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细菌芽孢染色姓名：徐一鸣学号：200900140145地址：周三下午微生物实验楼341第六排摘要：通过Schaeffer-Fulton氏染色法对枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）和梭状芽孢杆菌（Clostridiumsporogenes）进行芽孢染色，在光学显微镜下观察其菌体形态和芽孢的大小，数量，位置，得到清晰的染色结果。关键词：芽孢；细菌；Schaeffer-Fulton氏染色法前言：细菌的芽孢的某些细菌的特殊结构。芽孢是某些细菌生长到一定阶段在体内形成的一个圆形或椭圆形的休眠体，它对不良环境具有很强的抗性。在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。芽孢的大小、形状及其在菌体内的位置是鉴定细菌的重要依据。在一般实验室中通常用芽孢染色法来观察其形态。此外，由于芽孢具有很强的抗性，因此在生产实践中都以是否有杀死抗性最强的芽孢来评定高温灭菌及某些化学杀菌剂的效果。细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于一个原则：除了用着色强的染料外，还须要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。1.材料与方法1.1材料1.1.1菌种枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis），梭状芽孢杆菌（Clostridiumsporogenes）1.1.2染色剂和试剂5%孔雀绿水溶液，香柏油，番红水溶液1.1.3仪器及其他载玻片，擦镜纸，吸水纸，记号笔，镊子，接种环，显微镜，酒精灯，夹子1.2方法1.2.1制片按常规方法涂片、干燥、固定。1.2.2加热染色向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌位置，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸气并维持5min，加热时注意补充染液，切勿涂片干固。1.2.3脱色待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。1.2.4复染用0.5%的番红水溶液复染2min。1.2.5水洗用自来水冲洗至流出水无色为止。1.2.6镜检将载玻片晾干后油镜检。2结果与分析2.1实验结果1）观察分别接种有枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）和梭装芽孢杆菌（Clostridiumsporogenes）的菌落形态，枯草杆菌菌落大，表面粗糙，扁平，不规则，梭装芽孢杆菌菌落扁平，不规则。2）镜检观察，芽孢呈绿色，芽孢囊为红色。枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）菌体形态为短杆状，末端钝圆，单生或形成短链，芽孢椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，含芽孢菌体不膨大（见图1）。梭装芽孢杆菌（Clostridiumsporogenes）芽孢呈圆形或卵圆形，直径大于菌体，位于菌体中央，极端或次极端，使菌体膨大呈梭状（见图2）。2.2分析在观察梭装芽孢杆菌（Clostridiumsporogenes）芽孢时，发现有些部位孔雀绿水溶液染色过深，导致水洗时无法完全洗去，影响观察。以后实验中应注意孔雀绿水溶液加入的量，及加热时间，防止染色过深。实验时应注意一下以下几点：选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已经破裂；加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色；脱色必须等待玻片冷却厚进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂。3.小结本次试验用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，效果清晰，较为显著，只是在观察梭装芽孢杆菌（Clostridiumsporogenes）芽孢时，发现有些部位孔雀绿水溶液染色过深，导致水洗时无法完全洗去，菌体也被染色，影响观察。以后实验中应注意孔雀绿水溶液加入的量，及加热时间，防止染色过深，影响观察。参考文献沈萍陈向东，《微生物学实验》，第79页，高等教育出版社王桂平，李财新，优化的细菌芽孢染色技术，微生物学杂志