紫外可见吸收光谱法的应用2

紫外可见吸收光谱法的应用•一、定性分析•二、有机化合物结构推测•三、定量分析•四、物理化学常数的测定一、定性分析无机元素定性：AES，化学分析法等有机化合物的定性：近代四谱（UV－Vis，IR，MS，NMR）1、未知物的鉴定（对比法）方法：标准物的光谱图或标准光谱图：吸收光谱曲线特征：吸收峰数目、位置、强度等。局限性：（1）简单，特征性不强；（2）很多生色团峰不受分子中其它非吸收团影响；（3）结构分析只是辅助手段；（4）有机化合物多数官能团在紫外可见区无吸收或微弱，主要应用于不饱和有机物尤其共轭体系；更多应用于定量分析。2、物质纯度的检验：通过绘制样品的紫外吸收光谱图判断是否含有杂质。如无水乙醇中少量苯的检验。二、有机化合物结构推测1、推测有机化合物中可能存在的官能团吸收带特征可能存在的官能团200~400nm无吸收饱和的脂肪烃或含一个双键的烯烃210~250nm有强K带吸收260~300nm有强K带吸收可见光区有强K带吸收含两个双键的烯烃含3~5个双键的烯烃长链共轭或稠环化合物250~300nm有宽的中强B带吸收有苯环，为芳香族化合物270~350nm有弱R带吸收羰基或硝基等发色团2、判别同分异构体例如：乙酰乙酸乙酯存在酮式与烯醇式互变异构体有R吸收带，无K吸收带有R吸收带，有K吸收带3、判别順反异构体一般顺式异构体λmax比反式异构体的小，可用紫外可见吸收光谱法区别。如肉桂酸：CCH3OCH2C2OCH5O2CH3CCHOHCOOCH5反式肉桂酸λmax=295nm顺式肉桂酸λmax=280nm三、定量分析--依据朗伯比尔定律1.单组分化合物分析通常采用A-C标准曲线法定量测定。2.混合物中多组分的测定原理：吸光度加合性原理3.双波长分光光度法适用于浑浊试样或背景吸收较大的试样，用来消除背景吸收和光散射。baAAA111baAAA222bbaabcbcA111bbaabcbcA222λ2bAaλ1λCOOHCOOHYXAAA111YXAAA222XXAA12YYYYYbcAAAAA121212双波长分光光度法选择波长的原则：•在λ1和λ2处，干扰组分X的吸光度相同；•在λ1和λ2处，待测组分Y的吸光度差值要足够大。4.差示分光光度法（测定高含量组分）普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即用浓度比试样小的已知浓度为cs的标准溶液作为参比溶液，调吸光度为零。即：示差法测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔＡ，与Δc呈直线关系。由标准曲线上查得相应的Δc值，求得待测溶液浓度Cx示差法标尺扩展原理及优点：Aλ2XYX+Yλλ10ssbcAcbccbAAAAsxsxcccsx普通法：cs的T=10%；cx的T=5%示差法：cs做参比，调T=100%则：cx的T=50%；标尺扩展10倍。优点：1）读数落入适宜读数范围内，减少了仪器读数误差。2）结果相对误差dc/Δc+cs很小，准确度很高。四、物理化学常数的测定1.摩尔比法：M+nRMRn摩尔比法适用于M和R均不干扰MR吸光度的测定，配合物的离解度小，配合比高的配合物组成和稳定常数的测定。nAA′cR/cM00.51.0A′ARMMccc2.等摩尔连续变化法以A为纵坐标，以RMMccc为横坐标，作图。RMMccc''AAA''AAAnnRMMRK稳RMMccc1/21/31/41/51/61/7n123456此法适用于离解度小、配合比低的配合物组成的测定。例如：紫外-可见光谱在食品检测中应用–但是为了克服紫外区干扰严重的缺点,选用的检测波长分别为苏丹红•Ⅰ:478nm;苏丹红Ⅱ:490nm;苏丹红Ⅲ:500nm;苏丹红Ⅳ:510nm。样品处理(1)胡椒粉、红辣椒粉等粉状调味品准确称取1.00~5.00g样品,置于250mL锥形瓶中,加入100mL正己烷,超声振荡20min,过滤,洗涤,定容。(2)酱油、辣椒酱准确称取20.00g样品,置于250mL锥形瓶中,加入100mL正己烷,超声振荡20min,过滤,洗涤,定容。(3)辣椒油、香肠、肉类及油类产品准确称取5.00g样品,置于250mL锥形瓶中,加入30mL乙醇溶液,振荡,加入10.0mL氢氧化钾水溶液(1+1),回流皂化30min。分别用50mL乙醚提取3次,合并乙醚溶液,用5%硫酸钠水溶液洗涤3次后,将乙醚溶液旋转蒸发至近干后,用正己烷定容至5mL。标准曲线的绘制分别准确吸取苏丹红Ⅰ~Ⅳ标准液0.00、0.05、0.10、0.50、1.00、1.50、2.00、3.00mL,用正己烷定容至10.0mL,混匀,配制成系列苏丹红标准工作溶液。分别在478、490、500、510nm处,用1cm石英比色皿,以空白溶液为参比用紫外可见分光光度计测定吸光度,以吸光度A对苏丹红的浓度c作图,绘制标准工作曲线。福州地区送检产品检测结果肯德基---五种食品涉嫌含有苏丹红家乐福---出售酱菜含苏丹红宝洁---SK-Ⅱ化妆品含有特氟龙化妆品---被疑广泛含“苏丹红”公仔DOLL---方便食品含苏丹红FM.B.马铃薯肉饼含苏丹红Questo海鲜调味料含苏丹红BirdsEye健康选择火锅鸡肉含苏丹红亨氏---辣椒酱含苏丹红麦当劳---产品含苏丹红联合利华---9种产品含苏丹中药学B1001学号102571王媛媛