茶叶中茶多酚的提取及其消炎作用与丁苯羟酸乳膏的比较

1茶叶中茶多酚的提取及其消炎作用与丁苯羟酸乳膏的比较目录1、前言…………………………………………………………………………322、实验目的……………………………………………………………………33、实验原理……………………………………………………………………34、实验设备……………………………………………………………………45、实验材料及试剂……………………………………………………………46、实验操作步骤………………………………………………………………57、结果及计算（附图表）……………………………………………………88、注意事项……………………………………………………………………109、费用预算……………………………………………………………………1010、实验可行性分析和评估…………………………………………………1111、指导老师…………………………………………………………………1112、参考文献…………………………………………………………………11摘要目前可用浓茶汁消炎杀菌，但浓茶消炎会造成物质浪费，使用不便。本实验拟提取3绿茶中的主要消炎成分，进行定性、定量分析并将其主要消炎成分制成软膏，以大鼠踝关节炎症模型比较不同浓度茶多酚软膏之间的疗效和茶多酚软膏与丁苯羟酸乳膏的疗效。关键词茶叶消炎茶多酚茶多酚软膏1前言茶叶中富含茶多酚、氨基酸、维生素及多种矿物质等。茶叶具有清暑、解毒、治痢、祛痰、明目等广为人知的二十三功效，被世人誉为“万病之药”。浓茶汁具有消炎杀菌的作用，与水混合后煎沸成浓汁。每日一剂，日2次，在患处用浓汁外敷，可以起到很好的消炎作用。但是浓茶汁在使用上存在一定的弊端，如浓茶汁需每日煎熬2次，涂抹不宜等，给病人的使用带来了很大的不便。因此需要寻找一种更好的利用茶叶消炎的替代方法。本实验拟提取茶叶中消炎的有效成分，并将主要消炎成分以不同配比制成软膏，以大鼠踝关节炎症模型比较不同浓度茶多酚软膏之间治炎的疗效和茶多酚软膏与丁苯羟酸乳膏治炎的疗效。2实验目的提取茶叶中的茶多酚并制成软膏，探究其抗炎药效，并比较丁苯羟酸乳膏的抗炎效果。3实验原理3.1提取茶多酚是茶叶中的多酚类物质，主要成分为儿茶素、黄酮等，利用这些成分易溶于乙醇的特点，用乙醇浸提茶叶，得到茶多酚粗提取液。利用茶多酚跟钡、铝、钙等离子生成络合沉淀的特点，使其从提液中分离出来，从而与水溶液中咖啡碱、单糖、氨基酸等组分分离，再用盐酸溶解，并用乙酸乙酯萃取，即得到纯度较高茶多酚溶液。3.2鉴定儿茶素为茶多酚的主要成分，约占总量的60%～80%，因此可以通过儿茶素和香夹兰素在强酸条件下生成桔红色到紫红色产物的特定显色反应，鉴定提取液中含茶多酚。3.3含量测定4茶多酚能和亚铁离子产生络合反应的酚性化合物，为蓝色络合物，该络合物的吸光度与其浓度成正相关，因此可以用分光光度法测定其含量，最后通过公式换算得出茶多酚浓缩液的茶多酚浓度。3.4探究抗炎药效设置不同浓度的茶多酚软膏，通过空白组和丁苯羟酸乳膏、浓度梯度相互对照，探究茶多酚的抗炎药效。炎症动物模型采用新鲜鸡蛋清致大鼠足趾肿胀模型。利用毛细管放大原理，将大鼠足趾容积的变化，转换为排水量变化，最后通过毛细管得高度刻度反映出来。4实验设备电热套、托盘天平、电子分析天平、烧杯、铁架台、三角瓶、10ml量筒、温度计、分液漏斗、布氏漏斗、循环水泵、滤纸、螺旋夹、单孔塞套管、毛细管、Y型管、蒸馏头、直形冷凝管、真空接引管、漏斗、玻璃导管、（100ml、25ml）容量瓶、移液管、分光光度计（UV-1100，上海美谱达/上海）、洗耳球、玻璃棒、蒸发皿、纱布、棉棒、注射器、刻度吸管、玻璃管（内径2cm、长8cm）、记号笔、橡皮管、三通活塞、计时器、试管5实验材料及试剂5.1实验材料：大鼠、茶叶、丁苯羟酸乳膏5.2试剂及其配制：水、无水氯化铝、NaHCO3、60%乙醇溶液，乙酸乙酯、硫酸亚铁、氯化锌、香夹兰素、浓盐酸、酒石酸钠钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、酒石酸亚铁溶液、2.1ml新鲜鸡蛋清、10g凡士林，20g羊毛脂5.3溶液的配制：5.3.1凡士林-羊毛脂溶液：称取10g凡士林，20g羊毛脂，放入盛有40ml水和20ml90%乙醇中，并使其充分溶解后备用。5.3.2酒石酸亚铁溶液：秤取0.1g（准确至0.0001）硫酸亚铁FeSO3·7H2O，0.5g酒石酸钠钾KNaC14H4O6·4H2O（准确至0.0001）,用水溶解并定容至100ml。5.3.3pH7.5磷酸盐缓冲液：5.3.3.11/15mol/L磷酸二氢钠：1/15mol/L磷酸二氢钠：称取2.39g十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），加水溶解后定容至100ml。5.3.3.21/15mol/L磷酸二氢钾：称取经0.908g110℃烘干的磷酸二氢钾（KH2PO4），加水溶解后定容至100ml。55.3.3.3取上述1/15mol/L的磷酸氢二钠85ml和1/15mol/L的磷酸二氢钾15ml混合均匀。5.3.41%香夹兰素盐酸溶液：0.1g香夹兰素溶于10ml浓盐酸中，配好的溶液呈淡黄色，若发现变红或变蓝绿者俊不宜采用。6实验操作步骤6.1茶多酚的提取6.1.1取茶叶25g，置于2000ml平底烧瓶中，加入60%乙醇，1g茶叶加入25ml乙醇，加热至70℃，浸提20分钟。去除茶渣。浸提两次。6.1.2加入氯化铝和氯化锌(按照1:2比例)，沉淀剂质量：茶叶质量=3:20，加入NaHCO3,pH调节至6，得到沉淀物，过滤取滤渣，加入稀盐酸至沉淀完全溶解。6.1.3萃取：用乙酸乙酯萃取3次，体积比1:1。6.1.4蒸发浓缩：采用减压蒸发，装置如图1.在蒸馏烧瓶中加入萃取所得的液体，然后连接真空接口和减压器，使系统处于减压状态。打开水浴锅加热蒸馏烧瓶。浓缩至可见晶体析出时，停止加热。6.1.5用量筒测定浓缩液的体积图16.2茶多酚的鉴定取10ml香夹兰素盐酸浓缩液，加入内盛1ml95%乙醇的试管中，然后加入5ml1%香夹兰素盐酸溶液，加塞后振荡摇匀，观察其颜色变化。6.3定量66.3.1稀释浓缩液：用20ml移液管精确量取20ml浓缩液至100ml定量瓶中，加入蒸馏水，稀释定容至100ml，充分振荡混匀。6.3.2配制测量液在25ml容量瓶中用定量加样器加入5ml稀释液（3.4.1），再加入5ml酒石酸亚铁（3.1.1）,充分混合，再加入缓冲液至刻度，摇匀。配制空白液：在25ml容量瓶中加入5ml蒸馏水、5ml酒石酸亚铁，用磷酸缓冲液定容至刻度。6.3.3测量吸光度：用10mm比色杯，波长540nm处，以试剂空白液作为参比，测定吸光度。然后用下式计算出浓缩液浓度。3.913--当吸光度为1.0时，每毫升溶液中茶多酚的量A—测得的吸光度，测得浓缩液中茶多酚的浓度为C16.3.3配置25ml茶多酚-乙醇溶液6.6.3.1计算浓缩物的物质的量n用量筒测量茶多酚浓缩物的体积V1，根据n=C1*V1计算出浓缩物中茶多酚的物质的量6.3.3.2茶多酚-乙醇溶液配置及浓度计算将茶多酚浓缩物和90%乙醇溶液混合，在25ml容量瓶中配置成25ml茶多酚乙醇溶液。根据C1=n/25计算出茶多酚-乙醇溶液的浓度C2，然后再计算出各软膏中茶多酚的浓度。6.4制备茶多酚软膏按下表分别取茶多酚溶液、凡士林-羊毛脂溶液若干，混合搅匀，静置一段时间后成为膏状物，制备不同配比的茶多酚软膏。茶多酚软膏主要成分的配比7成分（ml）1号软膏2号软膏3号软膏4号软膏5号软膏6号软膏茶多酚溶液23456——凡士林-羊毛脂溶液8765410总体积1010101010107号软膏——丁苯羟酸乳膏6.5各组茶多酚软膏及市售消炎药的消炎作用比较6.5.1建立小鼠皮肤炎症模型：取体重相近且同性别的大鼠11只，编号1——11，称重。以排水法分别测量11只大鼠左后脚及右后脚的正常容积值（以毫升表示），测量2次，取其平均值作为致炎前自身对照。按下表在各大鼠左、右后足均匀涂抹所对应药膏3ml，并用纱胶布固定1h后去掉药膏。然后在大鼠左、右后脚掌腱膜下向踝关节周围注射新鲜鸡蛋清0.1ml使其致炎。致炎后每隔1h测量各只小鼠左、右后脚的容积，连续3次。以左、右后脚给致炎剂前后容积之差，作为踝关节肿胀程度。6.5.2容积测定及各组药膏消炎作用比较排水法测量装置如图2所示大鼠编号左后脚右后脚11号药膏2号药膏23号药膏4号药膏35号药膏6号药膏47号药膏8图26.5.2.1三路活塞，一端与5ml注射器相通，一端与倒置的刻度吸管想通，中间与一玻璃管相连，玻璃管内径2cm，长8cm，其内盛满水银（或水）。转动三路活塞D使A与B相通，将水推到吸管的“0”点，接着关闭B使A与C相通。6.5.2.2将注射器内的水推完，用吸管调节玻璃管内水量，使刻度吸管内液面与玻璃管上刻度平齐，并在玻璃管水面做以标记。6.5.2.3为使每次测量位置相同，可先用记号笔或黑漆在实验大鼠左、右后脚划一标记，然后将此脚置入玻璃管内，玻璃管内水面上升，抽动注射器针芯使足标记与玻璃管上的标记相平行。待玻璃管内液面与其标记相平时，立即关闭C使A与B相通，随即取出大鼠后脚。6.5.2.4将注射器内液体全部推入吸管内，记录水柱高度。此时吸管内显示的水柱高度即为大鼠后脚的容积。7结果及计算（附图表）7.1茶叶中茶多酚含量的计算表1次数123平均值吸光度A0.0700.0700.0710.0707.2茶多酚浓缩物的体积：V1=48.0mlADCB5ml97.3各软膏所含茶多酚的含量（mol）V2=20ml软膏编号12345茶多酚含量10.9616.4421.9227.4036.887.4各组软消炎作用比较的数据记录和统计分析7.4.1各组大鼠左、右后脚致炎前正常容积（ml）表2大鼠致炎前左后脚正常容积（ml）表3大鼠右后脚致炎前正常容积（ml）7.4.2给致炎剂后连续1、2、3小时各组大鼠左、右后脚容积（ml）表4给致炎剂后连续1、2、3小时大鼠左后脚容积（ml）表5给致炎剂后连续1、2、3小时大鼠右后脚容积（ml）7.4.3各组大鼠左、右踝关节的肿胀程度（ml）大鼠编号1234第一次测量1.201.201.201.00第二次测量1.301.101.301.10平均值1.251.151.251.05大鼠编号123第一次测量0.91.00.9第二次测量1.11.11.0平均值1.001.050.95大鼠编号12340.5h2.502.301.902.001.0h1.702.301.602.001.5h1.401.901.301.50大鼠编号1230.5h2.502.002.001.0h1.701.901.701.5h1.201.401.5010表6大鼠左踝关节的肿胀程度（ml）表7大鼠右踝关节的肿胀程度（ml）7.4.4各组药膏的消炎作用比较（ml）表8涂抹不同药膏大鼠足肿胀度（ml）8实验结果讨论：8.1.鸡蛋清致敏大鼠属I型超敏反应，反应很快，消肿也较快。8.2.大鼠有个体差异，免疫力不同，故每只大鼠在相同时间内消肿程度也有所差异，且测量仪器存在误差，所以不能准确判断最佳消炎的茶多酚含量。8.3.香夹兰素鉴定茶多酚：待反应液显色比预计时间长，可能原因是在实验中反应液PH较大，影响香夹兰素与茶多酚的反应。8.4.以绑紧的棉球代替软膏：由于无羊毛脂，凡士林吸收乙醇能力太低，无法混合后制成软膏，故用绑紧的浸有茶多酚的棉球代替之。8.5.因大鼠足会带走一些水分，所以每一次测量前，都要调节C和B的液面到原标记点。9注意事项大鼠编号12340.5h1.251.150.650.951.0h0.451.150.350.951.5h0.150.750.050.45大鼠编号1230.5h1.500.951.051.0h0.700.850.751.5h0.200.350.55药膏编号12345670.5h1.251.501.150.950.651.050.951.0h0.450.701.150.850.350.750.951.5h0.150.200.750.350.050.550.4511大鼠凶