细胞化学染色(lishai).

细胞化学染色Cytochemicalstain成都市第六人民医院检验科李色概念细胞化学染色是以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物质（糖类、蛋白质、脂类、酶类、铁、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。细胞原位的化学反应临床应用辅助判断急性白血病的细胞类型辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断（Fe、NAP等）FABALL（急性淋巴细胞白血病）L1、L2、L3AML（急性髓细胞白血病）M0急性粒细胞白血病（微分化型）M1急性粒细胞白血病（未成熟型）M2急性粒细胞白血病（部分成熟型）M3急性早幼粒细胞白血病M4急性粒－单核细胞白血病M5急性单核细胞白血病M6急性红白血病M7急性巨核细胞白血病细胞化学染色的基本步骤固定显示复染保持细胞结构及化学成分不变，并使血膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏形成稳定的有色沉淀，显示出被检测的化学物质既能显示细胞结构又能清楚地看出细胞化学染色结果细胞化学染色的种类过氧化物酶染色（POX)、苏丹黑染色（SBB)过碘酸-雪夫反应（PAS）又称糖原染色酯酶染色酸性磷酸酶染色（ACP)铁染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）过氧化物酶染色Peroxidasestain,POX染色原理（四甲基联苯胺法）H2O2溶酶体颗粒中的ＰＯＸH2O＋O2四甲基联苯胺O2联苯胺蓝联苯胺蓝＋亚硝基铁氰化钠O2蓝色物质（沉淀）正常血细胞的染色反应粒细胞系统原粒（可为阴性）分叶（阳性程度逐渐增强）嗜酸阳性最强嗜碱阴性单核细胞系统阴性或弱阳性（颗粒少而细）其他血细胞阴性临床意义1.ALL：原始细胞的POX阳性＜3%2.AML：原始细胞的阳性≥3%在多数的M1、绝大部分M2和M3中，原始细胞的阳性率大于85%，M3呈强阳性；M4和M5时，原单有时可呈弱阳性，但绝大多数的原单是POX阴性。M6，原粒和幼稚粒细胞是POX阳性，幼红细胞是POX阴性。M7，血小板POX的活性只能在超微结构上证实。POX染色的临床应用◆POX染色是辅助诊断急性白血病细胞类型首选、最重要的细胞化学染色，主要用于急性白血病的鉴别诊断。◆急性粒细胞白血病时，其原、幼细胞呈阳性反应，以APL反应最强;急性单核细胞白血病时，原幼细胞呈弱阳性反应◆ALL时呈阴性反应用途：鉴别急性淋巴系与非淋巴系白血病结果：粒系(+)；单核系(±)；淋巴系(–)原粒单核淋巴早幼晚幼中幼过氧化物酶染色(peroxidase，POX)苏丹黑染色Sudanblack,SBB苏丹黑染色◆原理：SBB能溶解于细胞内的含脂结构，使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。◆正常细胞的染色反应同POX染色。◆临床评价POX染色特异性高于SBB染色SBB染色敏感性高于POX染色过碘酸-雪夫反应(糖原染色）Periodicacid-Schiffreaction,PAS染色原理（PAS）乙二醇基（多糖类物质中）过碘酸双醛基＋无色品红紫红色化合物正常血细胞的染色反应粒细胞系统原粒（可为阴性）分叶（阳性程度逐渐增强）嗜酸胞质呈红色，颗粒不着色嗜碱反之红细胞系统阴性单核细胞系统原单（可为阴性），其他阳性正常血细胞的染色反应淋巴细胞系统大多数阴性，少数阳性。巨核细胞系统巨核细胞和血小板阳性，阳性反应的程度随细胞的发育成熟而增强。临床意义◆红细胞系统疾病红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）；某些红系良性疾病如缺铁贫、巨幼贫等阴性。◆白细胞系统疾病ALL：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或块状）急粒：少数原粒呈阳性，阳性细颗粒状急单：可呈阳性，阳性细颗粒状PAS临床意义AML-M6幼红细胞呈阳性反应MA幼红细胞呈阴性反应ALLAML-M6AML-M6PAS(+)AML-M5M5PAS(+)AML-M7M7PAS(+)PAS染色的应用◆鉴别淋巴系统增生的性质：凡恶性增生时PAS反应多呈强阳性反应，见于急、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤等。◆鉴别红系增生的性质：凡恶性增生者，如红血病、红白血病其原、幼红细胞多呈强阳性反应；增生性贫血、巨幼贫，PAS多为阴性。◆有助于巨核细胞白血病的诊断酯酶染色α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)原理α-醋酸萘酚PH中性α-醋酸萘酚酯酶α-萘酚+重氮盐(坚牢蓝B)(黑色或灰黑色)正常血细胞的染色反应◆单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可+）◆仅单核细胞的阳性可被氟化钠抑制(NaF抑制率50%)。NaF抑制率=抑制前的阳性率/积分-抑制后的抑制前的阳性率/积分×100%α-NAE对诊断急性白血病的作用酸性磷酸酶染色Acidphosphatase,ACPACP染色的临床意义铁染色Ferricstain染色原理（Fe染色）铁+亚铁氰化钾酸性环境亚铁氰化铁（蓝色）正常血细胞的染色反应◆正常人骨髓中的铁主要存在于骨髓小粒及幼红细胞中，分为细胞外铁和细胞内铁。◆细胞外铁：骨髓小粒的巨噬细胞中◆细胞内铁:中幼红细胞、晚幼红细胞及红细胞中铁粒幼红细胞--含铁颗粒的中、晚幼红细胞铁粒红细胞--含铁颗粒的红细胞细胞外铁的观察低倍镜观察骨髓小粒中的铁，阳性结果呈弥散性、颗粒状、小珠状或块状蓝色。细胞内铁的观察5353环形铁粒幼细胞参考范围：细胞外铁：（+）～（++）细胞内铁：铁粒幼红细胞12%～44%，以Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型，无环形铁粒幼红细胞及铁粒红细胞。临床意义MDS中性粒细胞碱性磷酸酶染色NeutrophilicalkalinephosphataseNAP染色原理（NAP染色）Kaplow偶氮偶联法：中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶在PH9.6的碱性条件下能水解磷酸奈酚钠底物，生成奈酚，后者与偶氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀定位于胞质中的酶活性处。（紫黑色颗粒）钙-钴法：红色颗粒正常血细胞的染色反应◆NAP主要存在于中性成熟粒细胞（包括中性杆状核粒细胞和中性分叶核粒细胞）胞浆内，故中性成熟粒细胞胞浆呈阳性，其他细胞基本呈阴性。参考范围：阳性率40%；NAP积分值为30～130分。临床意义NAP积分增加：细菌性感染(包括类白血病反应）、再生障碍性贫血、某些骨髓增殖性疾病、慢性粒细胞白血病（加速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、骨髓转移癌、肾上腺糖皮质激素及雄激素治疗后等。NAP积分下降：慢性粒细胞白血病（慢性期）、急性粒细胞白血病、阵发性睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合症、恶性组织细胞病等。NAP染色的应用CML类白谢谢大家HAVEAGOODDAY!