虎杖中蒽醌类成分的提取分离鉴定及含量测定

中药化学典型实验多媒体课件湖南中医药大学药学院中药化学教研究室实验二虎杖中蒽醌类成分提取、分离、鉴定及含量测定一、教学要求l、掌握梯度pH萃取法分离酸性成分的方法。2、学习脂溶性成分和水溶性成分分离的方法。3、了解蒽醌类化合物的一般性质和鉴别反应。二、实验原理本实验是根据虎杖中的羟基蒽醌类化合物及二苯乙烯类成分均可溶于乙醇，故采用乙醇将它们提取出来。羟基蒽醌类苷元成分能溶于乙醚等弱亲脂性溶剂，采用乙醚使苷元和苷类成分分离，又利用羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用梯度pH萃取法进行分离。三、实验内容(一)虎杖中蒽醌苷元的提取与分离1、虎杖中蒽醌类成分的提取：2、蒽醌苷与苷元的分离：3、不同酸性蒽醌苷元的分离（梯度pH萃取法）流程图（二）鉴定1、颜色反应(l)、取以上a,b,c少量，分别置于三支试管中，加少量乙醇溶解后，加2％NaOH溶液数滴，观察颜色变化。（2）、取以上a,b,c少量，分别置于三支试管中，加少量乙醇溶解后，再滴加1%醋酸镁的乙醇溶液数滴，观察颜色变化。（3）、取以上a,b,c少量，分别置于三支试管中，加少量乙醇溶解后，再滴加1%三氯化铁的乙醇溶液数滴，观察颜色变化。2、薄层色谱(TLC)：吸附剂：硅胶G－CMCNa板，用前活化展开剂：石油醚—乙酸乙酯(2：1)样品：a,b,c乙醇液，大黄素标准品显色：①先置可见光下观察色斑，后紫外灯下观察荧光斑点②再用2%NaOH喷洒显色结果及计算比移值（三）含量测定虎杖中游离蒽醌的测定1.标准曲线的制备称取1,8-二羟基蒽醌25mg置于200ml容量瓶中，乙醚溶解并定容，取此溶液0.05~5.00ml，分别置于25ml容量瓶中，水浴上挥去乙醚，加5%氢氧化铝-2%氢氧化铵混合碱液至刻度，在490nm测定光密度，绘制标准曲线。2.样品测定取生药粉末（过40目）0.2g置于索氏提取器中，氯仿回流提取至无色，将氯仿液置于分液漏斗中，以5%氢氧化铝-2%氢氧化铵混合碱分次提取至无色，合并碱液，用少量氯仿洗涤，碱液调整至一定体积，碱液若不澄清，垂熔漏斗过滤，滤液在沸水浴中加热4分钟，用冷水冷却至室温，30分钟后在490nm比色，由标准曲线计算含量。四、实验讨论及注意事项1.常压蒸馏回收溶剂之前，应该加入沸石，以免暴沸。2.什么是梯度pH萃取法，适用于哪些物质的分离？试解释本次试验中pH萃取法应该注意哪些事项？3.两相萃取时，不可猛力振摇，只能轻轻旋转摇动，以免造成严重乳化现象而影响分层。如果出现乳化现象，如何破除？4.TLC鉴定a,b,c时，解释三者相对比移值的大小关系？