胶原蛋白的作用功效和提取过程

理学硕士学位论文：Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究1咱先介绍胶原蛋白的作用，后面在介绍胶原蛋白提取过程，有需要的可以耐心看完.胶原蛋白的功效和作用保湿：胶原蛋白含亲水性的天然保湿因子，而且三螺旋结构能强劲锁住水分，让皮肤时刻保持湿润、水嫩的状态！滋养：活性胶原蛋白对皮肤的渗透性强，可透过角质层与皮肤上皮细胞结合，参与和改善皮肤细胞的代谢，使皮肤中的胶原蛋白活性加强。它能保持角质层水分及纤维结构的完整性，改善皮肤细胞生存环境和促进皮肤组织的新陈代谢，增强血液循环，达到滋润皮肤的目的。亮肤：皮肤的光泽取决于含水量，胶原蛋白良好的保水能力使皮肤水润亮泽，散发健康的光彩。紧肤：当胶原蛋白被皮肤吸收后，填充在皮肤真皮之间，增加皮肤紧密度，产生皮肤张力，缩小毛孔，使皮肤紧绷而富有弹性！防皱：真皮中丰满的胶原蛋白层，将皮肤细胞撑起，结合保湿和抑制皱纹的作用，共同达到舒展粗纹，淡化细纹的功效！理学硕士学位论文：Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究2修复：活性胶原蛋白能直接渗入肌肤底层，且与周围组织的亲和性好，可协助细胞制造成胶原蛋白，促使皮肤细胞正常成长。同时，活性胶原蛋白本身还具有消炎和更新肌肤的作用。营养：胶原蛋白对皮肤的渗透性强，可透过角质层与皮肤上皮细胞结合，参与和改善皮肤细胞的代谢，使皮肤中的胶原蛋白活性加强。它能保持角质层水分及纤维结构的完整性，改善皮肤细胞生存环境和促进皮肤组织的新陈代谢，增强血液循环，达到滋润皮肤的目的。美乳：胶原蛋白中独有的羟脯氨酸具有收紧结缔组织的作用，能使松弛的组织紧实、承托起下垂的乳房，使乳房挺拔、丰满、富有弹性。目录英文缩写对照表………………………………………………………………………1中文摘要………………………………………………………………………………2英文摘要………………………………………………………………………………41前言…………………………………………………………………………………62材料…………………………………………………………………………………62.1主要仪器设备……………………………………………………………………62.2实验动物…………………………………………………………………………72.3样品与试剂………………………………………………………………………82.4常用工作液………………………………………………………………………83方法…………………………………………………………………………………93.1CPⅠ的制备………………………………………………………………………93.1.1粗提法…………………………………………………………………………93.1.2高效液相色谱分离纯化……………………………………………………10理学硕士学位论文：Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究33.2CPⅠ的理化性质鉴定…………………………………………………………103.2.137OC凝结试验………………………………………………………………113.2.2紫外吸收值测定……………………………………………………………113.2.3氨基酸组成和含量分析……………………………………………………113.2.4蛋白质浓度测定……………………………………………………………113.2.5SDS-PAGE凝胶电泳…………………………………………………………123.2.6RP-HPLC分析CPⅠ…………………………………………………………123.2.7生物安全性实验……………………………………………………………133.3CPⅠ防止UVA氧化损伤实验…………………………………………………143.3.1L929细胞的培养、冻存与复苏………………………………………………143.3.2UVA对L929细胞活性的影响………………………………………………143.3.3CPⅠ对细胞UVA氧化损伤的保护作用……………………………………144结果………………………………………………………………………………164.1CPⅠ的制备……………………………………………………………………164.2CPⅠ的理化性质鉴定…………………………………………………………164.2.137OC凝结试验………………………………………………………………164.2.2紫外吸收值测定……………………………………………………………164.2.3CPⅠ氨基酸组成和含量分析………………………………………………174.2.4蛋白质浓度测定……………………………………………………………184.2.5SDS-PAGE凝胶电泳…………………………………………………………194.2.6RP-HPLC分析CPⅠ…………………………………………………………194.2.7生物安全性试验……………………………………………………………204.3CPⅠ防止UVA氧化损伤实验…………………………………………………224.3.1UVA对L929细胞活性的影响………………………………………………224.3.2CPⅠ对细胞UVA氧化损伤的保护作用……………………………………225、讨论………………………………………………………………………………255.1CPⅠ的制备……………………………………………………………………255.1.1提高CPⅠ得率的因素………………………………………………………255.1.2提高CPⅠ纯度的因素………………………………………………………26理学硕士学位论文：Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究45.1.3高效液相色谱是分离纯化CPⅠ的有效途径………………………………275.2CPⅠ的理化性质鉴定…………………………………………………………275.2.1CPⅠ在223nm处有紫外最大吸收值………………………………………275.2.2CPⅠ氨基酸组成及含量分析………………………………………………275.2.3SDS-PAGE鉴定………………………………………………………………285.2.4RP-HPLC分析CPⅠ…………………………………………………………285.2.5CPⅠ具有生物安全性………………………………………………………285.3CPⅠ防止UVA氧化损伤研究…………………………………………………295.3.1UVA对成纤维细胞有活性有抑制作用……………………………………295.3.2CPⅠ能够降低UVA氧化损伤的细胞MDA活性…………………………305.3.3CPⅠ能够提高UVA氧化损伤细胞的GSH-px活性………………………30小结…………………………………………………………………………………31参考文献……………………………………………………………………………32文献综述胶原蛋白的研究进展…………………………………………………37致谢…………………………………………………………………………………46英文缩写对照表英文缩写英文名称中文名称CPⅠCollagenproteinⅠⅠ型胶原蛋白AAbsorbance吸光值BPBBromophenolblue溴酚蓝ddH2ODoubledistilledwater双蒸水PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液SDS-PAGESDS-polyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基磺酸钠理学硕士学位论文：Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究5TrisTris(hydroxymethyl)aminomethane三（羟甲基）氨基甲烷TEMEDN,N,N’N’-tetramethylethylenediamineN,N,N’N’-四甲基乙二胺DMSODimethylsulphoxide二甲基亚砜CBBCoomassieBrillantBlue考马斯亮蓝MTT3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide噻唑蓝HPLCHighperformanceliquidchromatography高效液相色谱UVAUltravioletradiationA长波紫外线MDAMalondialdehyde丙二醛GSH-pxGlutathioneperoxidase谷胱甘肽过氧化物酶Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究学科专业：动物学研究方向：生化制药指导教师：魏泓教授研究生：王琳（2001345）内容摘要本文围绕Ⅰ型胶原蛋白（CPⅠ）的制备及其理化性质进行研究，同时在其防止长波紫外线（UVA）对细胞的氧化损伤方面进行了初步探索，为CPⅠ的进一步研发提供理论基础和科学依据。理学硕士学位论文：Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究6以猪皮为材料，比较酸溶法、酶解法、中性盐溶液法三种粗提方法，选择得率和纯度都较高的酶解法为最佳粗提法，结合高效液相色谱进行CPⅠ的分离纯化。CPⅠ理化性质鉴定结果表明：样品在223nm处有紫外最大吸收值；含有十八种氨基酸，氨基酸总量在90%以上；样品的蛋白质浓度为1.03mg/ml；SDS-PAGE测定CPⅠ由α、β、γ三条链组成；色谱分析纯度约为100%。通过小鼠急性毒性试验、豚鼠致敏试验、细胞毒性试验对自制CPⅠ进行整体水平和细胞水平的生物安全性评价，观察期内，小鼠未见异常毒性反应；豚鼠注射点无红斑及水肿情况；细胞毒性小于Ⅰ级，结果证明本方法制备的CPⅠ无毒副作用。评价CPⅠ对UVA氧化损伤的L929细胞的保护作用。结果表明：随着UVA照射时间的延长，细胞的活性明显降低，说明UVA对细胞的氧化损伤是明显的，其中表现为MDA的含量升高、GSH-px的含量降低。加入不同浓度的CPⅠ后照射同样的时间，MDA的含量有所下降、GSH-px的含量有所升高，其中50%CPⅠ组的效果极为显著（P﹤0.01）。提示该物质有防止UVA氧化损伤的作用。综上所述，利用酶解和高效液相色谱制备相结合的方法可以从猪皮中分离纯化CPⅠ，该方法具有高效性，高选择性和易放大性；理化性质鉴定及生物安全性试验表明，该物质为纯活性胶原蛋白，无毒副作用；同时对体外细胞的UVA氧化损伤具有较好的保护作用。关键词：Ⅰ型胶原蛋白；高效液相色谱；制备；鉴定；氧化损伤理学硕士学位论文：Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究7Studiesonthepreparation，identificationofCPⅠanditsprotectiveeffectoncellsdamagedbyUVAMajor:BiologySpeciality:ZoologyTutor:Prof.WeiHongAuthor:WangLin（2001345）AbstractInthispaper,howtoprepareCPⅠandidentifyphysico-chemicalpropertyhadbeenstudied,andUVAoxidativedamageL929wasperliminarydiscussed.Thesedatasprovidedtheoreticfoundationandscientificproofforfurtherresearchanddevelopmentofthisproduct.理学硕士学位论文：Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究8Pigskinwasusedasmaterial.Accordingtothecomparationamongthethreekindsofcrudeextractionmethodsincludingaciddissolve,enzymolysisandneutralsaltsolution.Themethodofenzymolysiscombin