豆粕品质的检测方法

豆粕品质的检测方法一、评定指标1、1：抗胰蛋白酶的活性：TrypsinInhibitorActivityTIA大豆粕在0。01mol/LnaOH浸泡1h过滤,滤液用PBPA水解.测胰蛋白酶活性TIU.1、2：尿酶活性（UreaseActivityUA）国际标准法（ISO）、PH增值法（ΔPH法）、扩散法、酚红法。CHINA规定ΔPH《0。4在0.02-0.2之间是优质豆粕.UA与TAI几乎同步失活.在加热过度以前,TIA以全部失活.1、3:蛋白质溶解度:(ProteinSolubility)美国乔治大学:Dale&Araba(1987)以检测豆粕是否加热过度.一定量的豆粕与0.2%NaOH溶液混合离心过滤,滤液凯氏测氮.PS70%,则加热过度,70-80%为适宜,测时其灵敏度不够,粒度影响,当粒度在60-80目时方稳定.1、4：有效赖氨酸:赖与精氨酸属热敏性AA,高温时Lys与还原糖发生Maillard反应.测定法有:A染料结合法(DBL):二硝基氟苯(FDNB),三硝基磺酸(TNBS),酸性橙-12,茚三酮发生特异性呈色反应.B高效液相色谱法(HPLC)1、5：蛋白质的水溶解度和氮的水溶解度：蛋的质的水溶解度（PDI）与氮的水溶解度（NSI），二者只是与水混合后的搅拌强度不一样。PDI是8500r/min的速度搅拌10min，NDI是120r/min搅拌30min。PDI测定豆粕的加热程度比UA和PS（NaOH）灵敏，NSI在7-27.8%是可以接受。NSI低于10%则为加热过度。Balloun&Hgymard(1959):加热时间延长，NSI降低，加热过度，则大大降低，鸡的增重与饲料报酬降低。1、6考马氏亮蓝法：Kratzer(1989):考马氏亮蓝对蛋白质考马氏亮蓝考马氏亮蓝显色对AA不显色并与PS相关度好但考法测的实际值大大低于凯氏法测的蛋白质溶解度。这可能与凯氏法将全部AA包括在蛋白质内的缘故。但考法较PS法测的时间短的多，故考法更适合评价经受不同热处理时间后饲料中可溶性蛋白质的含量。1、7：其它方法：橙黄G染色法（只能有限鉴定过分加热处理的大豆粕）、甲醛滴定法、甲酚红染色法(每克豆粕吸收甲酚红的毫克数2-3mg为生豆粕,3.3-3.7mg为加工不足,3.8-4mg为适当,4.3mg为加热过度)、颜色亨特色值。（Smith1981：颜色与蛋白质有较高的相关性）二、豆粕质量与生产性能熱處理對大豆粕中可代謝能量之影響生大豆粕中的可代謝能量要比經熱處理的大豆粕來得低（Hill及REnner,1960.,1963）。一般認定，含48%粗蛋白的大豆粕，每公斤約含有2,440仟卡的可代謝能量（NRC）。含有10個單位胰蛋白酶抑制因子的大豆粕樣品，其每公斤應有2,575仟卡的可代謝能量，但要是檢測出來的胰蛋白酶抑制因子大約在５個單位時，其可代謝能量可增至2,740仟卡（Mian及Garlich，1987）。Parson等人曾做觀察，發現去穀大豆添餵燒烤用肉雞及火雞時，其真正斤提供之可代謝能量，分別為3,003及3,292仟卡。在107℃溫度下經10~13分鐘熱處理之大豆薄片，其每公斤可代謝總能量為3,130仟卡，但是熱處理過度（即在121℃的溫度下，經121分鐘的熱處理）的大豆薄片，其每公斤的可代謝總能則會降至2,700仟卡（Sibbald,，1980）。熱處理對大豆粕中蛋白質之影響過去幾年來，曾有多種方法被用來檢測大豆粕是否加熱過度而影響其飼養價值。這些方法當中，包括有藉由甲醛滴定、甲酚紅染色法，以及橘色─Ｇ染劑染色法（orange-Gdyebinding），來測出其游離功能基（freefunctionalgroup）的方法；及藉由凱氏法或Coomassie藍色染劑染色法，來檢測其加熱後所產生具有螢光的衍生物，以及蛋白質的溶解度。甲醛滴定法Almquist及Maurer（1953）曾建議採用甲醛滴定法來評鑑大頭粕是否熱處理過度，其檢測結果之資料詳列如表７。經蒸煮過之大豆蛋白，其功能基會降低。甲酚紅染色法本染色法曾由Olomucki及Bornstein（1960）作過詳細的描述。其檢測步驟為，採取400毫克的樣品，先經1mm網目之篩網篩濾後，再置於10公撮之甲醛紅溶液中，然後一齊加以振動一個時。本檢測法所用之甲醛染色液，係以1公撮含有0.2公克溶於100公撮（0.2%）酒精及9公撮（0.1N）鹽酸混合液之甲醛紅溶液稀釋調製而成。上述稀釋液經離心處理後，其上層部份再到入一裝有9公撮（0.2N）的氫氧化鈉溶液中，並測量其顏色的濃度。如果Ｘ＝大豆粕被染劑所吸收的量（mg），而Ａ＝在最適當濃度所吸收的染劑量（mmg）讀取。那麼Ｘ＝〔2.00－(10XA)〕。甲醛紅染色法與大豆粕熱處理間的相關性詳列如表８。表７.以甲醛滴定作為大豆粕熱處理法的檢測指標高壓蒸煮時間（分鐘）以申醛滴定時，欲使pH值調至9.0時所需0.05N氫氧化鈉作用量（ML）07.9556.90156.50306.10455.70605.501204.70資料來源：Almquist及Maurer,1953表８.大豆粕熱處理程度與紅染色法間的關係加熱程度每公克大豆粕被甲醛紅吸收之重量（mg）生大豆粕2.0~3.0熱處理不夠3.3~3.7適度熱處理3.8~4.3熱處理過度4.3以上資料來源：Olomucki及Bornstein,1960橘色─Ｇ染劑染色法Moran等人（1963）曾就橘色染劑Ｇ染色法的檢測程序加以述說。大豆粕經高壓蒸煮後，其橘色─Ｇ染色值會隨之降低，但由他們研究所獲得之數字（詳如表９）顯示，此一檢測方法靈敏度並不很高。螢光測定法徐等人（1949）曾經提述過一種利用螢組檢測熱處理大豆粕抽出物的方法，人旦他們對於此項檢測方法的細節並未加說明。惟按Ewing（1963）所引述的檢測步驟，是將採得之雙份經細磨之大豆粕樣品（每份樣品為0.01公克），倒入裝有25公撮0.01M濃度氫氧化鉀磷酸鹽溶液的50公撮加蓋Er-lenmeyer三角餅中，在pH值4.8的狀況下，以機械方式振盪15分鐘與予萃取。再用42號Whatman濾紙上述萃取液加以過濾，然後將過濾後之溶液，置於Coleman-12型的螢光測定儀下，檢測並讀出其螢光值。在檢測螢光值前，螢光測定儀必需先予標準化校正，即在以每公撮0.10mg奎寧之標準受測液作校正測試時，其螢光值讀取數標準應為100。最後在作檢測時，需將萃取液適當地稀釋成幾種不同的濃度，並置於磷酸鹽的緩衝液中，再進行檢讀結果，而其檢測結果，係以相當於每公古大豆粕中所含奎寧硫化物微克量的螢光值來表示。Balloum等人（1953）曾採用此種方法來檢測經高壓（磅／平方英吋）蒸煮過的大豆粕，並與使用尿素酶活性的檢測方法作過比較。尿素酶活性是用每以克加有尿素大豆粕所釋放出來氨的百萬分當量來測定；而螢光值則是以每公克大豆粕中所含奎寧硫化物的微克量來表示。由他們所測得而列於表10的數字顯示，當大豆粕經過壓蒸煮至60至90分鐘時，其螢光值會有顯著的增加，也就是說大豆粕加熱處理時延長，會有引起雞隻生長減緩的情形。表９.大豆粕加熱處理對其橘色─Ｇ染色法反應能力之影響在120℃下高壓蒸煮時間（分鐘）每公克大豆粕吸附之染劑量（mg）由染色浾所測得之蛋白質量（%）070.843.85683541.63068.441.54568.541.66063.837.29063.236.612061.234.7資料來源：Mpran等人，1963。表１０大豆粕高壓蒸煮時間對其尿素酶含量、螢光值及蛋白質溶解度之影響高壓蒸煮時間（分鐘）雞隻之反應增重（以克）尿素酶值螢光量值水溶性氮佔總氮量之百分率02235.0225.376.032284.7025.553.252293.6125.543.5102402.2226.024.1202990.2628.27.7602770.1437.57.41202420.1251.87.5資料來源：徐等人，1949蛋白質溶解度─凱氏法利用凱氏法來檢測蛋白質溶解度的這種方法，過去在考慮大豆粕的熱處理是否足夠時，曾被用來檢測可溶性蛋白質的部份（Araba及Dale，1990a）。由表11的資料可以看出，大豆粕中蛋白質的溶解度隨高壓蒸煮時間的延長而降低，與雞隻生長的減緩有著極密切的關係，因為那些未經熱處理的樣品，事實上在商業化的加工過程中都已將其中的生長抑制因與予破壞。表12.大豆薄片經高壓蒸煮處理後對其一些用化學方法所測得指數的影響高壓蒸煮在0.2%氫氧化鉀溶液中蛋白質的溶解度凱氏蛋白質（%）每100mg粗蛋白吸附Comassie之量（mg）每g大豆粕之胰蛋白酶抑制因子活性單位數尿素酶活性pH變化值每g大豆粕吸附橘色-Ｇ染劑量（mg）094.667.636,74001.3040.8768.950.2700034.11564.645.6180034.12147.733.70030.03047.925.70028.04635.819.20026.66034.117.20023.2資料來源：Kratzer等人，1990a表13.不同高壓蒸煮處理時間之大豆粕及離胺酸之添加對出生後21天齡雞隻增重及飼料效率之影響高壓蒸煮時間（分）隻日增重（公克）飼料換肉率1.2%離胺酸1.4%離胺酸1.2%離胺酸1.4%離胺酸種禽飼糧29.9bc─1.65─021.0d25.9d1.671.65731.2ab33.5a1.371.35528.7c33.9a1.361.362129.6bc31.7ab1.381.383029.6bc32.6a1.441.384526.2d32.9a1.481.416021.3c30.0bc1.591.381.表欄中數字右上角註有不同標示者，係表示其差異顯著（P0.05）2.資料來源：Kratzer等人，1990b。表14.大豆薄片經不同時間高壓蒸煮處理後對其一些用化學方法所測指數的影響高壓蒸煮時間在0.2%氫氧化鉀溶液中蛋白質的溶解度凱氏蛋白質(%)每100mg粗蛋白吸Coomassie之量(mg)尿素酶活性pH變化值每g大豆粕之胰蛋白酶抑制因子活性單位數福爾馬林(ml0.05NNaOH/2g)每g大豆粕吸附橘色-Ｇ染劑量(mg)090.967.31,9539,0008.847.81554.144.70.104807.140.23044.632.90.10o6.638.94530.027.40.0706.035.36028.922.90.0505.534.412015.711.9005.333.518012.67.7005.229.1Coomassie-藍染色法Coomassie-藍”這種染劑會使蛋白質呈現顏色，人旦對胺基酸則無是項作業。用”Coomassie-藍染色法”來檢測蛋白質的這種方法，是由Bradford（1976）所倡議的。為測定溶於0.2%氫氧化鉀溶液中的蛋白質，並與已知溶菌酵素（lysozyme）含量的方法（Kratzer等人，1990）作色值強度的比較，此一檢測法已經過修改。在檢測過程中最重要的是，其所用經細磨的40mg大豆粕樣品（大約含有20mg的蛋白質），需先倒入10公撮0.2%的氫氧化鉀（KOH）溶液中，再一齊旋轉3~4次。在經過10分鐘後，再將其上層液用１號濾紙加以過濾，並取出１公撮的過濾液，用含有氯化鈉─磷酸鹽的緩衝液將其稀釋成５公撮。經稀釋過的濾液，再與9.5公撮的Coomassie-藍染劑溶液（即以50公撮的染劑溶於50公撮16M的H3PO4，以及以46.7公撮量用非離子化水稀釋成1公升乙醇的方式調配而成）混合。以每平方英吋15磅高壓蒸煮過之大豆粕，其在0.2%氫化鉀溶液內停留不同時間下的溶解度詳列表如表11。由Coomassie-藍染色法及凱氏法斤測得之蛋白質溶解度會隨高壓蒸煮時間的增長而降低。由染色法及凱氏法所測得之蛋白質溶解度實際數值，可能由於用凱氏法檢測時亦將胺基酸部份計算在蛋白質內，所以雖然遠比凱氏法所測者來得低，但由兩種方法所測出之溶解度數值仍極為一致。表11.大豆粕高壓蒸煮時間對0~18日齡雞隻飼