第二章白细胞检验.

第二章白细胞检验本章目录第一节白细胞生理概要第二节白细胞计数第三节白细胞分类计数第四节中性粒细胞常见的形态变化第五节白细胞计数和白细胞分类计数的临床意义第六节嗜酸性粒细胞计数第七节红斑狼疮细胞检验返回下一页第一节白细胞生理概要外周血常见白细胞的种类与功能白细胞的寿命和归宿返回上一页下一页学习目标1.叙述白细胞显微镜计数法的原理、试剂组成、注意事项2.学会白细胞显微镜计数法的操作方法3.准确识别外周血常见正常和异常白细胞形态4.学会白细胞分类计数方法返回上一页下一页外周血常见白细胞的种类与功能(一)外周血常见白细胞的种类1.白细胞的形态：无色有核，球形，直径7μm～25μm。2.白细胞的种类（形态分类）：三类五种--------返回上一页下一页中性粒细胞（N）粒细胞嗜酸粒细胞（E）嗜碱粒细胞（B）白细胞淋巴细胞（L）单核细胞（M）返回上一页下一页白细胞的发育起源于骨髓多能造血干细胞。返回上一页下一页白细胞的功能中性粒细胞：具有较强的运动能力和吞噬活性。胞内酶有复杂的杀菌系统。嗜酸粒细胞：可作变形运动，吞噬抗原抗体复合物，灭活组织胺减轻过敏反应。嗜碱粒细胞：与IgE具有较强的结合力，脱粒释放组胺导致速发性变态反应。淋巴细胞：参与体液免疫和细胞免疫。单核细胞：有强大的吞噬功能，传递抗原信息。返回上一页下一页白细胞的寿命粒细胞：10～15天淋巴细胞：数天～20余年单核细胞：数月返回上一页下一页白细胞的归宿衰老的粒细胞被单核-吞噬细胞系统清除，也有一部分从口腔、气管、消化道和泌尿生殖道排出。B淋巴细胞经抗原刺激后分化为浆细胞，产生特异性抗体，参与体液免疫。T淋巴细胞经抗原致敏后，可产生多种免疫活性物质，参与细胞免疫。粒-单核系祖细胞在骨髓经分化成原始单核细胞后发育为成熟单核细胞，释放入血液。返回上一页下一页返回上一页下一页学习目标1.叙述白细胞显微镜计数法的原理、试剂组成、注意事项。2.学会白细胞显微镜计数法的操作方法3.准确识别外周血常见正常和异常白细胞形态。4.学会白细胞分类计数方法。返回上一页下一页显微镜计数法【原理】用白细胞计数稀释液，将血液稀释一定倍数并破坏红细胞后，混匀充入计数池中，在显微镜下计数一定容积内的白细胞数，经换算即可求得每升血液中白细胞的总数。返回上一页下一页显微镜计数法【器材】1.显微镜（目镜10×；物镜10×）2.微量吸管（Hb吸管）传统的Hb吸管玻璃上有10µl和20µl（误差＜±1%）两个刻度。使用前应经严格校正。橡胶乳头提供负压返回上一页下一页Hb吸管的消毒清洗每次使用后，应经2ｇ/Ｌ过氧乙酸浸泡2ｈ消毒。然后依次用蒸馏水冲洗，→0.95Ｌ/Ｌ乙醇除脂脱水，→乙醚干燥后，才能再次使用。注意清洗的顺序不可颠倒。返回上一页下一页显微镜计数法3.计数池返回上一页下一页显微镜计数法3.计数池各池刻划有9ｍｍ2面积的刻度，分为9个大方格，每格长、宽各1ｍｍ，面积1ｍｍ2，体积为0.1ｍｍ３，容量0.1μl。返回上一页下一页计数白细胞的四个大方格四个角的大方格都用单线划分为16个中方格，为计数密度小的（白）细胞用。容量：0.1μl/大方格返回上一页下一页计数红细胞的五个中方格中央的一个大方格，用双线划分为25个中方格，每个中方格又被单线划分为16个小方格，共有400个小方格，供计数密度大的（红）细胞用。容量：0.1μl/大方格0.004μl/中方格返回上一页下一页４.盖玻片特制的计数池专用盖片，要求玻璃表面平整光滑，有一定重量，不被细胞悬液所抬浮，厚度应为0.4ｍｍ～0.7ｍｍ。盖玻片两面的平整度是：0.002ｍｍ以内，大小:24mm×20mm×0.6mm。返回上一页下一页显微镜计数法【试剂】白细胞稀释液冰乙酸2.0ｍｌ10g／Ｌ亚甲蓝（或结晶紫）数滴蒸馏水加至100ｍｌ返回上一页下一页稀释液中各组分的作用蒸馏水—低渗溶解红细胞，乙酸—可加速红细胞溶解，同时乙酸能固定核蛋白，使白细胞核显现，便于辨认。染料—使核略着色，且易与红细胞稀释液区别。返回上一页下一页显微镜计数法【操作】１．取小试管１支，加入白细胞稀释液0.38ｍｌ。２．用微量吸管准确吸取外周血20ul。３．擦去管尖外部余血，立即将吸管插入盛有稀释液的试管底部，轻轻将血放出，并吸取上清液漱洗吸管２次～３次，注意每次不能冲浑稀释液，最后用手振摇试管混匀。返回上一页下一页操作４.充液将计数板和盖玻片擦净，盖片盖在计数池上，用毛细滴管或玻璃棒取已混匀的细胞悬液1滴，充入计数池与盖玻片间的缝隙中，静置2min～3min，待白细胞下沉。返回上一页下一页镜下白细胞形态似成熟蚕卵，中央核深染，胞质色淡。返回上一页下一页显微镜计数法5.计数方法用低倍镜依次计数四角的四个大格内的白细胞数。对于压线的白细胞，应采取数上不数下；数左不数右（左、上计入，右、下弃去）的原则，保证计数域的一致性，使计数准确。返回上一页下一页让我们共同计数下列大格的细胞返回上一页下一页让我们再试一次：返回上一页下一页显微镜计数法【计算】四个大格白细胞数白细胞数／Ｌ＝————————×10×20×1064式中：÷４得每个大格（即0.1µl）内白细胞平均数×10因一大格容积为0.1µl，换算为1µl×20血液稀释倍数。×106将1µl换算为1Ｌ。返回上一页下一页稀释倍数的确认稀释倍数＝（溶质＋溶剂）/溶质注意：体积单位需一致后方能运算。返回上一页下一页请您练习求以下操作的稀释倍数：稀释液（ml）＋血液（µl）稀释倍数0.38200.48200.39102.0010202540201返回上一页下一页请您练习按常规取血稀释后数得4个大格共有白细胞280个，求白细胞计数结果？解：WBC＝280/4×10×20×106＝14×109/L返回上一页下一页请您练习取血40ul加入稀释液0.36ml，镜下计数了8个大格共有白细胞320个，求其白细胞计数结果？答案：稀释倍数＝（360＋40）／40WBC＝320／8×10×10×106＝10＝4×109/L返回上一页下一页白细胞计数计数误差1.技术误差:由于操作不正确和仪器不精确造成的误差。2.固有误差:因每次白细胞分布不可能完全相同所造成的偏差属固有误差，也称计数域误差。返回上一页下一页常见技术误差：血液凝固稀释倍数不准充液不当识别错误器材不符合要求返回上一页下一页固有误差(计数域误差)根据统计学研究，白细胞在计数池内的随机分布符合泊森分布。从计算公式中可以看出计数范围越大，计数的细胞越多，计数域误差越小。返回上一页下一页注意事项1、稀释液要过滤使用，试管、计数板等均须清洁。2、计数池内细胞分布要均匀。总数在参考范围内，每个大方格间白细胞数不得相差8个以上，两次重复计数误差不得超过10%，否则要重新充液计数。3、遇白细胞数太低者、白细胞数太高者稀释倍数应灵活掌握。4、当外周血出现大量有核红细胞时应予以校正除去。返回上一页下一页总结1.白细胞的种类按形态分类包括：三类五种2.显微镜法计数原理：用稀乙酸溶液将血液稀释并破坏红细胞后，混匀充入计数池中，在镜下计数一定容积中的白细胞数，经换算求得每升血液中的白细胞总数。返回上一页下一页总结3.计数池的结构：分为9个大方格，每个大方格长、宽各1ｍｍ，面积ｌｍｍ2，体积为0.1ｍｍ３，容量0.1µl。4.稀释液中各组分的作用为：蒸馏水低渗溶解红细胞；乙酸加速红细胞溶解同时固定核蛋白，使白细胞核显现，便于辨认；染料使核略着色，且易与红细胞稀释液区别。返回上一页下一页总结5.Hb吸管的清洗顺序是：蒸馏水冲洗→95%乙醇脱水除脂→乙醚干燥6.镜下计数时要遵循一定顺序，对于压线的白细胞，应采取:数上不数下；数左不数右（左、上计入，右、下弃去）的原则计数。返回上一页下一页总结计算公式四个大格白细胞数白细胞数／Ｌ＝————————×10×20×1064返回上一页下一页第三节白细胞分类计数一、外周血常见白细胞的形态二、白细胞分类计数返回上一页下一页学习目标1.叙述外周血常见白细胞的形态２.分析白细胞在血涂片上的分布，正确选择分类计数区域３.述说显微镜白细胞分类计数法返回上一页下一页一、外周血常见白细胞的形态经瑞特染色后外周血中常见各种成熟白细胞形态如下：细胞大小、形态细胞核形态、染色质结构细胞浆、特异性颗粒返回上一页下一页（一）中性粒细胞返回上一页下一页胞体呈圆形，直径10μｍ～15μｍ，约为红细胞的２倍。胞质量丰富染粉红色，含大量细小均匀的紫红色中性颗粒。细胞核染色质粗糙不匀，排列紧密成小块状．染深紫红色。根据核的形状分为中性杆状（带状）核粒细胞和中性分叶核（多节核）粒细胞两种。（一）中性粒细胞中性分叶核粒细胞的核分２叶～５叶或更多叶，以３叶～４叶为常见．叶间以核丝或核桥相连。分叶的大小、形状和排列各不相同。返回上一页下一页中性分叶核粒细胞的核返回上一页下一页杆状核和分叶核的划分标准胞核完全分离或核间以丝状相连，或核叶重叠，使核的轮廓看不清，划分为分叶核粒细胞。胞核细长多样，弯曲盘绕，可呈C型、S型、V型或不规则型，划分为杆状核粒细胞。为不完全成熟细胞。返回上一页下一页杆状核粒细胞的核形返回上一页下一页（二）嗜酸粒细胞圆形，直径13μm～15μm，略大于中性粒细胞。胞核常分两叶，似眼镜形。也可见３叶～４叶者。核染色质粗。染紫红色。胞质中充满粗大、均匀、整齐、紧密排列的橘红色嗜酸性颗粒。偶见少许淡蓝或无色胞质。嗜酸粒细胞较易碎，破碎后颗粒多散在胞核附近。返回上一页下一页（三）嗜碱粒细胞圆形，直径10μm～1２μm，较其他粒细胞小。胞核常被颗粒遮盖，核染色质粗着色较浅，分叶常不明显．形态不规则，清楚时可见２叶～４叶。胞质量较少，常呈淡红或淡紫红色，含少量粗大，但大小不均、排列不规则的紫黑色嗜碱性颗粒，常盖于核上。嗜碱性颗粒易溶于水，故染色时易被溶解消失，而呈淡红色空穴状。返回上一页下一页（四）单核细胞呈不规则的圆或椭圆形，为外周血中最大的细胞．直径15μm～25μm。细胞核大呈不规则圆形、肾形、马蹄形，或不规则分叶有时折叠卷曲。染色质细致疏松如网状，染淡紫红色。胞质量丰富．染淡蓝、灰蓝色不等，常呈毛玻璃样半透明。胞质内含有大量细小灰尘样紫红色嗜天青颗粒。核凹陷处胞质染色较淡．偶见无颗粒胞质是伪足样伸出。返回上一页下一页（五）淋巴细胞按其个体可有大小之分。小淋巴细胞：呈圆形，直径6μm～10μm。胞核圆形。偶见凹陷，染色质粗糙紧密，排列均匀，无空隙。常有隐约成块现象，核周常有染色质浓集，核膜明显，有时可见潜在核仁。胞质量极少，仅在核的一侧出现一线天蓝或深蓝色，有的甚至完全不见。胞质中一般无颗粒存在，偶见几颗大小不等的紫红色嗜天青颗粒。返回上一页下一页大淋巴细胞：体积较大直径10μm～15μm，胞核染色质比小淋巴细胞疏松，胞质量丰富，呈透明的淡蓝色，常有少量大小不等的嗜天青颗粒。返回上一页下一页五种白细胞鉴别要点返回上一页下一页点评三种粒细胞主要依据胞质中颗粒形态和染色性质去相互鉴别；淋巴细胞与单核细胞则重点根据细胞核的特征去区别。返回上一页下一页嗜中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞淋巴细胞单核细胞返回上一页下一页二、白细胞分类计数步骤1．制备血涂片2．血涂片染色3．白细胞分类4．计算百分率返回上一页下一页白细胞总数与分类白细胞数的关系白细胞总数（×109/L）应分类白细胞个数＜450～1004～1010010～2020020～30300＞30400返回上一页下一页二、白细胞分类计数法由于各种白细胞大小不同在血片中分布不很均匀。一般体积较小的淋巴细胞在头、体部较多．而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多特别是异常大的细胞常常在片尾末端出现。返回上一页下一页二、白细胞分类计数分类最好是在血膜体尾交界处．由血膜边缘向中央依次上下呈曲线向血膜中间移动，计数不同区域的白细胞，以免重复计数．缩小因细胞分布不匀的误差。返回上一页下一页二、白细胞分类计数3.白细胞分类记录方法（1）分类计数器法（2）完全记录法返回上一页下一页二、白细胞分类计数4.各类细胞所占百分率乘以白细胞总数/Ｌ．即得每升血液中各类白细胞的浓度数（习惯称绝对值）。某种白细胞数／Ｌ＝