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分析方法开发和验证验证前需要考虑的事情•概念•分析方法形成过程•验证需要考虑的因素•验证基本假设（前提）•现有验证指南缺陷•分析方法验证方案内容•仪器的确认概念1：分析方法ICH—Q2定义：分析方法是指进行分析的方式，应详细描述每一个分析试验所必需的步骤它包括，但不局限于：样品，参照对照品，试剂的配制，仪器的使用，标准曲线的绘制，计算公式的运用等概念2分析方法验证化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则定义：为使测试结果准确，可靠，必须对所采用的分析方法的科学性，准确性和可行性进行验证，以充分表明分析方法符合测试项目的目的和要求，这就是通常所说的对方法进行验证分析方法形成过程什么情况分析方法需要验证？刚开发的分析方法修正或建立分析方法用于新的问题分析方法变更分析方法在不同实验室，分析人员使用不同仪器证明两个分析方法的等效性验证需要考虑的因素确认并校验的仪器文件化的方法可靠地参数标准品合格的分析人员样品完整性验证基本假设〔前提）专属性得到证明方法己经是最佳条件用统计学方法处理数据现有验证指南缺陷仅仅提出了要求验证的项目没有给出具体的验证方法没有给出判断标准一些验证中的实际问题没有指导原则分析方法验证方案内容阐明目的和范围责任书面的分析方法使用的物料与仪器目录每一参数的实验程序统计方法每一参数的验证标准仪器的确认构造，型号和制造商手册改造安装确认和运行确认校准程序维护保养养计划不同验证具体要求验证的范围新方法验证步骤方法转移验证方法重新验证验证的范围新方法要求进行完整的验证药典的方法要求部分进行验证（确证）重大要的变化需要进行部分再验证新方法验证步骤开发新方法或从相关实验室获得新方法制定验证方案，验证规程或验证主计划确定方法（验证）适用的目标，范围确定实验参数及可接受的标准确定验证实验过程确认验证使用的仪器相关性能新方法验证步骤（续1）确认验证所需的人员，试剂及标准运行预验证试验如果需要调整方法或接受标准运行完整的验证试验建立该方法的SOP用于日常分析工作确定需要重新验证方法的标准新方法验证步骤（续2）确定日常工作中系统适应性测试及/或分析质量控制检查的类型及频率将验证过程，结果及结论总结形成完整的验证报告概念3：替代分析方法FDA定义：目的在于替代法规分析方法的分析方法基本内容专属性检测限定量限精密度线性与范围准确度耐用性分析方法按特性分类第一类主成分定量第二类杂质或降解产物测定第三类性能特点测定第四类鉴别试验USPICHWHO选择性选择性选择性线性度及范围线性度线性度及范围范围准确度准确度准确度精密度精密度重复性精密度中间精密度重现性检测限检测限检测限定量限定量限定量限耐用性耐用性耐受性ICH,USP及WHO验证要求FDA要求验证项目鉴别杂质限度杂志定量含量及溶出度特性准确度--+++重复性--+++中间精密度--+++专属性+++++检测限-+---定量限--+--线性--++-范围--++-耐用性--+++ICH要求验证项目鉴别杂质限度杂志定量含量及溶出度准确度--++重复性--++中间精密度--++专属性++++检测限-+--定量限--+-线性--++范围--++耐用性±±±±WHO要求验证项目鉴别杂质定量杂质限度含量特性准确度-+-++精密度-+-++耐用性+++++线性和范围-+-++专属性+++++检测限--+--定量限-+---方法转移验证证明经过其它实验室的验证，并可以正式运行的分析测试过程，是否可以在本实验室运行，并适应实际的使用情况：满足相应的测试要求真实反映被测物相应的特性，浓度，质量，纯度及效价情况概念4：法规分析方法FDA定义：是用于评佑原料药或制剂某一个规定特性的分析方法概念5:交叉验证FDA定义：在同一个研究或不同交叉研究中，用两种或多种分析方法进行分析，对验证参数进行比较转移验证方法来源官方认可的标准USP/NFEPBPChPJPAOAC客户提供的，经过验证后的方法相关实验室经验证后正在使用的方法转移验证的要求系统适应性及方法专属性必须验证方法耐用性可以不验证杂质测试方法检测限与定量限必须验证其它验证项目根据实际情况决定，对于项目的选择与取舍应有详细的讨论分析方法转移验证分析方法转移方案及程序精密度准确度耐用性编写并批准的具体测试方法熟练程度核实新实验室正式验收方法再验证概念需运行方法再验证的变更情况方法再验证要求概念6：方法再验证化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则定义：在某些情况下，如原料药合成工艺改变，制剂处方改变，分析方法发生改变等，均有必要对分析方法再次进行全面或部分指标的验证，以保证分析方法可靠，这一过程称为方法再验证需运行方法再验证的变更情况改变药物合成工艺改变制剂组成改变分析过程操作过程的更改改变仪器，色谱柱等硬件测试条件持续改变以适应系统适应性要求，且改变程度超出药典规定的方法耐用性验证范围方法再验证要求证实相应的变更发生后，原使用的分析测试过程：能够继续保持其特有的性质（如专属性）能够继续真正反映被测物的相应特性（检测限与定量限）依靠变更情况确定重新验证的内容与程度其它概念参考文献概念7：系统适应性在一个系统（主要是色谱分离系统）被使用前，检查其系统性能指标是否满足分析要求的过程它是确保色谱系统质量性能的要素概念8：接受标准FDA定义：用于验收分析结果的数字限度，范围，或其他适当的计量参考文献ICH一QZATextonValidatlonofAnalyticalProcedure:(1994)ICH一QZBValidationonAnaIyticalProcedures:Methodology：(1995)CDERReviewerGuidance:ValidationofChromatographicMethod(1994)CDERSubmittingSamplesandAnalyticalDataforMethodValidations（1987)CDERDraftAnalyticalProceduresandMethodValidation(2000)CDERBioanalyticalMethodValidationforHumanStudles(1999)USP1225VaildationofCompendialMethods(currentrevlsion)中国药典：药品质量标准分析方法验证ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证第一部分：基本要求ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证第二部分：实验设计与操作1.0－讲座目的•掌握验证试验设计•掌握验证试验操作•了解确定接受标准原则第一部分:基本要求ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证第二部分:实验设计与操作1.0－讲座目的•掌握验证试验设计•掌握验证试验操作•了解确定接受标准原则2.0一精密度概念容易混淆的精密度中术语重复性中间精密度推荐重复性接受标准AOAC浓度与精密度关系重现性2.1一概念1：精密度lCH-Q2定义：分析方法的精密度指在规定条件下，对均质样品，多次取样进行一系列检测结果的接近程度（离散程度）2.2一容易混淆的精密度中术语仪器重复性相同人员，仪器，日期，标准液方法重复性相同人员，仪器，日期，重新配制标准液中间精密度不同日期，不同分析人员，不同仪器2.3一重复性概念推荐重复性测定方法2.3.1一概念2：重复性ICH-Q2定义：重复性是指在同样的操作条件下，较短时间间隔的精密度2.3.2一推荐重复性测定方法在方法规定的线性范围内重复测定如3个浓度，每个浓度3次或100％的测试浓度，测定六次记录每次测定各组分响应计算各响应值与平均值之间相对标准偏差2.3.2.1-概念3：系统重复性相同条件下，同一分析人员对同一样品溶液多次测试结果的接近程度2.3.2.2—系统重复性实验取同一均匀标准样品溶液连续重复测定六次记录每次测定各组分响应计算各响应值与平均值之间相对标准偏差2.3.2.3-概念4：方法重复性相同条件下，同一个分析人员对同一个均匀样品，多次取样测定所得结果的接近程度2.3.2.4一方法重复性实验取同一批号均匀样品按照分析方法规定至少称量出六份按含量测定方法测定每一份样品含量计算每一次测定的含量与平均含量之间的相对标准偏差2.4-中间精密度概念推荐中间精密度测定方法2.4.1一概念5：中间精密度ICH-Q2定义中间精密度指的是试验室内部条件改变，如：不同日，不同分析者，不同仪器等情况下的精密度2.4.2—推荐中间精密度测定方法应确定随机事件对分析方法精密度的影响，如不同日期，不同分析人员，不同仪器等等没有必要一一考察用均匀设计，或正交设计方法2.5一推荐重复性接受标准系统重复性S/N1000,RSD1%1000S/N100,RSD2%S/N10,RSD4%S/N10,RSD8%方法重复性测定结果的相对偏差仪器分析小于2%容量分析小于0.3%2.6－AOAC浓度与精密度关系浓度（%）比率单位RSD（%）1001100%1.3≥1010-110%2.7≥110-21%2.8≥0.110-30.1%3.70.0110-4100ppm5.30.00110-510ppm7.30.000110-61ppm110.0000110-7100ppb150.00000110-810ppb210.000000110-91ppb302.7-重现性概念什么时候需要作重现性2.7.1一概念6：重现性ICH－Q2定义：重现性指不同试验室之间的精密度2.7.2-什么时候需要作重现性？是比较实验室间的差异当一个方法要升级到法规方法时，需要做这个工作3.0—准确度概念原料药准确度测定制剂产品准确度测定杂质准确度测定推荐准确度测定方法推荐准确度测定接受标准AOAC浓度与回收率关系3.1—概念7：准确度ICH—Q2定义分析方法的准确性指的是真实值或认可的参考值与测量值之间相近程度3.2—原料药准确度测定用该方法分析已知纯度的分析物该方法的分析结果与成熟的分析方法相比较，该成熟方法准确度是已知的在精密度，线性，专属性建立后，进行推论3.3—制剂准确度测定用该方法去测按处方量制成的混合物（加入已知量被测物）在制剂中加入已知量主药或与另一成熟方法比较在精密度，线性和专属性建立后得出3.4—杂质准确度测定在样品（原料浩挤」）中加入已知量的杂质无法得到杂质／降解物的，与采用其他方法测得的结果比较，可以使用原料的响应值3.5—推荐准确度测定方法在六个空白样品中，分别加入已知浓度的样品（浓度范围为含量测定浓度的80％—120%)计算该方法的百分回收率3.6—推荐准确度测定接受标准测定得到的主品的百分回收率与理论回收率100%间的相对标准偏差不得大于方法重复性相对标准偏差的4倍3.7—AOAC浓度与回收率关系浓度（%）比率单位平均回收率（%）1001100%98-102≥1010-110%98-102≥110-21%97-103≥0.110-30.1%95-1050.0110-4100ppm90-1070.00110-510ppm80-1100.000110-61ppm80-1100.0000110-7100ppb80-1100.00000110-810ppb60-1150.000000110-91ppb40-1204.0—检测限概念直观法信噪比法标准偏差和斜率法推荐检测限测定方法4.1—概念8：检测限ICH—Q2定义检测限度指的是样品中的被分析物质能够被检测到的最低量，但不一定要准确定量4.2—直观法直观评价可以用于非仪器分