化妆品中尿素的测定-高效液相色谱法

ICS71.100.70Y42DB34安徽省地方标准DB34/T1330—2011化妆品中尿素的测定高效液相色谱法DeterminationofUreainCosmetics—HPLCMethod文稿版次选择2011-03-07发布2011-04-07实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1330—2011I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省产品质量监督检验研究院提出。本标准由安徽省质量技术监督局归口。本标准起草单位：安徽省产品质量监督检验研究院。本标准主要起草人：储大勇、黄颖、韩枫、孙志伟、祝红蕾。DB34/T1330—20111化妆品中尿素的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了化妆品中尿素的高效液相色谱法测定方法。本标准适用于化妆品中尿素含量的测定。2原理化妆品中的尿素用乙腈+水（1+1）溶解，以乙腈+水为流动相，使用C18为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器对试样中的尿素进行高效液相色谱分离和外标法定量。3试剂和溶液乙腈：色谱纯。水：新蒸二次蒸馏水。尿素标样：取分析纯尿素经95%乙醇重结晶后，于100℃烘箱中烘干后备用。重结晶后的尿素在5.2规定的条件下应无杂峰。20.00mg/mL尿素标准溶液：称取尿素标样1.0g(精确至0.0002g)，置于50mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀备用。此溶液质量浓度为ρ（尿素）20.00mg/mL。4仪器高效液相色谱仪，具二极管阵列检测器和相应的色谱处理机。色谱柱：250mm×4.6mm（id）不锈钢柱，内装C18填料粒径5µm。超声波清洗器。微孔过滤器：滤膜孔径为0.45µm。微量注射器：50µL5分析步骤5.1试样溶液制备称取样品0.1g～0.5g（精确至0.001g，含尿素约40mg）置于50mL容量瓶中，用乙腈+水（1+1）溶解并稀释至刻度，超声振荡10min取出，冷却至室温，用0.45µm滤膜过滤，滤液待测。5.2高效液相色谱操作条件流动相：乙腈+水＝5+95（V+V），使用前用0.45µm滤膜过滤并用超声波脱气。流速：1.0mL/min。柱温：室温。DB34/T1330—20112检测波长：195nm。进样体积:10µL5.3标准曲线的制备分别吸取20.00mg/mL尿素标样溶液1.00mL，2.00mL，3.00mL，4.00mL，5.00mL置于50mL容量瓶中,稀释至刻度，摇匀，此溶液分别含尿素400.00µg/mL、800.00µg/mL、1200.00µg/mL、1600.00µg/mL、2000.00µg/mL，用0.45µm滤膜过滤，滤液待用。在上述色谱条件下，待仪器稳定后注入标准系列溶液，记录色谱峰面积，以尿素的质量浓度（µg/mL）为横坐标，相应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。5.4试样的测定在与测定标准系列溶液相同的条件下，注入待测溶液，根据峰的保留时间定性。记录色谱峰面积，并从标准曲线查得尿素的浓度。典型的尿素高效液相色谱图见附录A和附录B。6结果的表示尿素的质量分数W（％）按下式计算：100m106×××=−VWρ................................(1)式中：m——样品的质量，g；V——样品定容体积，mL；ρ——由标准曲线查出的试样溶液中尿素的浓度，µg/mL。7重复性与再现性7.1重复性平行测定结果的相对偏差小于3％。7.2再现性不同试验室间测定结果的相对偏差小于5％DB34/T1330—20113AA附录A（资料性附录）尿素标准溶液高效液相色谱图图A.1DB34/T1330—20114BB附录B（资料性附录）化妆品样品高效液相色谱图图B.1_________________________________