萌动激活赤灵芝孢子粉致畸,致突变和抗突变的实验研究①

期刊文献癌变·畸变·突变2002年7月第14卷第3期Carcinogenesis,TeratogenesisandMutagenesisVol14No3July,2002文章编号:1004-616X(2002)03-0183-03·检测研究·萌动激活赤灵芝孢子粉致畸､致突变和抗突变的实验研究①邓丽霞1,胡斌1,陈小君2,陈铁江1,甘德秀1,郑履康1,范瑞泉1(1.中山大学公共卫生学院毒理学教研室;2.中山大学肿瘤研究所,广东广州510089)【摘要】目的与方法采用大鼠致畸胎､小鼠骨髓细胞染色体畸变(CA)分析检测萌动激活赤灵芝孢子粉的致畸胎､致突变和抗突变性｡结果:(1)灵芝孢子粉小鼠骨髓细胞CA率与阴性对照组比较差别无显著性(P005)｡(2)灵芝孢子粉对孕鼠体重､胚胎早期发育､胚胎生长发育､以及胎鼠的骨胳发育和内脏器官发育均无不良影响｡(3)灵芝孢子粉各剂量对40mg/kg､50mg/kg环磷酰胺(CP)诱发的小鼠骨髓细胞染色体畸变率有明显的抑制作用(P0.05,P001),抑制率分别为56.2%､34.1%､39.8%和67.8%､59.9%､52.0%,对50mg/kgCP诱发的CA抑制率在52.0%以上,并有剂量反应关系｡结论:萌动激活赤灵芝孢子粉未见致畸胎和细胞染色体损伤作用,对化学物引起的染色体损伤具有一定的拮抗或保护作用｡【关键词】萌动激活赤灵芝孢子粉;致畸胎;致突变;抗突变中图分类号:R28R965.2文献标识码:ASTUDYOFTHEGERMINATIONACTIVATEDGANODERMASPORESONTERATOGENICITY,MUTA-GENICITYANDANTIMUTAGENICITYDENGLi-xia1,HuBin1,CHENXiao-jun2,CHENTie-jiang1,GUNDe-xiu1,ZHENGLü-kong1,FANRui-quan1(1.DepartmentofToxicology,SchoolofPublicHealth,ZhongshanUniversity;2.TumorResearchInsti-tute,ZhongshanUniversity,Guangzhou510089,China)【Abstract】PurposeandMethods:ToanalysetheeffectsoftheGanodermasporesonteratogenicity,muta-genicityandanti-mutagenicitybythetestofteratogenesisinratsandofchromosomeaberration(CA)analysisinbonemarrowcellsofmice.Results:(1)TherateofCAinmiceinducedbythesporeshadnosignificantdifferenceascomparedwiththenegativecontrolgroup(P0.05).(2)Itdidnotshowthedevelopmenttoxicityinthede-velopmentofembryosaftertreatmentofthespores.(3)Germinationactivatedganodermasporescouldsignificant-lydepresstherateofCAinducedbyCP(40mg/kgand50mg/kg).ThedepressionrateofCAinducedbyCP(50mg/kg)wasabove52.0%andshoweddose-response.Conclusion:Germinationactivatedganodermasporeshadnoeffectsofteratogenicityandchromosomedamage,anditpossessestheantagonisticorprotectiveeffecttothechromosomedamage.【Keywords】germinationactivated/ganodermaspores;teratogenicity;mutagenicity;antimutagenicity灵芝孢子粉(ThesporesfromGanodermalu-cidummkarst)是灵芝发育周期中生长成熟期从菌盖弹射出来的象淡雾状的极其微小的孢子,萌动激活赤灵芝孢子粉是将休眠状态的灵芝孢子萌动激活,产生具有活性基团的生理活性物质;通过酶的有效破壁,它具有灵芝的全部活性物质｡已有研究表明,灵芝孢①收稿日期:20011122;修订日期:2002-04-05作者简介:邓丽霞(1947-),女,大专,副主任技师,本文通讯作者｡―183―期刊文献癌变·畸变·突变2002年7月第14卷第3期Carcinogenesis,TeratogenesisandMutagenesisVol14No3July,2002子粉有调节免疫功能作用和抗辐射作用[1,2],在体内外试验中均显示有抑制肿瘤作用[3]｡有报道灵芝孢子粉也有抗突变作用[4,5]｡有关灵芝孢子粉的致畸胎和致突变作用未见报道｡本文按保健品检测的有关规定对萌动激活赤灵芝孢子粉的大鼠致畸胎､小鼠骨髓细胞染色体损伤作用和抗突变性进行了探讨,现将结果作报道如下｡1材料与方法1.1动物SD大鼠体重200~250g,NH小鼠18~20g,均由广东省医学实验动物中心提供｡动物合格证号;大鼠2000A026,小鼠2000A025,饲养条件:清洁级动物房,空调下恒温恒湿｡1.2药物与试剂萌动激活赤灵芝孢子粉由中山大学国家教育部食品工程研究中心及广州绿色盈康生物工程有限公司提供｡环磷酰胺(CP)为上海第十二药厂产品｡1.3大鼠致畸胎试验参照卫生部药政局《新药(中药)临床前研究指南》｡选健康SD大鼠,雌雄之间以2:1的比例同笼过夜,次日起每天作阴道涂片检查,发现精子当天定为受孕第0d,将孕鼠随机分为5组,每组18只｡灵芝孢子粉设高､中､低剂量组,剂量分别为4286mg/kg､2143mg/kg､428.6mg/kg,在受孕第6~15d按1.5ml/100kg·bw给予受试物｡阳性组在受孕第10~12d按1.0ml/100kg给予阿司匹林(250mg/kg),阴性对照组给予等量的蒸馏水｡给药途径均经口灌胃｡所有孕鼠每隔3d称重一次,按体重变化调整给药量｡在受孕第20d用颈椎脱位法处死动物,剖腹取出胎鼠进行各项指标检查｡1.4小鼠骨髓细胞染色体畸变分析选雄性小鼠25只,随机分为5组,每组5只｡连续3d每天1次给予灵芝孢子,剂量为10000mg/kg,2000mg/kg,400mg/kg(按0.4ml/10g经口灌胃)｡阴性对照组给予等量的蒸馏水,阳性对照组在处死前24h给予环磷酰胺(40mg/kg)｡给药后24h处死动物,处死前4h给予秋水仙素(4mg/kg),取股骨骨髓常规制作染色体标本[6],观察小鼠骨髓细胞中期相细胞染色体畸变率｡1.5抗突变试验参照卫生部《保健食品功能学评价程序和检验方法》修订项目的通知中抗突变部分,将小鼠随机分为9组(受试物3个剂量各2组,CP2个剂量各1组,阴性对照1组),每组雌雄各5只,每隔4d称体重一次,以调整给药量并观察动物状况｡受试物剂量分别为6200mg/kg､3100mg/kg和620mg/kg,用蒸馏水配成所需浓度的混悬液,按0.4ml/10g灌胃｡阴性对照组灌以等体积蒸馏水｡每天给药一次,连续30d｡试验第30d受试物组和阳性对照组经口分别一次性给予环磷酰胺,剂量分别为40mg/kg和50mg/kg,1h后再给予受试物｡末次给药24h后处死动物,处死前4h给予秋水仙素｡动物处死后取骨髓按常规制作染色体标本,油镜下观察细胞染色体畸变率｡1.6统计学处理用SPSSforwindows8.0进行t检验和相关分析,抗突变试验先经组内雌雄间显著性检验,确定无显著性差异后,再合并进行组间比较分析｡2结果2.1大鼠致畸胎试验灵芝孢子粉剂量为4286mg/kg､2143mg/kg､428.6mg/kg时,对孕鼠体重､胚胎早期发育､胚胎生长发育､以及胎鼠的骨胳发育和内脏器官发育等指标的影响,与阴性对照组比较差别均无显著性(P0.05),阳性组与阴性组比较差别则有显著性(P0.05),见表1､2｡骨胳畸形检查时,各实验组与阴性对照组均未发现明显骨胳畸形｡各表1.萌动激活赤灵芝孢子粉对早期胚胎和胎鼠发育水平的影响(±s)Table1.TheeffectofGanodermasporeonthedevelopmentoftheratembryoandfetusGroup/mg·kg-1No.ofpregnantdamsNo.ofsurvivingfetusesNo.offetusesabsorbedNo.oflivefetusesperlitterNo.oflutealbodyNo.ofembryosimplantedWeightoffetus/gLengthofbody/cmLengthoftail/cmNegative171764(7)10.4±16.310.83.91±0.363.77±0.121.32±0.36Positive145613(94)**4.0**13.5*10.72.76±0.47*3.11±0.40*1.19±0.09*Ganodermaspore428.6171745(6)10.216.210.63.98±0.383.79±0.191.33±0.052143.0171885(8)11.016.411.53.81±0.393.79±0.151.33±0.064286.0192023(7)10.616.011.03.96±0.503.79±0.211.33±0.07#Totalnumberofthefetus.*P0.05,**P0.01ascomparedwiththenegativecontrolgroup―184―期刊文献癌变·畸变·突变2002年7月第14卷第3期Carcinogenesis,TeratogenesisandMutagenesisVol14No3July,2002组均有胸骨缺失现象,主要为第5､6胸骨缺失,但实验组与阴性对照组比较无显著性差异(P0.05)｡阿司匹林阳性组则出现多种骨胳畸形,如肋骨融合､叉状肋､椎骨变形｡脏器畸形检查时,各实验组与阴性对照组均未发现异常,阿司匹林阳性组见有2例脑积水｡2.2细胞染色体畸变分析灵芝孢子粉剂量为10000mg/kg~400mg/kg,骨髓细胞CA率分别为0.6%~0.8%,与阴性对照组(0.6%)比较,差别无显著性意义(P0.05)｡2.3抗突变试验小鼠骨髓细胞染色体畸变多见染色单体裂隙､染色体断裂､断片､缺体､三射体,未见染色体裂隙､双微体｡各组细胞CA率见表2｡结果显示各剂量对40mg/kg或50mg/kgCP所诱发的骨髓细胞CA率均有明显的抑制作用,50mg/kgCP所诱发的细胞CA率抑制率在52.0%以上,并有剂量反应关系(相关系数=-0.997,=20.71-1.19)｡3讨论灵芝是中医药传统的扶正固本､滋补强壮的珍贵药用真菌,已广泛用于肿瘤､自身免疫性疾病的辅助治疗｡齐元富[8]在100例消化道肿瘤的化疗过程中用灵芝孢子粉作为辅助治疗,结果表明生活质量､体重､免疫､白细胞总数等指标均有明显改善｡魏凌珍和杨显昊[4,5]分别用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析和小鼠骨髓细胞微核试验检测了灵芝孢子粉的抗突变性,结果显示,灵芝孢子粉对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓细胞染色体畸变率均有明显抑制作用｡本试验结果表明,萌动激活赤灵芝孢子粉同样有明显抑制染色体损伤作用,抑制率在34.1%~67.8%,并存在剂量反应关系,与魏和杨的结果一致,提示萌动激活赤灵芝孢子粉对染色体损伤有一定的拮抗或保护作用｡在本试验条件下,未见萌动激活表赤灵芝孢子粉的致突变和致畸