第十五章螺旋体.

第十五章螺旋体第一节概述•螺旋体(Spirochaeta)是一类菌体细长、柔软、呈螺旋状弯曲、运动活泼的原核细胞微生物。•螺旋体广泛存在于水生环境，也有许多分布在人和动物体内。大部分营腐生生活，无致病性，只有一小部分可引起人和动物的疾病。一、形态与结构1、形态•螺旋体呈螺旋状圆柱形，具有多个完整的螺旋。其大小相差极为悬殊，长5～250μm，宽0.1～3μm，有的甚至能通过除菌滤器。•螺旋体上螺旋数目、两螺旋间的距离及回旋角度各不相同，在分类上可作为一项重要指标。螺旋体螺旋体螺旋体2、结构中心为原生质柱。外有轴丝缠绕。最外层是由细胞壁和粘液层构成的外鞘。含RNA和DNA2种核酸。螺旋体通过轴丝运动。螺旋体结构图二、染色特性革兰氏染色：呈阴性，但由于着色困难，一般不用。姬姆萨染色：可使菌体染成红色或蓝色，染成蓝色者一般多为腐生性螺旋体。镀银染色法：为常用染色法，其特点是使银盐沉淀粘附于螺旋体上，使之变粗而显出黑褐色。印度墨汁或刚果红负染：染背景，而螺旋体透明无色，结果在兰或红色的背景上，衬托透明的螺旋体，反差明显。三、培养•多数螺旋体需厌氧培养，较难培养。但有些种属的螺旋体培养并不难，可需氧生长。•短螺旋体、钩端螺旋体以及个别致病性密螺旋体与疏螺旋体可采用含血液、腹水或其他特殊成分的培养基培养。•其余螺旋体迄今尚不能用人工培养基培养，但可用易感动物来培养和保种。四、分类钩端螺旋体属纤细螺旋体属特纳螺旋体属钩端螺旋体科螺旋体属脊螺旋体属密螺旋体属疏螺旋体属螺旋体科短螺旋体属短螺旋体科短螺纹科短螺纹科螺旋体目第二节疏螺旋体属本属细菌呈螺旋状，菌体上有3～10个不规则的疏松螺旋。致人和动物疾病的主要螺旋体伯氏疏螺旋体回归热疏螺旋体鹅疏螺旋体色勒疏螺旋体钝缘蜱疏螺旋体伯氏疏螺旋体•伯氏疏螺旋体是莱姆病的病原体，由蜱传播给人类。主要感染人和犬，此外牛、马、猫等也可感染。一、主要特性•菌体细长，20～30μm，有4～20个大而宽松的螺旋。•运动活泼。•吉姆萨染色淡紫色，镀银染色棕褐色。伯氏疏螺旋体二、致病性•本菌经蜱传播，可致人、犬、牛和马的关节炎。•病人出现的第一个症状是被蜱叮咬的部位出现圆形红斑，随后红斑逐渐扩大，继而扩展到关节，导致关节肿胀、疼痛。•动物看不到红斑，临床可见关节肿胀、跛行。三、微生物学诊断1、镜检•取被蜱叮咬部位附近的皮肤、患病关节的关节液制片，镜检。2、血清学检查•ELISA可用于检测抗体。3、PCR技术•可用于检测病料中的螺旋体。第三节钩端螺旋体属(Leptospira)•又称细螺旋体属，成员是一群菌体纤细、螺旋致密，一端或两端弯曲呈钩状的螺旋体，故称钩端螺旋体，简称钩体。•大多数钩体无致病性，部分为致病性螺旋体，可引起人和动物的钩体病（细螺旋体病）。一、主要生物学特性（一）形态与染色•菌体纤细，一端或两端弯曲呈钩状。长6～20μm，螺旋细密而规则，至少有18个。能活泼运动，由于运动常使菌体呈8字、丁字或网球拍等形状或C、S、O等字母形，且此种形状可随时消失。•镀银染色法染色，只能看到棕色或黑色的弯曲钩状体，看不到螺旋。钩端螺旋体（二）生长要求与培养特性•需氧，营养要求不高，在含动物血清和蛋白胨的柯氏(Korthof)培养基生长良好。该培养基含有10%新鲜灭活兔血清。兔血清能促进钩体生长。•钩体生长缓慢,接种后3～4天开始生长，接种后7～14天生长的最好。生长特性液体培养基•于靠近液面1㎝处生长最旺盛，呈半透明、云雾状浑浊，以后液体渐变成透明，管底出现沉淀。固体培养基•形成无色、透明、边缘整齐或不整齐、平贴于琼脂表面的菲薄菌落，大者4～5mm，小者0.5～1.0mm。（三）抵抗力•钩体对环境因素的抵抗力较强，湿土和水中可存活数月之久。故该病主要经污水传播。•对热、酸或碱敏感，56℃10min，60℃10s即可将其致死。•常用浓度的各种消毒剂在10～30min内可将其灭活。•对青霉素、金霉素、四环素等抗生素敏感，但对砷制剂有抗性。（四）抗原1、型特异性抗原成分为蛋白质多糖复合物，具有型特异性，是钩体分型的物质基础。2、群特异性抗原系类脂多糖复合物，可刺激机体产生补体结合抗体，具有群特异性，可作为分群的依据及补体结合反应抗原，用于检测动物血清中相应的抗体。（五）分类本属有2个种问号钩端螺旋体（L.interrogans）双曲钩端螺旋体(L.biflera)前者包括所有寄生性和致病性血清型，后者包括所有腐生性非致病性血清型。抗原分类法•根据钩体群特异性抗原应用显微凝集溶解试验，可将其分为若干血清群，各群内可根据其表面抗原的不同，再用型因子血清作显微凝集试验，将每群分为若干血清型。•目前全世界已发现的致病性钩体有25个血清群，至少200个不同的血清型。对动物致病的主要钩端螺旋体血清型宿主及相关疾病凯氏钩端螺旋体马流产布拉迪斯发钩端螺旋体马流产、猪流产、不育波摩纳钩端螺旋体猪、牛、马流产犬钩端螺旋体犬肾及全身疾病，猪全身疾病、流产黄疸出血钩端螺旋体犬败血症，牛、猪流产哈德佳钩端螺旋体牛流产、不育流感伤寒钩端螺旋体犬肾及全身疾病，二、致病性（一）毒力因子1、黏附物质•为细胞外基质成分，如纤连蛋白和胶原等。2、溶血素•是一种鞘磷脂酶C，能溶解动物红细胞。使动物发生贫血、肝肿大、坏死、出血，伴有黄疽和血尿等病征。3、内毒素样物质•为脂多糖样物质(LLS)，可致动物发热，引起炎症和坏死。4、细胞毒性因子•为蛋白毒素，存在于感染动物血浆内，它在血液中循环和蔓延时能造成组织损伤，对小鼠有致死作用。（二）感染途径及所致疾病•致病性钩体可感染50多种动物和人类，其中鼠类和猪是钩体的主要贮存宿主和传染来源。家畜中牛、羊对钩体最易感，其次为马、猪、犬、水牛和驴等，家禽的易感性较低。感染途径•钩体在家畜大多数呈隐性感染，在肾脏内长期繁殖，并随尿不断排出，污染土壤和水源等环境。人和家畜则通过直接或间接地接触这些污染源，通过损伤的皮肤、眼鼻粘膜、消化道粘膜而被感染。也可通过动物间相互咬伤、吸血昆虫的叮咬、交配或人工授精而感染。钩体病的临床表现急性病例•主要症状为发热、贫血、出血、黄疽、血红素尿及粘膜和皮肤坏死。亚急性病例•表现为肾炎、肝炎、脑膜炎及产后泌乳缺乏症慢性病例•表现虹膜睫状体炎、流产、死产及不孕。钩体病通常经历二个阶段菌血症(前期发热)阶段约持续7～8d菌尿期(后期无热)阶段持续2～3月或更久•在前期阶段，钩体大量出现于血、肝、肾和脑脊髓液中，而后期主要定位于肾内，并经尿排出体外。故检验钩体的病料必须根据病程适时采集。三、微生物学诊断（一）细菌学诊断1、病料发病7～8d内（发热期）可采集血、脑脊髓液、肝和肾；发病7～8d后（退热）可采集尿液，死后为肾。2、镜检肝、肾直接涂片；血、尿先离心，用沉淀物涂片。经改良镀银法染色后镜检，钩体呈深黑色或灰色。3、分离培养•接种柯氏培养基分离。病料中含钩体，常在培养7～10d后见培养基略呈混浊。对光轻摇试管时，便见上1／3的培养基内有云雾状生长物。此时挑取培养物作暗视野检查，可见多量的典型钩体。4、动物试验•病料经腹腔或皮下接种幼龄豚鼠、地鼠或仔兔。强毒株常在3～5d引起发热、贫血、黄疸、血红素尿等症状。（二）血清学检查常用凝集溶解试验。此外，也可用补体结合试验、ELISA以及PCR技术等。四、免疫康复动物可获得较坚实的免疫力。注射疫苗，有良好的免疫预防效果。初次免疫2d后，应进行再次接种，以后可每年接种1次。所用疫苗应与引起发病的菌株同型，或使用多价疫苗。母牛免疫接种后产下的犊牛，可获得较高的母源抗体，在出生后数月内不受感染。故这些犊牛须在3月龄后才能接种疫苗。第四节其他致病性螺旋体名称所致疾病伯氏疏螺旋体莱姆病（人、犬、牛、马关节炎）回归热螺旋体人回归热鹅疏螺旋体鸡、鸭、鹅、火鸡疏螺旋体病苍白密螺旋体人梅毒兔梅毒密螺旋体兔梅毒勃兰登堡密螺旋体牛趾间皮炎（毛蹄疣）