红细胞计数的注意事项

红细胞计数的注意事项：（1）计数和计算：在2ml红细胞稀释液中加血10μl，混匀后，充入计数池，静置3～5min后，在高倍镜下，计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细胞数。计数时需遵循一定方向逐格进行，以免重复或遗漏，对压线细胞采用数左不数右、数上不数下的原则。（2）清洁：应保证计数板和盖玻片清洁。操作时，勿接触计数板表面，以防污染。使用后，依次用95%乙醇、蒸馏水棉球、清洁绸布擦净.（3）充池：需一次完成充池，如充池过少、过多或有气泡、继续充液，应重新操作，充池后不能移动盖玻片。红细胞在计数池中若分布不均，每个中方格间相差超过20个应重新充池，两次红细胞计数相差不得超过5%.（4）计数板：改良牛鲍计数板每年要鉴定1次，以免影响计数结果的准确性。（5）白细胞影响：通常白细胞总数较少，仅相当于红细胞的1/500～1/1000，对结果影响很小，可以忽略不计。但白细胞过高者（WBC100×109/L），红细胞计数结果应进行校正。方法有两种：一是直接将患者红细胞数减去白细胞数，二是在高倍镜下观察勿将白细胞计入，白细胞体积常比红细胞略大，中央无凹陷，细胞核隐约可见，无黄绿色折光。（6）红细胞稀释液：传统稀释液（Hayem液）由NaCl（氯化钠，调节渗透压）、Na2S04·10H2O（结晶硫酸钠，提高比密防止细胞粘连）、HgCl2.（氯化高汞，防腐）和蒸馏水组成。枸橼酸钠稀释液由枸橼酸钠（抗凝和维持渗透压）、甲醛（防腐和固定红细胞）、氯化钠（调节渗透压）和蒸馏水组成。普通生理盐水或加1%甲醛生理盐水。瑞士染色的注意事项：（1）血涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。（2）冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，以防染料沉着在血涂片上。冲洗时间不能过久，以防脱色。如血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗。（3）染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。（4）瑞氏染色Ⅰ液由瑞氏染料、甲醇（AR级以上）和甘油组成，Ⅱ液为磷酸盐缓冲液（pH6.4～pH6.8）。血涂片的注意事项：（1）玻片的清洗：新玻片常有游离碱质,因此应用清洗液或10%盐酸浸泡24小时,然后再彻底清洗。用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20分钟,再用热水将肥皂和血膜洗去,用自来水反复冲洗,必要时再置95%乙醇中浸泡1小时,然后擦干或烤干备用。使用玻片时只能手持玻片边缘,切勿触及玻片表面;,以保持玻片清洁,干燥,中性、无油腻。（2）细胞染色对氢离子浓度十分敏感,在染色过程中玻片必须化学清洁,配制瑞氏染液必须用优质甲醇,稀释染液必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则各种细胞染色反应异常,致使细胞的识别困难,甚至造成错误。（3）一张良好的血片,要求厚薄适宜,头体尾分明,分布均匀,边缘整齐,两侧留有空隙。血片制好后最好立即固定染色,以免细胞溶解和发生退行性变。（4）血膜未干透,细胞尚未牢固附在玻片上,在染色过程中容易脱落,因此血膜必需充分干燥.（5）染色时间与染液浓度,室温高低,细胞多少有关.染液越淡,室温越低,细胞越多,所需染色时间越长或应适当增加染液量,因此染色时间应视具体情况而定.特别是更换新染料时必须经试染,摸索最佳染色条件.（6）染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净.（7）冲洗时应用流水将染液冲去.不能先倒掉染液,以免染料沉着于血片上.（8）染色过深可用甲醇或酒精适当脱色,最好不复染,必须复染时,可将染液先稀释好再复染.（9）染色时应注意保护血膜尾部细胞,不能划掉.因为体积较大细胞常在此处出现.白细胞计数的注意事项：（1）稀释液密封保存，防止污染，小试管、计数板、盖玻片均须清洁，以免杂质微粒等被误认为细胞。（2）采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。（3）稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，无不足，外溢和气泡，细胞分布均匀。（4）白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10%。（5）白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。（6）一些贫血患者血液中有核红细胞增多，会计数在白细胞总数之内，应校正。校正公式：白细胞校正数/L=M*（100/100+N）。（7）调整显微镜。