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第三军医大学硕士学位论文自体MSCs/Chondro-Gide'（R）工程化软骨修复技术临床应用标准的初步探索姓名：左镇华申请学位级别：硕士专业：外科学（骨外）指导教师：杨柳20071101自体MSCs/Chondro-Gide'（R）工程化软骨修复技术临床应用标准的初步探索作者：左镇华学位授予单位：第三军医大学相似文献(10条)1.期刊论文池光范.侯宜.侯立中.颜炜群.杨同书应用同种异体组织工程软骨修复关节软骨缺损观察-中国地方病学杂志2004,23(4)目的用胶原蛋白和人血纤维蛋白混合物为载体支架在体外进行软骨细胞三维立体培养,构建人工软骨组织,利用此人工软骨修复关节软骨缺损.方法取2周龄兔关节软骨,经消化、分离的软骨细胞体外培养.培养第3周时,进行免疫组织化学分析;利用培养3周的人工软骨对异体成兔的关节软骨损伤进行修复.结果培养物内软骨细胞均得到较好存活,形成软骨陷窝,出现同源性细胞簇,分泌软骨基质;DNA和糖胺多糖(GAG)在培养第24天时达到高峰,分别为(5.18±0.19)、(214.3±2.8)μg/块;对异体关节软骨损伤的移植修复结果良好,在12周时,移植物与周边正常组织结合紧密、齐高,移植的软骨细胞趋于柱状排列,为透明软骨组织.结论用胶原蛋白和人血纤维蛋白为载体支架体外培养软骨细胞,可构建较大的组织工程软骨,能较好地修复同种异体关节软骨缺损.2.学位论文魏斌外周血间充质干细胞复合透明质酸钠移植修复兔膝关节软骨缺损的实验研究2007关节软骨属于透明软骨，缺乏神经血管营养，损伤后自身难以修复。组织工程学的出现给关节软骨修复带来了希望。目前组织工程采用的种子细胞多是骨髓间充质干细胞或自体软骨细胞。国内外虽有文献报道外周血中存在间充质干细胞并能够分离及体外培养扩增，但应用外周血来源的间充质干细胞进行软骨修复的研究鲜见报道。透明质酸钠在临床上常用于膝骨性关节炎病人的治疗，有润滑关节、营养软骨的作用，改善病人症状，但是对于它促进关节软骨损伤修复的作用缺乏相关报道。本实验应用兔外周血来源的间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)及可注射材料透明质酸钠(hyaluronatesodium，HS)进行关节软骨修复的研究，观察两者混合注射及单纯应用透明质酸钠对软骨损伤修复的促进作用。目的：尝试将外周血间充质干细胞应用于关节软骨修复研究中，观察外周血MSC与透明质酸钠混合植入关节内后软骨缺损处的修复效果，探讨关节内注射两者混悬液进行软骨修复的可行性；以及观察单纯应用透明质酸钠对软骨修复的促进作用如何。方法：随机选取健康新西兰大白兔共23只(2月龄8只；3月龄15只)。2月龄兔用于动员并分离提取外周血间充质干细胞。首先联合应用干细胞因子(SCF)及粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员兔外周血以增加间充质干细胞的数量，之后分离并进行原代及传代细胞培养；传代细胞应用组织学观察及流式细胞仪分析进行鉴定后，取P,3代细胞冻存备用。3月龄兔用于软骨修复实验研究。取兔双膝关节制造软骨缺损动物模型，分别于股骨内外髁负重区制造直径4mm、深3mm的软骨缺损区。以透明质酸钠为细胞载体材料，将它与MSC混合制成细胞混悬液备用。从3月龄兔中随机选取10只，以左膝为MSC混悬液治疗组(MSC+HS组)，右膝为透明质酸钠对照组(HS组)，其余5只作为生理盐水对照组(NS组)。三组均于术后一周开始关节腔内注射(0.5ml)，每周一次，连续三次。治疗后12周时处死取材，观察缺损处修复情况、新生组织类型及有无免疫反应。结果1原代培养前3天细胞多处于悬浮状态，贴壁细胞少，而后开始出现并逐渐增多，由短梭形逐渐伸长为长梭形。10天左右克隆开始出现，但大小不一，14～16天时克隆扩大较明显，而后进入较快的增值阶段。25天左右细胞贴壁融合达到80％左右。传代细胞48～72小时后绝大多数细胞贴壁，生长速度较原代有所增快，约16～20天时可再次传代。此后的P,2、P,3。代的纯度变高。细胞原代培养成功率达到73.53％，原代细胞传代后细胞成活率为72.0％。2常规HE染色：细胞为长梭形，少数为多角形，可有突起；细胞核基本为圆形，位于胞体中央，蓝色；胞浆为淡红色。取第三代细胞流式细胞仪分析MSCs的纯度在87％以上。3兔软骨缺损模型构建完成后，前2～3天膝关节轻度肿胀，稍发红，之后肿胀逐渐减退，关节无感染。注射后的兔关节活动良好，无红肿等现象。4治疗后12周时，试验组缺损区基本被修复组织填满，表面较平整光滑，但部分边界尚可见，组织学观察为软骨样组织修复，但浅层纤维化较明显；透明质酸钠对照组修复表面不平整，缺损区内组织填充不完全，表面纤维化明显，修复细胞类似纤维细胞；生理盐水对照组修复组织为纤维组织，填充更加不完全。5外周血MSC组的修复效果明显优于透明质酸钠组(t'=11.81，P0.01)及生理盐水组(t'=-12.60，P0.01)，透明质酸钠组与生理盐水组之间比较统计学上无显著性差异(t'=-1.95，P0.05)。结论1关节腔内注入体外培养扩增的外周血MSC与透明质酸钠的混悬液后能明显提高兔急性关节软骨缺损处修复组织的质量，修复组织为软骨样组织，但其浅层退变较明显。2异体外周血MSC注入关节内后，能够逃避机体免疫系统，避免了排斥反应的发生；此外，短期内滑膜中未见到软骨样组织形成，应用比较安全。3在急性关节软骨缺损修复治疗中，透明质酸钠组与生理盐水组相比无显著性差异，因此单纯注射透明质酸钠对改善兔急性关节软骨缺损处修复组织的质量无明显促进作用。4外周血来源的MSC相比骨髓来源创伤小，获取方便，且在质量和数量上能基本满足软骨修复的需求。3.期刊论文姜洪丰.魏巍.解云川.李荣锐.翟饶生.王日光.JIANGHong-feng.WEIWei.XIEYun-chuan.LIRong-rui.ZHAIRao-sheng.WANGRi-guang组织工程化软骨修复兔膝关节软骨缺损的实验研究-中华显微外科杂志2006,29(3)目的评估同种异体组织工程软骨修复兔膝关节全层软骨缺损的有效性.方法分离收集成年新西兰大白兔软骨细胞进行体外培养.建立双侧兔膝关节软骨缺损模型,用去端肽胶原(atelocollagen)凝胶与所培养的异体兔关节软骨细胞共同植入兔膝关节软骨缺损处,并设对照组.分别于手术后4周、8周观察大体标本以及组织学修复结果,并进行Wakitan的评分,评估此方法的有效性.结果大体观察结果表明,与对照组相比,实验组缺损处由软骨组织修复而对照组缺损处由纤维样组织填充.组织学观察可以见到实验组关节软骨缺损处有密集的软骨细胞而对照组关节缺损处只有纤维细胞无软骨细胞.结论通过短期观察表明以同种异体软骨细胞-去端肽胶原复合物修复全层软骨缺损的方法是有效可行的,为其进一步临床应用提供了参考.4.期刊论文周赤兵.段军.张远金.柯雯昙关节镜下应用微骨折方法修复关节软骨缺损的实验研究及临床初步应用-中国骨与关节损伤杂志2007,22(5)目的探讨应用微骨折技术对全层关节软骨缺损修复的效果.方法20只大白兔随机分为两组,在其右股骨内髁先建立全层软骨缺损模型,实验组进行微骨折处理,对照组则不予特殊处理.分别在4周和8周各处死10只实验兔,作大体观察、病理学检查和修复组织厚度测量.临床上对68例全层关节软骨缺损进行随机分组:实验组35例,关节清理后应用微骨折技术进行处理;对照组33例,仅作关节清理术.结果对照组只有肉芽组织和瘢痕组织生长,仅边缘有少量软骨组织生长,实验组在4周时大部分为软骨组织生长,8周已全部被软骨组织修复.术后平均随访8.6个月,Lysholm评分实验组明显优于对照组.结论微骨折技术是一种有效的修复全层关节软骨缺损方法.5.学位论文张强利用脂肪干细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究2009目的：探讨脂肪干细胞复合软骨基质支架构建组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损的效果，为关节软骨缺损的治疗寻找新方法。方法：3月龄新西兰大白兔脂肪干细胞获得、培养、扩增。成年新西兰大白兔新鲜软骨分离获得，低温冻干12小时，后经曲拉通、DNA酶、RNA酶等处理制备成软骨脱细胞基质支架材料，紫外线灭菌后，将终浓度为2×107/mL的脂肪干细胞种植于软骨基质支架上，并置于软骨细胞方向诱导培养基中培养两周，构建组织工程软骨。对兔膝关节全厚软骨缺损进行修复，并与自体软骨组、单支架组、空白对照组比较，每组均为12例，均于术后12周对修复关节进行大体和组织学观察并行改良Wakitani评分。结果：实际完成观察的关节为48例，所有关节均无感染，所有移植物均无脱落。空白组无组织修复；单支架组支架未被吸收，支架内无细胞长入；组织工程软骨组10例为透明软骨修复，2例为纤维软骨修复，该组有2例出现异常增生，增生组织HE染色见表层为软骨膜，中层为透明软骨帽，基底层为松质骨；自体软骨修复组均为透明软骨修复。Wakitani评分各组差异均有统计学意义（P0．05）。结论：本实验构建的组织工程软骨能有效的修复关节软骨缺损，但有成骨软骨瘤的风险。6.期刊论文张远金.段军.柯雯昙.张欣.ZHANGYuan-Jin.DUANJun.KEWen-tan.ZHANGXin关节镜下应用微骨折方法修复关节软骨缺损-中国骨伤2006,19(7)目的:探讨关节镜下应用微骨折技术对膝关节全层关节软骨缺损修复的效果.方法:对68例全层关节软骨缺损患者进行随机分组:实验组(35例),男17例,女18例,平均年龄35.1岁,采用关节清理后应用微骨折技术进行处理,即利用骨刀设计的特性和适度的锤击力量造成软骨下的骨组织微小骨折,刺激软骨生长.对照组(33例),男17例,女16例,平均年龄31.6岁,仅作关节清理术.结果:术后随访6～18个月,平均8.6个月,按Lysholm评分标准,实验组明显优于对照组(P＜0.01).结论:关节镜下应用微骨折技术能够显著减轻关节疼痛,增加关节活动度,改善关节功能,是一种简单有效的修复全层关节软骨缺损方法.7.学位论文韩雪峰组织工程软骨修复绵羊关节软骨缺损的实验研究2005本文旨在探索以自体软骨细胞为种子细胞，以自行制备的异体软骨微粒脱细胞基质及可塑性及生物相容性极强的纤维蛋白胶为支架，构建组织工程软骨并修复关节软骨缺损的可行性。因此，本课题通过将异体绵羊关节软骨制备成直径为0100－0．154n的软骨微粒脱细胞基质，为软骨细胞提供较大贴附面积的三维支架，与自体软骨细胞结合后三维培养，检测其组织相容性；而后利用纤维蛋白胶的良好可塑性，弥补软骨微粒脱细胞基质粉末较松散的不利特性，将前两者与自体软骨细胞充分结合，塑形为圆柱形的复合物体外培养一段时间后，植入绵羊肽骨内侧踝关节软骨缺损处，从而对以CPACTM—F为支架构建的组织工程化软骨修复关节软骨缺损可行性进行探讨。8.期刊论文王常勇.郭希民.方泽强.段翠密.赵强.王永红.陈惠华.薄斌.范明.卢建熙应用组织工程化人工软骨修复羊关节软骨缺损的实验研究-军事医学科学院院刊2002,26(2)目的:探索以多孔磷酸三钙生物陶瓷材料为支架构建组织工程化软骨修复羊关节软骨缺损的可行性.方法:实验分3组.实验组(n=12):分离培养羊自体关节软骨细胞,采用微载体技术在旋转生物反应器内进行扩增,扩增后的软骨细胞接种到预制的β_磷酸三钙(β_TCP)多孔生物陶瓷材料上,细胞_材料复合体经体外孵育后,无菌条件下植入预制的羊前肢肱骨头关节面缺损处;单纯材料组(n=12):采用单纯β_TCP材料修复羊关节软骨缺损;空白对照组(n=4):制备的羊关节软骨缺损区未做任何修复.术后3和6个月分别取材,进行缺损区组织学、组织化学和免疫组织化学分析.结果:在实验组羊关节软骨缺损处表面肉眼可见透明软骨样组织形成.组织学检查发现,术后3个月时材料降解明显,未降解吸收的材料孔洞内广泛分布着新生软骨组织,软骨细胞外基质丰富,Ⅱ型胶原染色阳性.至术后6个月,支架材料几乎完全降解,缺损区被新生软骨组织所取代.在单纯材料组羊关节软骨缺损处术后3个月时,可见从缺损区边缘有新生软骨