100%=0.83%；（0.04%/4.8%）×100%=0.83%。六、误差分析1.实验操作不当导致的误差，如称量过程中的误差，配溶液过程中的误差2.茯砖茶被浸取后自身颜色较深，对吸光度的测量有一定的影响3.在实验操作中加入亚硝酸钠及硝酸铝时放置时间不够使得反应不充分导致的误差等。七、反思与总结通过本次试验，我知道了测定植物中黄酮含量的一般方法，并可以熟练地掌握其要点。同组人：寇钰丽20131001205黑进城20131001206刘航20131001208实验时间：2016.10.20