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产蛋白酶菌株的筛选级分离一、实验原理自能够产生胞外蛋白酶的菌株在牛奶平板上生长后，其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈，水解圈与菌落直径的比值，常被作为判断该菌株蛋白酶产生能力的初筛依据。将腐烂的大豆浸泡液中的细菌接种在含有酪素的培养基上进行培养。由于产蛋白酶菌株能在干酪素的培养基上形成无色透明圈，因此能将产蛋白菌株分离出来，分离出来的菌株经再次培养，就可获得纯种产蛋白酶的菌株。二、实验器材1.菌种：从大豆浸泡液中获得2.培养基:(1)PDA斜面培养基：马铃薯200g，蔗糖20g,琼脂20g,水1000ml.马铃薯去皮，切成块，煮沸半小时后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补水至1000ml，121℃灭菌30min备用。（2）干酪素琼脂培养基：干酪素4.0g，用20ml0.1mol/LNaOH溶液溶解后再加20g琼脂，加蒸馏水煮沸加水至1000ml121℃灭菌30min备用。3.试剂：无菌水。4.仪器：天平，电磁炉，烧杯，无菌试管，无菌培养皿，高压灭菌锅，锥形瓶，接种环，涂布棒，酒精灯，恒温培养箱。三、实验步骤1.将腐烂的大豆放入无菌水中浸泡，制成细菌悬浮液。2.用涂布棒蘸取菌液接种于PAD培养基中，26℃培养48h。3.倒置于酪素琼脂培养基平板上，37℃培养24h。4.挑取培养好的菌落接种于平板上，28℃培养48h。5.观察各菌落周围形成的透明圈的情况。6.选取透明圈较大的三个菌落分别接种在干酪素琼脂培养基上，28℃培养48h。7.观察受否为单菌落，若为单菌落且有透明圈，则为纯种产蛋白酶菌株。若有杂菌，则需要重复步骤6，直到培养出纯菌为止。参考文献[1]代玉梅.蛋白酶高产菌株的筛选鉴定及酶学性质研究[D].青岛:青岛大学,2008.[2]黄志强,林白雪,谢联辉.产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选与鉴定[J].福建农林大学学报:自然科学版,2006,35(4):416-420.