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1血液成分的制备第一节成分输血概述成分输血是用物理的或化学的方法把全血分离制备成各种较浓和较纯的制品以供临床输用。血液成分包括血细胞成分和血浆成分等。血细胞成分有红细胞、白细胞、血小板；血浆成分有白蛋白、免疫球蛋白以及其他凝血因子。本章主要叙述用物理方法根据血细胞在血液中比重不同制备的各种血液成分，包括红细胞、白细胞、血小板、血浆和冷沉淀等类制品。随着科学的发展和技术的进步，血液成分制备方法目前可分为两种，一种为手工制备；另一种是用血细胞分离机从单一献血者采集高度浓缩的某种成分，而将其他成分回输给献血者。成分输血之所以能迅速发展，在于较全血输注有很多的优越性。第一，治疗效果显著。成分输血的原则是确定患者缺什么成分补充什么成分，将全血中的某种成分分离、纯化得到高浓度、便于保存和运输的血液制品，把多个献血者的同一种血液成分混合成为有效的治疗剂量，给缺乏这种血液成分的患者输注，可以得到很好的治疗效果。红细胞制剂的种类及制备红细胞是血液的主要成分之一，具有重要的运输氧气和二氧化碳的生理功能。临床上需要输血的患者大约80%以上需补充红细胞。红细胞制品的种类很多，国内外常用的制品包括悬浮红细胞、浓缩红细胞、悬浮少白细胞红细胞、浓缩少白细胞红细胞、洗涤红细胞、年轻红细胞、冷冻解冻去甘油红细胞等。分离各种不同的血液成分依据全2血中红细胞、血小板和血浆的比重不同（分别为1.08~1.09、1.03~1.04和1.027），利用重力离心法分离血液成分，多采用大容量冷冻离心机。把全血采集于塑料袋中，于离心筒内用柔软的塑料片平衡离心筒，对称位放于离心机内，根据所需分离成分选择不同的离心力。通过相对离心力(g)和离心机半径(cm)(从离心机中轴点到离心筒内底部的距离)换算出每分钟离心转数。离心机的每分钟转数，离心时间直接影响各种成分的分离效果，必须定期给予校正。一、悬浮红细胞悬浮红细胞是目前国内外临床应用最广泛的一种红细胞制品，用离心的方法分离出全血中大部分（90%）血浆后，加入各种晶体盐红细胞保存液。目前国内大部分血袋厂主要生产ACD-B、CPD、CPDA-1等全血保养液，根据全血保养液的种类给出的红细胞添加液种类有MAP、SAGM、CPD-1、AS-1、AS-3、AS-5。MAP红细胞添加液对应的全血抗凝剂为ACD-B；SAGM红细胞添加液对应的全血抗凝剂为CPD。（一）制备方法1、采集血液的容器为塑料袋，我国每次采血1U（200ml全血）或2U（400ml全血），一般采集于三联袋或四联袋中，主袋内灌注抗凝剂枸橼酸盐-葡萄糖（ACD）或枸橼酸盐-磷酸盐-葡萄糖（CPD），末袋内灌注红细胞保存液MAP、SAGM。2、采血后的多联袋在大容量冷冻离心机内离心，离心力一般为3600×g温度控制在4±2℃，离心10分钟。33、轻轻取出离心后的血袋悬挂分离支架上或放于分浆夹内，将上层不含血细胞的血浆分入空的转移袋内，注意不可把血细胞分入血浆内。4、把多联袋末代中的保存液加入主袋浓缩红细胞内，使红细胞与保存液充分混匀，血细胞比容为0.5～0.65。5、用高效热合机切断塑料袋间的连接，封闭红细胞悬液袋上的所有管道，制成悬浮红细胞。以上操作一般在环境洁净的房间内即可进行，因为多联袋为密闭无菌、无热源系统。（二）悬浮红细胞的特点这种类型的红细胞是含有全血中全部的红细胞、一定量的白细胞、血小板、少量血浆和保存液的混悬液，具有补充红细胞的作用。保存于4±2℃，在含有腺嘌呤的保存液中保存的红细胞保存期为35天，另外因该制品含有一定量白细胞，长期输用的患者有可能发生非溶血性发热反应。二、浓缩红细胞浓缩红细胞可以在全血有效保存期内任何时间分离出部分血浆制备而成，一般推荐用三联袋采集的全血制备浓缩红细胞。(一)制备方法1、用三联袋采集1U或2U全血于主袋内。2、将全血在4±2℃离心，离心力3600×g，离心10分钟，沉淀红细胞。3、取出离心后全血，将部分血浆分入空的转移袋。44、用热合机切断塑料袋间的连接管，制备成浓缩红细胞。（二）、浓缩红细胞的特点浓缩红细胞含有全血中全部红细胞、白细胞、大部分血小板和部分血浆，其血细胞比容为70%±5%，浓缩红细胞于4±2℃保存，保存期与全血相同，其他特点与悬浮红细胞相同。三、悬浮少白细胞红细胞有反复输血史或妊娠史的患者，再次输血时，有的会出现严重的非溶血性发热反应（NHFTR）。经研究证实，大多数患者因输血或受孕，体内产生白细胞抗体，这些抗体大部分属于人类白细胞抗原（HLA）系统特同种抗体，当再度输入含有白细胞的全血或其他血液成分时，有可能产生免疫性发热输血反应各种血液成分中含的白细胞数量不同，减除全血或血液制品中的白细胞是安全输血的一种措施，由此产生了多种制备少白细胞制品的方法，以下介绍减除红细胞中白细胞的方法。（一）悬浮少白细胞红细胞的制备方法从全血中减除白细胞的方法很多，其效果依据方法不同而异，但目前应用的任何一种方法都不可能把白细胞全部去除掉，一般认为减除后的白细胞至5×108/L，可避免因白细胞抗体所致NHFTR。白细胞降至5×106/L可以预防HLA抗体所致的同种免疫与白细胞携带病毒相关疾病的传播。目前全国各血站多使用滤器过滤法制备悬浮少白细胞红细胞。1、将检查无破漏、识别条码齐全的四联袋轻轻混匀，然后挂到滤白5低温工作柜内，检查、关闭滤器旁路夹，打开折通管，让血液缓缓通过白细胞过滤器，流入转移袋内。2、注意观察，调节滴速，采血当日过滤时间为15-30分钟/400ml，采血后次日过滤时间为7-12分钟/400ml，过快容易出现白细胞去除效果欠佳和溶血现象发生。3、过滤完毕后，将转移袋的气体通过旁路排回原血袋，关闭旁路夹子，促使过滤器内储存的血液充分流出。4、将流空的原血袋热合后废弃，流入转移袋的血液即为少白细胞全血。将少白细胞全血三联袋选择离心条件，对血液进行离心。5、取出离心后少白全血，将血浆全部分入空转移袋，把红细胞保存液添加到浓缩少白细胞红细胞内，用热合机热合切断塑料袋间的连接管，即为悬浮少白细胞红细胞。（二）悬浮少白细胞红细胞的特点目前各血站使用的滤器具有较高的减除白细胞效果，白细胞去除率＞99%，红细胞回收率＞90%，一般可使白细胞降至1.0×106/L～1.0×105/L。这种制品可以避免NHFTR及HLA同种免疫的发生，是最为有效的方法。由于血液在采集后2～6℃冷藏保存24小时后，部分白细胞已失去活性裂解和死亡，如果24小时后再行滤出，那么白细胞的基质和传播疾病的病毒已无法滤出，难以避免传播疾病和输血不良反应的发生，早滤除不仅除掉白细胞抗原，还可以避免白细胞保存期间产生代谢产物的堆积，例如：IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α等白细胞介素对血制品的污染，所以白细胞滤除的最佳时机是采血后、保存前，滤除率要＞99.9%。四洗涤红细胞6一般用生理盐水反复洗涤，不仅降低白细胞和血小板，而且使血浆蛋白的含量下降，是一种减除白细胞与血浆蛋白的良好方法。(一)制备方法1.封闭式四联盐水袋洗涤法四联盐水袋为3个容积为350～400ml单袋用塑料管道相连的密闭无菌、无热原系统。每袋内装有200ml注射用生理盐水。4个袋子之间用塑料夹子夹住，彼此不相连。(1)保存期内的悬浮少白红细胞、悬浮红细胞、浓缩红细胞、浓缩少白红细胞、去白全血或全血均可以用作洗涤红细胞的原料细胞，一般要求全血分出血浆，其他血液成分直接添加盐水即可。(2)将四联袋盐水袋与红细胞袋用无菌接管机连接，把袋内200ml盐水加入红细胞袋内，充分混匀。(3)平衡后，对称放入离心机内，在4℃±2℃以2900×g的离心力离心5分钟。(4)离心后将装有血液的血袋悬挂于支架上或分浆夹上，把上清和白膜分入空袋内。热合切断与废液相连的塑料管，弃去废液袋。(5)重复（2）（3）（4）步骤，依次洗涤红细胞3次。(6)洗涤完毕加入盐水充分混匀，1单位成品净重125g±10%。2单位成品净重250g±10%。2.开放式洗涤法若无四联盐水袋装置，可以用普通医用生理盐水，在百级超净台内连接洗涤。(1)同封闭式四联盐水袋洗涤法中(1)的要求。(2)在超净台上用无菌操作将生理盐水加入被洗涤的红细胞袋内，混匀。(3)在4℃±2℃以2908×g的离心力离心5分钟。7(4)在超净台上将上清液及白膜分入废液袋中，再加入生理盐水并混匀。(5)在4℃±2℃以2900×g的离心力离心5分钟。(6)如此重复(4)(5)步骤常规反复洗涤3次，最后一次分出上清与白膜后，在洗涤红细胞制品中加入生理盐水充分混匀。1单位成品净重125g±10%。2单位成品净重250g±10%。3.机器洗涤法国外普遍应用机器洗涤红细胞，洗涤红细胞的机型很多，例如细胞处理机等。洗涤效果优于手工洗涤，但价格昂贵，国内目前使用甚少。(二)洗涤红细胞的特点一般手工洗涤红细胞可以去除红细胞中80%～90%的白细胞和98%以上的血浆蛋白。使用机器洗涤后的红细胞中，白细胞减至5×108/L以下，几乎不含任何血浆蛋白。该制品不仅可降低白细胞引起的NHFTR反应，也可以减少或避免血浆蛋白所致的过敏反应，适用于自身免疫性溶血性贫血和阵发性睡眠性血红蛋白尿需输血的患者及时对血浆蛋白、白细胞和血小板产生抗体的患者。无论那种方法洗涤后的红细胞均应在24小时内输注，因为在洗涤过程中破坏了原血袋的封闭系统，有操作污染的可能。五、冰冻解冻去甘油红细胞红细胞低温保存法为英国Smith首先发明。1953年Mollison使用冻融红细胞首次成功。同期，Tullis用Cohn分离机洗涤冻融后红细胞，以后逐渐推广应用，人们逐步认识到冰冻红细胞是长期保存红细胞的一种理想的方法。红细胞代谢速度取决于保存温度，若将保存温度降至使红细胞代谢率达到几乎停止时，红细胞代谢耗能最少，从8而可避免代谢毒性产物的积累，以达到延长红细胞保存期的目的。但是血液在零度以下会结冰，在细胞的内外形成冰晶，破坏细胞结构，使细胞外液渗透压升高，促进细胞脱水，最终引起细胞的解体死亡。所以必须在冰冻过程中加防冻剂，一般常用的防冻剂分为两种，一是细胞内防冻剂，如甘油、二甲基亚砜(DMSO),二是细胞外液防冻剂，如羟乙基淀粉(HES).冰冻红细胞常用防冻剂为甘油。（一）制备方法1．浓缩红细胞的制备将贮存6天以内的悬浮红细胞、悬浮少白红细胞、少白全血、全血经3600（g）离心10分钟，分离出血浆、红细胞保存液等上清，其余部分为浓缩红细胞。2．根据甘油化后红细胞中甘油的最终浓度不同分为高浓度甘油慢冻法和低浓度甘油超速冷冻法。高浓度甘油慢冻法甘油的最终浓度40%，红细胞冰冻及保存温度-80℃。低浓度甘油快冻法甘油的最终浓度20%左右，将红细胞快速冰冻并保存在-196℃液氮中。现国内多数血站采用的是高浓度甘油慢冻法，下面介绍高浓度甘油慢冻法制备冰冻解冻去甘油红细胞的制备方法（1）甘油化向1U浓缩红细胞内加入57.1%甘油溶液160毫升，加甘油速度要先慢后快，再15~20分钟内加完，加液同时要不断地振荡混匀，甘油化红细胞室温平衡半小时。然后2500（g）8分钟离心去上清。放-80℃冻存。（2）解冻：于输注前将贮存的冰冻红细胞从低温冰箱取出，放入37~40℃恒温水浴箱中缓慢摇动，融化到全部解冻。（3）洗涤脱甘油：先加9%的浓盐水80ml（15~20分钟加完），以每分钟10ml速度加入6%羟已基淀粉100ml，离心去上清；9再以每分钟10ml速度加入6%羟已基淀粉100ml，每分钟20ml的速度加入0.9%的NaCl，离心去上清；然后以每分钟40ml速度加入200ml0.9%NaCl，如此洗涤三遍。最后加入0.9%NaCl100ml制成红细胞悬液供临床输注。(二)冰冻解冻去甘油红细胞的特点：冰冻解冻去甘油红细胞最大优点是可以长期保存，一般保存期为10年。因此常用于自身输血和稀有血型红细胞的保存，可以解决稀有血型患者的抢救性输血，同时自身输血又可避免输血反应与输血相关疾病的传播。一般冰冻红细胞解冻洗涤后在4℃±2℃保存，24小时内输注。冰冻红细胞操作过程复杂，需要一定设备，制品的价格昂贵，所以推广使用受到一定限制。（