第八章胚胎移植

家畜繁殖学第八章胚胎移植锡林郭勒职业学院锡林郭勒职业学院第八章胚胎移植一、概述二、胚胎移植生理学基础和基本原则三、同期发情和超数排卵的实施四、胚胎采集五、胚胎的检查与鉴定六、胚胎的保存七、胚胎的移植锡林郭勒职业学院一、概述（一）含义胚胎移植是指将一头优良种母畜配种后的早期胚胎取出，移植到另一头同种且生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成为新个体的过程。1.供体2.受体锡林郭勒职业学院（二）技术程序1.供体和受体的同期发情2.供体母畜超数排卵3.供体的发情鉴定和配种4.胚胎的采集5.胚胎的检查与鉴定6.胚胎的保存7.胚胎的移植技术程序牛胚胎移植技术路线示意图锡林郭勒职业学院波尔山羊胚胎移植锡林郭勒职业学院1.充分发挥优良母畜的繁殖潜力。2.缩短世代间隔，及早进行后裔测定。3.提高生产效率。4.代替种畜的引进。5.保存品种资源。（三）胚胎移植的意义锡林郭勒职业学院二、胚胎移植的生理学基础和基本原则（一）胚胎移植的生理学基础1.每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育2.早期胚胎处于游离状态3.胚胎发育不存在免疫问题4.胚胎和受体之间建立有效联系5.胚胎的遗传特性不受受体的影响锡林郭勒职业学院（二）胚胎移植的基本原则1.胚胎移植前后所处的环境的同一性–(1)供体和受体在分类学上的相同属性–(2)动物生理上的一致性：受体和供体在发情时间上的同期性–(3)动物解剖位置上的一致性：空间环境的一致性2.胚胎的发育期限：必须处于周期黄体期内3.胚胎的质量：胚胎必须是正常的，并在处理过程中不受不良因素的影响锡林郭勒职业学院三、同期发情与超数排卵的实施（一）供体和受体的选择供体应具有相当高的育种价值，供体生殖机能应处于较高的状态，产后60天以上，无生殖系统疾病，体质强健受体应容易购买，繁殖性能好，对地方适应性强，体型中上等，非优良品种。受体健康状况良好，已进入发情季节。锡林郭勒职业学院•缩短黄体期(前列腺素法PG法)•延长黄体期（孕酮法）（二）供受体的同期发情放栓锡林郭勒职业学院1.牛（1）FSH法：（减量注射法）供体牛在发情后的9-13d肌注FSH，早晚各一次，分4d减量注射。在第3d时同时子宫灌注PGF2a。（三）供体超数排卵处理锡林郭勒职业学院（2）PMSG法孕马血清促性腺激素(PMSG)处理法在发情期的11-13天，一次肌注PMSG2500～3000IU，48h后宫注PGF2α2.4mg。发情后约18h肌注等量的抗PMSG。2.羊的超排处理FSH+PG法：从供体发情周期的第9-13天开始注射FSH，以日递减剂量连续注射3天6次，每次间隔12小时,总剂量为150-300IU，在第5次注射FSH的同时肌注氯前列稀醇0.1毫克。锡林郭勒职业学院锡林郭勒职业学院锡林郭勒职业学院1.发情鉴定：外部观察法、试情法、阴道检查法、直肠检查法超排处理后12-48h发情（三）供体的发情鉴定和配种锡林郭勒职业学院2.配种配种：自然交配、人工授精。选择适当的时间，使用优良种公畜的精液对供体母畜进行输精。为了得到较多的发育正常的胚胎，使用密度大、活率高的精液输精，并且将输精次数增加到2～3次，间隔8-10h。羊的配种视频胚胎的采集是利用冲冼液将胚胎从生殖道内冲出，并收集在器皿中。胚胎的采集分手术法和非手术法。胚胎采集的时间：一般在配种后3～8d，发育至4～8细胞期后；牛胚胎最好在发育至桑椹胚晚期或胚泡早期进行收集和移植。四、胚胎的采集锡林郭勒职业学院锡林郭勒职业学院五、胚胎的检查与鉴定收集到的冲冼液，需静置10min，使胚胎下沉到容器底部，然后移去上清液，再放于解剖镜下检查胚胎的数量和发育情况，再将发育正常的胚胎收集到注射器或移植管内供移植用。胚胎的检查项目：1.受精卵整体的形态和体积大小；2.透明带形状，厚度及损伤程度；3.发育正常胚胎的卵裂球应该具有整齐的外形，大小一致，分布均匀而紧密，发育速度与胚龄一致；4.卵细胞表面颗粒的状态和多少等。锡林郭勒职业学院正常胚胎的形态锡林郭勒职业学院锡林郭勒职业学院A级;形态完整,轮廓清晰,呈球形,分裂球大小均匀,透明带适中；B级;轮廓清晰,色调和细胞密度良好；C级;轮廓不清楚,色调发暗,结构较松散,游离的细胞和液胞较多；D级;轮廓模糊,色调暗,结构松散,碎片细胞和液泡很多。胚胎的分级标准锡林郭勒职业学院A级B级C级D级囊胚的分级锡林郭勒职业学院A、B级胚胎胚胎的分级锡林郭勒职业学院未受精卵或异常胚胎锡林郭勒职业学院六、胚胎的保存1、常温保存：15～25℃2、低温保存：0～10℃3、冷冻保存：-79～-196℃锡林郭勒职业学院1）逐步降温法①室温下胚胎置于小分子量可渗低温保护溶液中，且在胚胎和冷冻保护液之间达到平衡；②一般在-5℃～-7℃植冰；③可控的、缓慢降温（0.33～1.0℃／分）；④降温到-30℃或-70℃时，投入液氮中保存；⑤快速解冻；⑥在培养或移植前，在室温下除去低温保护剂，为保持细胞的正常生理功能。3.冷冻保存锡林郭勒职业学院3.冷冻保存2）一步吸管法七、胚胎的移植1.手术法移植（各种家畜和实验动物）在受体腹部作一切口，找到排卵一侧的卵巢并观察黄体发育情况，然后用注射器或移植管将含有胚胎的培养液或冲冼液注入到子宫角内或输卵管内。另外可采用腹腔内窥镜移植2.非手术法移植（大家畜）（1）先将胚胎装入0.25ml的塑料细管内；（2）直肠检查黄体位置后，最好先作硬膜外腔麻醉，然后似人工授精般将胚胎用移植管通过子宫颈放入到与黄体同侧的子宫角的大弯或大弯深处内，或两侧子宫角各放一枚胚胎。受体与产的羔羊锡林郭勒职业学院受体黄牛与胚胎移植生产的良种肉牛小结一、概述（概念、意义、胚胎移植程序）二、胚胎移植生理学基础和基本原则三、同期发情和超数排卵的实施四、胚胎采集五、胚胎的检查与鉴定六、胚胎的保存七、胚胎的移植锡林郭勒职业学院锡林郭勒职业学院复习思考题1.胚胎移植的生理学基础和基本原则是什么？2.分别简述牛、羊胚胎移植操作过程？Questions？锡林郭勒职业学院目录绪论第一章家畜生殖器官第二章生殖激素及其应用第三章母畜发情及发情鉴定第四章人工授精技术第五章受精、妊娠及妊娠诊断第六章分娩与助产第七章发情控制技术第八章胚胎工程第九章家畜繁殖力锡林郭勒职业学院锡林郭勒职业学院附：超链接插入的图片例：充分发挥优良母畜的繁殖潜力一则使优良供体省去很长的怀孕期、缩短繁殖周期；二则实行超数排卵，一次可获得更多的优良胚胎。与提高优良公畜的配种效能的人工授精技术相对应。正常妊娠：1头优良母牛妊娠期282天，产1头犊牛，一年产1.2胎。胚胎移植：1.超数排卵：1头优良母牛可排12个卵子2.胚胎移植：10个卵子受精，最后成活8头犊牛。一年（2-3月可进行一次胚胎移植）：可进行4次移植，一年产4×8=32个犊牛。例：锡盟乌拉盖引进万枚胚胎2001年1.2万枚澳大利亚多赛特与陶赛克绵羊的胚胎(受精卵)，跨越太平洋，在内蒙古锡盟乌拉盖草原的万余只母羊的子宫内“安家落户”。把澳大利亚羊胚胎顺利移植到内蒙古地方优良品种——乌珠穆泌肥尾羊母羊体内。锡林郭勒职业学院锡林郭勒职业学院锡林郭勒职业学院解剖部位的一致性胚胎子宫角锡林郭勒职业学院一般多用杜氏磷酸盐缓冲液（PBS）布林特氏液合成输卵管液惠屯氏液海姆氏TCM199培养液一般在其中都加上1-5%犊牛血清（FCS）或0.3-1%牛血清白蛋白（BSA）胚胎冲洗液锡林郭勒职业学院手术法（1）在腹部中线处作一切口，然后将子宫角和卵巢一起拉出，检查排卵点或血红体数量。（2）冲冼胚胎：向子宫注入冲冼液并在输卵管接取（牛、羊和兔等），或从输卵管注入冲冼液再从子宫角处接取（猪、马等）。手术冲胚法：输卵管伞子宫子宫角子宫体子宫输卵管伞手术法采集胚胎非手术法非手术法仅用于牛、马等大动物，且只能在胚胎进入子宫角中才能进行。（1）牛的非手术收集胚胎可利用二路式导管冲卵器。外管前端连接以气囊，当将冲卵器插入子宫内时，充气使气囊胀大，堵住子宫颈内口以免冲洗液经子宫颈流出。将冲洗液通过内管注入子宫角内，然后由另一导管导出冲洗液。（2）每侧子宫角需冲洗100～150ml。冲洗液的导出应顺畅，并尽可能回收全部注入的容量锡林郭勒职业学院非手术法胚胎采集非手术法胚胎采集手术法胚胎移植手术法胚胎移植锡林郭勒职业学院非手术法胚胎移植非手术法胚胎移植