课题3血红蛋白的提取和分离

课题3血红蛋白的提取和分离一、课题目标（一）基础知识二、课堂练习1．凝胶色谱法可以有效的分离蛋白质的根据是（）A．分子的大小B．相对分子质量的大小C．带电荷的多少D．溶解度2．利用凝胶色谱法分离蛋白质，最先洗脱的蛋白质特点是（）A．相对分子质量大的B．溶解度高的C．相对分子质量小的D．所带电荷多的3.凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是（）A.糖类化合物B.脂质C.蛋白质D.核酸4．相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个(B)5．用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质()A．路程较长，移动速度较慢B．路程较长，移动速度较快C．路程较短，移动速度较慢D．路程较短，移动速度较快6．能进入凝胶内部通道的蛋白质是指()A．相对分子质量大的B．吸附性高的C．相对分子质量小的D．溶解度低的7．凝胶色谱法中移动得快的是()A．相对分子质量大的B．溶解度高的C．相对分子质量小的D．溶解度低的8．缓冲液的作用是在一定范围内，抵制外界的影响来维持下列哪一项状态基本不变的()A．温度B．pHC．渗透压D．氧气浓度9．初步分离血红蛋白的实验中用到的缓冲溶液为()A．H2CO3一NaHCO3缓冲液B．NH4OH—NH4Cl缓冲液C．CH3COOH—CH3COONa缓冲液D．H3PO4缓冲液10．蛋白质提取和分离分为哪几步()A．样品处理、凝胶色谱操作、SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳B．样品处理、凝胶色谱操作、纯化C．样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定D．样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定11.血红蛋白因含有什么物质而呈红色()A.O2B.COC.CO2D.血红素12.将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第二层是（）A.甲苯B.血红蛋白水溶液C.脂溶性物质的沉淀层D.其他杂质的沉淀13．分离血红蛋白溶液时，离心后试管中的溶液分四层，血红蛋白位于()A．一B．二C．三D．四14.下列操作正确的是（）A.分离红细胞时采用低速长时间离心B.红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C.分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D.透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h15．使用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的迁移速度完全取决于()A．电荷的多少B．分子的大小C．肽链的多少D．分子形状的差异16．洗涤红细胞的目的是()A．去除血清B．去除杂蛋白C．除去血小板D．除去水17．洗涤红细胞时，分离所用的方法为()A．低速长时间离心B．低速短时间离心C．高速长时间离心D．高速短时间离心18．SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是()A．增大蛋白质的相对分子质量B．改变蛋白质的形状C．掩盖不同种蛋白质问的电荷差别D．减少蛋白质的相对分子质量19．制作凝胶色谱柱时，橡皮塞顶部凹穴内插入的移液管的部位及长度是()A．移液管头部5cmB．移液管尾部5cmC．移液管头部3cmD．移液管尾部3cm20．下列有关凝胶色谱法中样品的加入和洗脱的叙述中，正确的是()A．先加入1mL透析后的样品B．加样前要使缓冲液缓慢下降，全部流出C．如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功D．洗脱时可以用缓冲液也可以用清水21．在下列哪一种条件下生物大分子具有的可解离的基团会带上正电或负电()A．一定温度B．一定pHC．一定压强D．一定容器22．电泳时带电粒子在电场的作用下，移动所向的电极的方向与其所带电荷是()A．桕同B．相反C．相对D．相向23．装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管应()A．先打开后关闭B．关闭C．先关闭后打开D．打开24．D亚铁血红素基团可携带()A．一分子COB．一分子NOC．一分子O2或CO2D．一分子NO225．人体正常的血红蛋白中应含有Fe2+，若误食亚硝酸盐，则导致血红蛋白中的Fe2+。转化为Fe3+，产生高价铁血红蛋白而中毒。服用维生素C可解除亚硝酸盐中毒。在维生素C参与的反应中()A．亚硝酸盐是还原剂B．维生素C是氧化剂C．亚硝酸盐被氧化D．维生素C将Fe3+还原为Fe2+26．加有少量柠檬酸钠(防止血液凝固)的猪血分装于标号①、②、③的试管中，随后依次加入质量分数为0．3％、0．9％和1．5％的氯化钠溶液稀释，30min后离心。下列叙述中，正确的是()A．①和②试管的上清液中有血红蛋白，沉淀中都有红细胞B．②和③试管的上清液呈淡黄色，沉淀中均有皱缩的红细胞C．①和③试管的沉淀中分别有红细胞的碎片和皱缩的红细胞D．②和③试管的上清液是血清27．在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是()A．磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程B．血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和C．防止血红蛋白被02氧化D．让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能28．在盛有红褐色的Fe(OH)3，胶体的U形管的两个管口，各插一个电极，通直流电后，发现阴极附近的颜色逐渐加深，这说明()A．Fe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阴极移动B．Fe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阳极移动C．Fe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阳极移动D．Fe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阴极移动29．为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂()A．NaCIB．甲苯C．蒸馏水D．柠檬酸钠30.下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是（）A.样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液B.通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取C.可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化D.可通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度31.凝胶色谱法操作正确的是（）A.将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴B.将橡皮塞下部切出凹穴C.插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D.将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片32.样品的加入和洗脱的操作不正确的是（）A.加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B.加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内C.等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口D.用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面33.下列说法不正确的是（）A.血红蛋白在释放时，加蒸馏水到原血液的体积，再加40％体积的甲苯，充分搅拌B.血红蛋白溶液离心后分为4层，第1层为白色薄层固体C.血红蛋白溶液离心后分为4层，第4层为暗红色沉淀物D.血红蛋白溶液离心后分为4层，第3层为红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液二、多选题34．选用红细胞作分离蛋白质的实验材料，下列是其优点的是()A．血红蛋白是有色蛋白B．红细胞无细胞核C．红细胞蛋白质含量高D．红细胞DNA含量高35．下面关于对血红蛋白提取和分离的样品的处理措施中，正确的是()A．采集血样后要高速短时问离心获得血细胞B．洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净。C．在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂，释放出血红蛋白D．释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其他杂质分离开来36．凝胶色谱柱取长为40cm，内径为1．6cm，有关说法中，正确的是()A．一般凝胶色谱柱直径的大小不影响分离的效果B．凝胶色谱柱过高超过1m，不影响分离的效果C．凝胶色谱柱过矮，则影响混合物的分离度D．凝胶色谱柱直径过大会耗用过多洗脱液，样品的稀释度过大37．下列有关提取和分离血红蛋白的过程的叙述中，正确的是()A．样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液B．通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取C．可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化D．可通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度38．雄性激素是小分子脂溶性物质，很容易穿过细胞膜。睾丸每天分泌的雄性激素约7mg，其中约2％呈游离状态，其余在血中与血浆蛋白呈可逆性结合。下列有关雄性激素与血浆蛋白结合后的作用的叙述中，正确的是()A．使其不容易通过肾脏排出B．使其不容易进入细胞C．使其有效浓度处于特定水平D．抑制雄性激素发挥作用39.分离血红蛋白溶液时，将混合液离心后可看到试管中的液体分为4层：第一层为______，第二层为______固体，是______的沉淀层，第三层是______液体，是______的水溶液，第四层是其他杂质的______沉淀物。40.红细胞含有大量的血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：（1）血红蛋白提取和分离的程度可分为四步：______、______、______和______。（2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。①加入柠檬酸钠的目的是__________________。②以上所述的过程即是样品处理，它包括______、______、收集血红蛋白溶液。（3）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离。①透析的目的是__________________。②透析的原理是______________________________。（4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。①样品纯化的目的是______________________________。②血红蛋白有什么特点？______________________________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？______________________________________________________。答案:1—5BAABD6—10CABDC11—15DCCDB16—20BBCAC21—25BBDCD26—30CDADB31A32A33B34ABC35BCD36ACD37ACD38ABC39无色透明；甲苯层；白色薄层；脂溶性物质；红色透明；血红蛋白；暗红色4040.（1）样品处理；粗分离；纯化；纯度鉴定（2）①防止血液凝固②红细胞的洗涤，血红蛋白的释放（3）①去除分子质量较小的杂质②透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内（4）①通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去②血红蛋白呈现红色，在凝胶色谱分离时，可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液；这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。