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1/51、阐述茶多酚对自适应反应转录因子Nrf2和脱毒酶的影响茶激活自适应反应转录因子Nrf2细胞遭遇氧化逆境，会产生自适应反应，启动一系列脱毒酶和抗氧化酶合成，对抗氧化逆境。①自适应反应的关键角色是转录因子Nrf2，在稳态时它被细胞膜上Keap1束缚住，无活性。②在氧化逆境时（点火，促氧化），Keap1上游离巯基形成二硫键，空间结构改变，不再束缚Nrf2，Nrf2进入细胞核启动转录。如果基因中启动子区域含抗氧化反应元件(ARE)，Nrf2可以与之结合，启动这些基因的转录。许多脱毒酶和抗氧化酶基因中含ARE，因此，这些酶因适度氧化逆境增加。红色与绿茶均能激活Nrf2，这是它们预防疾病的重要机制。2、EGCG在皮肤细胞中抗凋亡机制EGCG在皮肤细胞的抗凋亡机制：EGCG诱导人皮肤细胞Bcl-2上升、Bax下降。EGCG激活皮肤细胞Erk2/5和Akt，使Bad磷酸化。Bcl-2是抗凋亡因子，Bax和Bad是促凋亡因子。Bad与Bcl-2可形成二聚体，使Bcl-2失去活性，因此Bad促凋亡。磷酸化Bad不能与Bcl-2结合，不再促凋亡。3、根据下图简要阐述EGCG保护神经细胞的机制。EGCG预防阿尔茨海默病机制：阿尔茨海默病是一种神经退行性疾病：认知能力下降、记忆减退，行为异常和障碍。病因为神经细胞沉积β淀粉样蛋白(Aβ)。淀粉样前体蛋白(APP)经α和β两种分泌酶裂解β分泌酶产生沉积型、致病性Aβ，导致阿尔茨海默病。EGCG进入细胞后能刺激PKC，PKC使α分泌酶增多，神经细胞中淀粉样前体蛋白经α分泌酶途径产生可溶性分泌型APP，所以随着α分泌酶增多，促进sAPPα形成，起到对神经细胞的保护作用。4、根据下图判断MG-262和MG-132哪个是硼基蛋白酶抑制剂？依据是什么？3/5MG-262shouldbe。EGCG能促进硼基蛋白酶的活性。EGCG消除硼基蛋白酶抑制剂的细胞毒性，EGCG不干扰非硼基蛋白酶抑制剂的细胞毒性。加入EGCG后，MG-262是当剂量达到一定值后才能使细胞死亡，MG-132细胞完全死亡。5、EGCG抑制癌细胞生长是通过抗氧化作用还是促氧化作用？加入超氧化物歧化酶和过氧化氢酶对EGCG抑癌效应会产生什么影响？从活性氧来看，癌细胞与正常细胞对EGCG的响应有无区别？（1）促氧化作用。EGCG剂量依赖抑制肿瘤，高剂量效应强。高剂量EGCG导致肿瘤细胞氧化逆境，表现为8-OHdG、g-H2AX和caspase升高，因此可认为EGCG的抑癌作用机制为促氧化而不是抗氧化。（2）降低抑癌效应。超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）能降低EGCG抗癌作用。在细胞培养液中加入SOD和CAT，抑制EGCG的抑癌作用，这进一步说明促氧化机制行为。（3）癌细胞与正常细胞对EGCG的相应有区别。因为EGCG对癌细胞作用时，会使细胞产生大量的活性氧而抑制癌细胞的生长，在正常细胞内则不产生。活性氧(ROS)，一系列氧自由基的集合，包括超氧阴离子、单线态氧和羟自由基。不稳定、高活泼。①对比脑正常细胞和脑肿瘤细胞，EGCG在杀伤肿瘤细胞的剂量并不杀伤正常细胞。相对应的是EGCG在肿瘤细胞内产生ROS，在正常细胞则不产生。②对比血正常细胞PBMC和血肿瘤细胞，EGCG在杀伤肿瘤细胞的剂量并不杀伤正常细胞。相对应的是肿瘤细胞有67LR，而PBMC无67LR。关闭肿瘤细胞的67LR可阻止EGCG抑癌作用。③卵巢细胞转入致癌基因，植物化学物质处理癌变的卵巢细胞和未癌变的卵巢细胞，癌变的卵巢细胞ROS增幅大，植物化学物质选择性杀伤癌变的卵巢细胞。4/56、举几例说明干预67LR可影响EGCG的生物活性。（1）防癌：67LR抗体阻断EGCG的效应。当关闭67LR时，会使EGCG不再杀伤骨髓瘤细胞。EGCG通道：层粘连蛋白受体(67LR)。层粘连蛋白受体(LR)是细胞表面跨膜糖蛋白，肿瘤细胞高表达。LR有十余种，包括67-kDaLR，简称67LR。表面等离子共振是分析生物分子相互作用的工具，利用表面等离子共振在乳腺癌细胞发现EGCG与细胞表面结合受67LR调控。67LR影响EGCG与细胞表面结合。EGCG防癌作用需67LR参与。关闭67LR基因导致EGCG不再杀伤骨髓瘤细胞。（2）减肥：EGCG能阻断胰岛素对刺激前脂肪细胞有丝分裂的促进作用。而EGCG的这种效应通过67LR介导。EGCG能抑制体重增长，减少脂肪积累，有减肥效应。已知较高浓度EGCG在癌细胞产生活性氧，而相对应组织的正常细胞耐受较高剂量EGCG，活性氧并不明显上升。脂肪组织包括前脂肪细胞和脂肪细胞。前脂肪细胞具有分化的潜能、使脂肪细胞数量增多，导致肥胖。考察EGCG对前脂肪细胞和脂肪细胞影响，发现EGCG对这两类细胞的影响均涉及到产生活性氧。EGCG能抑制胰岛素刺激前脂肪细胞有丝分裂，从而减肥。7、举例说明EGCG与某些药物有拮抗作用，与其它营养素和/或植物功能成份有协同作用。（1）拮抗作用：硼替佐米。硼替佐米(BZM)是一种基于硼的蛋白酶抑制剂，是治疗多发性骨髓瘤药物。儿茶素有抗癌作用，癌症病人在化疗过程中可能会主动摄入，以期帮助提高疗效。儿茶素不仅没增加硼替佐米的抗癌效应，反而消除了硼替佐米的抗癌效应。质谱证明儿茶素与硼替佐米发生反应。EGCG消除BZM的细胞毒性。（2）协同作用：①维生素A。VitaminA增强EGCG抑癌。VitaminA,all-transretinoicacid(ATRA)（维生素A,拟维甲酸(全反式维甲酸)）。已知VitaminA可诱导67LR，因此可设想VitaminA能增强EGCG抑癌效应。ATRA诱导67LR表达和加强EGCG抑癌效应，67LR抗体使ATRA的增效作用消失。②EGCG与毛地黄黄酮结合高效抑癌。毛地黄黄酮(luteolin)学名为3’,4’,5’,7-四羟基黄酮，主要存在于芹菜、西兰花、花菜、青椒、甘蓝和菠菜中。肿瘤压制蛋白p53是最关键的抑癌蛋白，它控制细胞循环、凋亡和基因修复。p53的稳定依赖于磷酸化修饰。研究发现：毛地黄黄酮促进癌细胞p53磷酸化，EGCG无此作用，但EGCG加强毛地黄黄酮诱导p53磷酸化，肿瘤压制效应更强，体现出协同效应。8、当诉求茶的某种药效时，同时强调它是天然安全的是否正确，为什么？5/5不正确。因为：1、文献中许多EGCG活性结果是基于高剂量获得。2、当EGCG为高剂量时，会有一定的不良影响。某些活性剂量与毒性剂量靠近，故应理智看待茶多酚高剂量活性。9、EGCG经聚乳酸和聚乙二醇纳米化，腹腔注射给药，取得EGCG同等效应，只需1/10纳米EGCG。简要分析聚乳酸和聚乙二醇EGCG纳米颗粒抑癌效应提高的机制。EGCG经PLA和PEG纳米化，在体内半衰期延长，取得EGCG同等效应，只需1/10纳米EGCG(腹腔注射给药)。机制与潜力分析：EGCG经67LR进入细胞。纳米颗粒能被细胞内吞摄入，纳米EGCG可能经内吞进入细胞，出现半衰期延长和增效，发挥时效长。化学防癌物质一般是长期口服摄入，此处使用腹腔注射取得10倍增效。10、随着年龄增长，TRAMP前列腺癌鼠血清IGFBP-3？IGF-1？VEGF？前列腺中PI3K,AKT和ERK磷酸化？uPA活性？MMP/TIMP？这些变化构成前列腺癌高发与转移的基础。饮水中添加儿茶素，儿茶素如何影响这些不良变化。（1）随着年龄增长，TRAMP前列腺癌鼠血清IGFBP-3↓、IGF-1↑、VEGF↑、PI3K,AKT和ERK磷酸化增加、UPA活性增加、MMP/TIMP增大。（2）饮水中添加儿茶素可有效逆转这些不良变化。饮水中添加儿茶素，可降低TRAMP鼠前列腺重量、泌尿生殖器重量、前列腺癌发生率、前列腺癌的淋巴、骨髓、肝和肺转移，延迟肿瘤发生时间和生存时间。儿茶素干预时间愈早、预防效应愈强，过迟干预不再有效。这些研究说明及早形成饮用绿茶习惯能预防前列腺癌。11、EGCG有减肥、降血糖和杀伤癌细胞作用，EGCG发挥这些作用时，细胞内ROS？EGCG杀伤癌细胞时，细胞内Bcl-2？Bax？Bax/Bcl-2？Caspase3？线粒体内细胞色素C？细胞质中细胞色素C？ROS增加，Bcl-2减少，Bax增加，Bax/Bcl-2增加，Caspase3增加。线粒体内细胞色素C减少，细胞质中细胞色素C增加。