药物中糖类和二元醇类化合物的分析

药物中糖类和二元醇类化合物的分析摘要：本注解描述了三根不同的阴离子交换柱以安培法检测药品中常见的简单糖类，糖醇类和二元醇类化合物的方法；并比较了IonPacICE-AS1离子排斥柱，CarbonPacPA10柱和CarbonPacMA1柱等三种方法分析药物中糖类和二元醇类的选择性。结果表明，CarboPacMA1柱分离安培检测法可以分析药物成分中的二元醇类和碳水化合物。CarboPacPA10柱也可以分离糖醇和碳水化合物，但不适于分离丙烯乙二醇和丙三醇。IonPacACE-AS1分析柱和NG1保护柱可以快速分离丙烯乙二醇和丙三醇关键词：阴离子交换柱；安培法；非处方药物；抑制型电导法前言药物中的有些成分不具有发色团，不能用吸收法检测。其中一些成分，如糖类化合物，二元醇类，糖醇类，胺类和含硫化合物可以被氧化，因此可以用安培检测器检测。这种检测方法可以使能被氧化的物质在特定电位下检测，而那些不能被氧化的化合物不被检测[1,2]。安培检测器具有检测范围宽和检测限低的特点。本文描述了三根不同的阴离子交换柱以安培法检测药品中常见的简单糖类，糖醇类和二元醇类化合物的方法。选择了两种口服的非处方药物—止咳剂和流感药物。这两种药物中均含有简单的糖类化合物，糖醇类和二元醇类化合物，这些化合物在其他药物中也比较常见。而且，这两种药物中含有的无机和有机阴离子成分可以用IonPacAS14和IonPacAS11柱分离并用抑制型电导法检测[3]。比较了IonPacICE-AS1离子排斥柱，CarbonPacPA10柱和CarbonPacMA1柱等三种方法分析药物中糖类和二元醇类的选择性。ICE-AS1离子排斥柱的树脂珠是表面完全磺化的聚乙烯-二乙烯基苯聚合物，柱容量为27meq／柱，中等亲水性。这种柱子的保留机理是离子排斥，空间排斥和吸附。弱离子化的酸可以根据pKa的不同，大小的差异和疏水性的不同实现分离。这种柱子是分离脂肪族有机酸以及复杂样品和高离子强度样品中醇类化合物的理想柱子。CarbonPacPA10柱对单糖具有高度选择性，CarbonPacMA1柱主要用来分离糖醇和二元醇类化合物。有关这两种柱子的详细介绍请参考TN20。IonPacICE-AS1离子排斥柱和CarbonPacPA10柱，不包括CarbonPacMA1柱，都能兼容含有机溶剂的淋洗液，所以可以用有机溶剂清洗柱子。报道了CarbonPacMA1柱的检测限，线性范围，选择性，准确度和精密度。有关CarbonPacPA10柱分析单糖的方法请参考TN40[4]。1实验部分1.1仪器与试剂DionexDX-500装置，包括GP40梯度泵(在线脱气)，ED40电化学检测器，LC30或LC25柱温箱和AS3500自动进样器。PeakNet色谱工作站。氢氧化钠，50%(w/w)；高氯酸，70%(w/w)；去离子水，18MΩ-cm电阻或更高1.2样品预处理将1g药品与9g水混合得到稀释10倍的样品溶液，而后依次稀释得到100倍和1000倍稀释溶液。样品溶液的密度可以通过测量已知体积的质量得到，然后根据其密度计算最终的浓度。粗体表示的组分的浓度可以通过阴离子交换安培检测，其他组分的浓度可以用IonPacAS14和AS11柱抑制电导分离检测。2结果与讨论图1是用100mM高氯酸作淋洗液且用IonPacACE-AS1分析柱和NG1保护柱分离山梨醇，丙三醇和丙烯乙二醇的标准谱图。分离是等度分离，可以缩短每个样品分析的时间，提高样品通量。丙三醇，丙烯乙二醇和糖醇可以在10min内得到分离。样品中的溶解氧在总的渗透体积处流出，8min前在基线上以负峰形式出现。使用NG1中性保护柱提高了总的渗透体积，使氧负峰远离分析物。不使用NG1中性保护柱，蔗糖，山梨醇，麦芽糖醇和甘露醇可以很好的分离，但氧负峰干扰丙烯乙二醇的峰。减小或消除氧负峰的方法就是进样前将样品脱气。柱子：IonPacACE-AS1分析柱，NG1保护柱淋洗液：100mM高氯酸流速：2.0mL/min进样体积：10μL检测器：脉冲安培检测器，铂电极峰：1.葡萄糖2.山梨醇3.丙三醇4.丙烯乙二醇图1IonPacACE-AS1柱分离药物中常见二元醇、糖醇和糖类化合物的标准谱图柱子：CarboPacPA10柱淋洗液：18mMNaOH流速：1.5mL/min进样体积：10μL检测器：脉冲安培检测器，金电极峰：1.丙烯乙二醇2.丙三醇3.山梨醇4.甘露醇5.麦芽糖醇6.葡萄糖7.蔗糖图2是用CarboPacPA10柱氢氧化钠等度分离丙烯乙二醇，丙三醇，山梨醇，甘露醇，麦芽糖醇，蔗糖和葡萄糖的标准谱图。丙烯乙二醇和丙三醇在接近死体积处淋洗，不能基线分离。丙烯乙二醇，丙三醇，山梨醇，甘露醇，麦芽糖醇和蔗糖能够用CarboPacMA1柱完全分离，如图3所示。用PA10柱和MA1柱分离上述化合物可以通过调节淋洗液的强度缩短分析时间，但分离度会变差。柱子：CarboPacMA1柱淋洗液：480mMNaOH流速：0.4mL/min进样体积：10μL检测器：脉冲安培检测器，金电极峰：1.丙烯乙二醇,10mg/L2.丙三醇,10mg/L3.山梨醇,10mg/L4.甘露醇,10mg/L5.麦芽糖醇,10mg/L图3CarboPacMA1柱分离二元醇、糖醇和糖类化合物的标准谱图图4和图5比较了IonPacACE-AS1分析柱和MA1柱分析止咳剂的选择性。一般情况下，IonPacACE-AS1分析柱的峰洗脱顺序与MA1柱相反。IonPacACE-AS1分析柱上早洗脱的糖醇和碳水化合物分离度较差，丙烯乙二醇和丙三醇可以完全分离。图6是用MA1柱分离多症状伤风/流感药的色谱图。图4IonPacACE-AS1柱分离止咳剂的糖醇和丙三醇的标准谱图图5CarboPacMA1柱分离止咳剂的糖醇和丙三醇的标准谱图3.结论CarboPacMA1柱分离安培检测法可以分析药物成分中的二元醇类和碳水化合物。CarboPacPA10柱也可以分离糖醇和碳水化合物，但不适于分离丙烯乙二醇和丙三醇。IonPacACE-AS1分析柱和NG1保护柱可以快速分离丙烯乙二醇和丙三醇，但是分离大部分碳水化合物和有些糖醇无效。参考文献1.RocklinRA.PracticalGuidetoHPLCDetection;D.Parriott,Ed.;Chapter6,ElectrochemicalDetection,AcademicPress:SanDiego,CA,1993,pp145-173.2.RocklinRD.J.Chromatogr.1991,546,175-187.3.DionexCorporation,“QuantificationofAnionsinPharmaceuticals”,ApplicationNote116.4.DionexCorporation,“GlycoproteinMonosaccharideAnalysisUsingHigh-PerformanceAnion-ExchangeChromatographywithPulsedAmperometricDetection(HPAE-PAD)”,TechnicalNote40.