血球分析仪有关剖浅析

三分群血细胞计数仪有关问题浅析安岳县人民医院检验科谭伟1.关于概念问题三分类？三分群？2.关于计数原理电阻抗法—库尔特原理电阻大小与细胞体积大小成正比。血细胞相对于血球稀释液是不良导体，有一定的电阻，当通过电场中的微孔时产生一个电阻信号，其信号的频率代表细胞的多少，信号的大小代表细胞体积的大小。把一定大小的电信号加在一起代表一个细胞群，把所有的细胞群加在一起代表细胞总数。计数通道WBC通道：*小细胞群:30~90fl主要是淋巴细胞*中间细胞群:90~160fl有单核、嗜酸、嗜碱细胞*大细胞群：160fl主要是中性粒细胞*血红蛋白：参考方法：HiCN法，540um比色测环保方法:十二烷基硫酸钠法（SLS-Hb)，540um比色，以HiCN法定值全血为校准物。现在多用此法。红细胞通道：2~30fl为血小板30fl为红细胞注意：•RBC、PLT是它真实体积，因为血球稀释液•是等渗的；•WBC的体积，是加了溶血后漏出了细胞液留下“膜包核”和内含颗粒的体积，并非真实体积；•所以，L核小，颗粒少，故体积小，位于直方图最前面的小细胸群区；N核多，颗粒多体积大，位于直方图最后面的大细胞区；E、B和M核少，内含颗粒少，故体积较N小，位于大细胞群之前的中间细胞区。3.关于直方图直方图—表示细胞数量和细胞体积及其相互比例关系的曲线图。直方图解释：在Y轴上的高低表示细胞的多少；在X轴上离O点的远近表示细胞体积的大小。直方图解释：•WBC：正常；淋巴细胞↑；中性粒细胞↑；中间细胞↑（E、B、M、幼稚细胞）。•RBC：正常；MCV↓；MCV↑；双峰。•PLT：正常；大PLT、PLT聚集和小红细胞4.有关细胞参数红细胞参数：MCVMCHMCHCRDW-CV或RDW-SD*MCV：平均RBC体积每个RBC的平均体积*MCH：平均RBC血红蛋白量每个RBC所含Hb的平均量*MCHC：平均RBC血红蛋白浓度每升血液中平均所含Hb的浓度13红细胞参数*RDW-CV/RDW-SD：红细胞体积分希宽度反映RBC体积差程度的指标临床意义：贫血的形态学分类贫血类型MCVMCHMCHC常见疾病正常细胞性NNN急性失血、溶血、再障、白血病大细胞性↑↑N叶酸、维B12缺乏小细胞低色素性↓↓N慢性炎症、尿毒症单纯小细胞性↓↓↓铁、维B2缺乏、珠蛋白肽链合成障碍类别MCVRDW正常人NN缺铁性贫血↓↑巨幼红细胞贫血↑↑溶血性贫血↑↑铁粒幼细胞贫血N↑再障NN单纯小细胞贫血↓N缺铁性贫血的诊断和鉴别诊断血小板参数：MPV：平均血小板体积MDW：血小板体积分希宽度L-LCR：大血小板比率上述三参数都与血小板体积有关，说明这些数据是有一定临床意义的。一般认为体积大的血小板是年轻血小板，年轻血小板功能要强大一些这可解释临床上有的血小板（MPV↑、L-LCR↑）少，为什么没有自发性出血的原因。5.关于标本与抗凝剂抗凝剂：国际公认EDTAK2抗凝剂：血=1：9标本：最好为静脉血其次为末梢血6.关于分析模式*全血模式最好；*预稀释模式尽量少用或不用；全血模式：一是可以避免加样、加稀释液不准确带来的稀释误差；二是可以避免稀释液久露于空气中所造成的液体蒸发和尖埃污染。分类、计数的局限性实质上是阻抗法原理的局限性☆有一定电阻的成份就认为是细胞；☆电阻越大，细胞体积越大。1）血小板计数正确性不高：不能区分尖埃与血小板细胞碎片与血小板大血小板与小红细胞聚集血小板与小红细胞7.三分群血球计数仪的局限性☆不能正确区分各种变异细胞如病毒感冒、病毒性肝炎、传染性单核细胞增多症等时的变异淋巴细胞等。☆中间细胞群特指性不强，不能区分三种细胞（嗜酸、嗜碱和单核细胞）中的哪一种细胞的增高或降低2）分类计数准确性不够3）决方解案☆五分类血球仪复检☆人工镜检血球仪是过筛器，三分群仪更是这样，要得确结果必须复查。目前，专家们对三分群血球仪分类计数结果的处置意见是：当所有参数完全正常时，可以不复检直接发报告；当其中有一项或几项不正常时，必须复检（五分类仪或人工）3）解决方案—复检☆国际复检标准41条☆各医院根据自己的实际情况制订了不同的复检标准☆我院以国际41条为依据，制定了自己的复检21条标准复检的绝对条件•报警提示•未成熟细胞•原始细胞•有核红细胞•仪器分群结果异常•确认或疑为血液恶性肿瘤者复检的可调节条件•血细胞计数超出参考值范围8.关于异常标本及处理1）凝固标本不能或严重影响计数分类。处理：退回，重采。2）溶血标本（采集不当所致）影响红胞和血小板计数。处理：退回，重采。3）脂血标本•影响血红蛋白测定，使红蛋白升高；•红细胞压积升高，从而影响与此有关的MCV和MCHC的计算结果。4)冷凝集标本原因：寒冷凝集素增高，如原发性非典型肺炎等。表现：RBC↓，与HGb比例明显不符，WBC不受影响处理：将标本置37℃30分钟，立即计数。5）EDTA诱导的PLT聚集原因：EDTA诱导PLT膜抗原暴露，从而与血浆中相应抗体结合而聚集。发生率1‰左右。表现：PLT↓↓、镜下PLT聚集处理：＊标本不加抗凝剂直接上机测定；＊用等量等渗盐水置换血浆后测定；＊用非EDTA抗凝剂采集标本复检。成熟红细胞是呈粉红色，中央稍浅，大小近似相等无核的细胞8.关于异常标本及处理8.关于异常标本及处理6）有核红细胞原因：正常情况下无（有核红），有核红常见于各类白血病、骨髓纤维化、急性失血、急性溶血等疾病表现：溶解后的有核红其核多位于小细胞区，使WBC计数↑处理：修正WBC计数。WBC（修正数）=WBC（原计数）÷（100+有核红）7）白细胞增多性白血病正常情况下RBC：WBC=750：1，WBC对RBC计数的影响可以忽略不计；但WBC↑到200×109/L以上时,对RBC计数应加以修正。RBC×109/L（修正数）=RBC（原计数）-WBC÷10009.关于性能评价血细胞分析仪的性能评估包括：背景计数、携带污染、批内精密度、批间精密度、准确度及线性。1）背景计数方法：每天开机时仪器自动检测并记录背景计数结果。判断标准：厂家规定背景计数标准或可溯源文件的相应标准。合格判断：所有项目应不高于厂家规定的背景计数标准，视为合格。2）携带污染方法：在仪器稳定的状态下连续测定1份高值标本，3次记录为H1、H2、H3；立即连续测定1份低值标本3次，记录为L1、L2、L3。计算WBC、RBC、HGB、HCT、PLT各项目携带污染率：=（L1-L3）÷（H3-L3）×100%判断标准：厂家规定携带污染率标准或可溯源文件的相应标准合格判断：所有项目应不高于厂家或可溯源文件规定的携带污染率标准，视为合格。3）批内精密度方法：取高中低值标本各1份，分别在仪器各测20次，计算出均数、SD和CV值。判断标准：厂家规定的精密度或可溯源文件的相应标准合格判断：所有项目应不高于厂家或可溯源文件规定的批内精密度标准，。方法：取2个批号质控物每天在仪器上测定1次，连续20天，计算出均数、SD和CV值。判断标准：厂家规定的批间精密度标准或可溯源文件的相应标准合格判断：所有项目应不高于厂家或可溯源文件规定的批间精密度标准4)批间精密度5）准确度方法：以相应仪器的校准品的定值为靶值，将校准品在手动通道连续测定6次，取后5次计算。计算偏差（%）=（仪器测定值-靶值）÷靶值×100。判断标准：厂家规定的标准或可溯源文件的相应标准。合格判断：所有项目应不高于厂家或可溯源文件规定的准确度标准。6）线性方法：标本要求WBC25×109/L，RBC6.0×109/L,HGB170g/L,PLT300×109/L。选取符合上述要求的标本，分别按1、2、4、8、16、32、64及128倍稀释，每个稀释度重复测定3次，计算均数。将实测值与理论值作比较，计算y=aX+b,验证线性范围。判断标准：所涉及项目线性相关系数≥0.97.10.关于检定及校准1）校准物1.1）校准物来源1.1.1）来自仪器的配套校准物。1.1.2）来自新鲜人血，其定值要求直接或间接溯源到国际标准。1.2）新鲜血作为校准物的定值1.2.1）直接溯源到国际标准的定值方法：可用血细胞分析仪的参考方法定值，但要建立参考方法的难度较大，在临床实验室难以实施。1.2.2）间接溯到国际标准的定值方法：取新鲜血用二级标准检测系统或规范的检测系统对其定值，用定值的新鲜血作为常规校准物。要求在8小时内（温度18~25℃）完成及校准。1.2.3）二级标准检测系统：直接溯源到参考方法；具备较完善的质量保证措施；与国外较权威的参考实验室定期进行比对的检测系统。1.2.4）规范的检测系统：使用配套试剂；用配套校准物定期进行校准；规范的开展室内质量控制；参加室间质量评价成绩优良；人员经过培训。1）校准物使用中国药品监督管理局注册登记的国际公认质量可靠检测系统的实验室，可使用制造商规定的配套的校准物，也可以使用新鲜血作为校准物。对于使用无配套校准物检测系统的实验室，必须使用新鲜血进行仪器校准。2）仪器的准备先用清洁剂清洁仪器内部各通道，检测室处理30分钟。确认仪器的背景值、精密度及携带污染在仪器说明书规定的范围内时，才能进行校准，否则须查找原因，必要时请维修人员检修。3）校准物的准备3.1)配套校准物3.1.1)将校准物从冰箱（2~8℃）取出，要求在室温条件下放置15分钟，使其温度恢复至室温。3.1.2)检查校准物是否在有效内，是否有变质或污染。3.1.3)轻轻地将校准物反复颠倒混匀，并置于两手掌间慢慢搓动，使校准物充分混匀。3.1.4)打开瓶塞时，应垫上沙布或软纸，使溅出的血液被吸收。3.1.5)将两瓶校准物合在一起，混匀后再分装于两瓶内.3.2）使用新鲜血作为校准物3.2.1用EDTA-2K为抗凝剂的真空采血管取建康人新鲜血10ml，每ml需用抗凝剂量为1.5~2.2mg,要求WBC、RBC、HGB、HCT和PLT的检测结果在参考值范围内。将混匀后分装3管，每管3ml。3.2.2）取其中1管，用二级标准检测系统或规范操作的检测系统连续检测11次，计算第2~11次检测结果的均，以此均值作为新鲜血的定值。3.2.3）其他2管血作为定值的校准物，用于仪器的校准。4）用校准物进行检测4.1）取1瓶校准物连续测定11次，第1次不用，以防携带污染。4.1.2）仪器若无自动校准功能，则将2~11次的各项检测结果用手工记录在工作表格中，计算出均值，均数的小数保留位数较日常报告结果多一位。有自动校准功能的仪器可直接得出均值。5）用上述均数与校准物的定值比较判断是否需要调整离仪器5.1）计算各参数的均数与定值相差的百分数（不计正负），计算公式：（均数-定值）÷定值×100%，计算结果与表1中的标准数据比较。5.2）各参数均数与定值的差异全部等于或小于表中第一列数值时，仪器不需进行调整，记录检测数据即可；若各参数均值与定值的差异大于表中的第二列数值时，需请维修人员查明原因并进行处理；若各参数均数与定值的差异在表中第一列与第二列数值之间时，需对仪器进行调整，调整方法可按说明书要求进行。若仪器无自动校准功能，则将定值除以所测均值，求出校准系数，将仪器原来的系数乘以校准系数即为校准后的系数，将校准后的系数输入仪器更换原来的系数。6)校准结果的验证将2管未用的校准物充分混匀，在仪器上重复检测11次，去除第一次结果，计算2～11次检测结果，再次与表中的数值对照。如各参数的差异全部等于或小于第一列数值，证明校准合格中。如达不到要求，须请维修人员检修。表1仪器校准的判别标准百分数差异参数一列二列WBC1.5%10%RBC1.0%10%HGB1.0%10%HCT2.0%10%MCV1.0%10%PLT3.0%15%7）需对仪器校准的几种情况7.1）血球仪在投入使用之前；7.2）维修换部件后，可能对检测结果有影；7.3）对于开展常规检测的实验室，要求至少半年校准一次；7.4）对其它有关设备的校准8）注意事项8.1）校准时间不能太长，不超过8小时。8.2）若校准时间过长，可将新鲜全血校准物放置4℃冰箱保存，但血小板不准确，应引起注意。8.3）室内质控连续失控、室间质评离靶，在排除质控