胰弹性蛋白酶的制备

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生物制药工艺学实验生物技术实验实验要求•实验2人一组,•穿工作服。•实验听从老师安排,注意仪器使用,安全。•不得缺席,旷课三次没有成绩。•实验结束洗涤,值日、检查安全。实验报告:•英文书写•内容:实验目的(英文)实验原理(英文)操作流程(英文)实验结果(英文)讨论(英文、中文或双语)实验成绩评分标准•平时实验20•+实验报告60•+设计实验20Experiment1:PreparationofElasticProteasefrompancreasandAnalysisofEnzymeActivity实验一:胰弹性蛋白酶的制备与活性分析Purpose•1.LearntheprincipleofPreparationofElasticProteasefrompancreas.•2.Mastertheanalysismethodofenzymeactivity.Frozenpancreas(75g)Activation24℃,24hremovethefat,cutintopiecesadd50mlHAc-buff,mashedPancreaticplasmaadd250mlHAc-buff,ph4.525℃stirfor1hours,FilterFiltrate40gResinAdsorption25℃stirfor1.5hours,WaterwashingResin(absorbprotein)add50ml1MNH4Cl-buff,ph9.0stirfor1h,adjustpH(5.2pH6.0),FilterEluateAdd3-time-volumncoldacetoneRoomtemperature20min,4000rpm×10minprecipitationAcetonewash2timesEtherwashonetime,VacuumdryingElastasepowderProceduresstandardcurveTubeNo012345Referencesubstancesolution(ml)02.04.06.08.010.0mixtureofboricacidbufferandphosphateacidbuffer(1:1)(ml)10.08.06.04.02.00A(495nm)value2:SamplepreparationTake3tubestooperateaccordingtothetablebelow:TubeNo012Congoredelastin(mg)1.233PH8.8Boricacidbuffers(ml)544Awaitmeasuringenzymeliquid(ml)-1137℃ishydrolyzedfor20minutes'(Theintermittenceisstirred20ormoretimes)PH6.6Phosphoricacidbuffers(ml)555Takethesupernatantaftercentrifugation(3000rpm×10min)A(495nm)value制备工艺:活化剪去脂肪,切块加250mlHAc-buff,ph4.5冻胰脏(75克)-------------→-------------→胰浆-------------------------24℃,24h加50mlHAc-buff37℃搅拌1h,过滤40g树脂加50ml1MNH4Cl-buff,ph9.0滤液------------------------------树脂------------------------------------------------25℃搅拌2h,水洗涤搅拌1h,间隔测pH(5.2pH6.0),抽滤丙酮洗涤2次,洗脱液-----------------------------沉淀--------------------------------------------弹性酶粉加入2-3倍冷丙酮,乙醚洗1次,真空干燥•附:•树脂处理:取干AmoerliteCG50树脂,水漂洗后加5倍体积1NNaOH搅2小时,水洗至中性。加5倍体积1NHCl处理2小时,水洗至中性,再用pH4.50.1M醋酸缓冲液平衡过夜。注意事项•离心的转子和离心机配套使用。•离心前要平衡转子。•离心有机溶剂,要封上保鲜膜。•干燥蛋白前要封上保鲜膜并戳洞。•磁力搅拌器不要加热。

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