组织因子对家兔血液凝固的影响

组织因子对家兔血液凝固的影响摘要：目的：研究肺组织浸液（含组织因子）对家兔血液凝固的影响。方法：本实验采用家兔颈总动脉放血取血，分别观察家兔血液在加入肺组织浸液和生理盐水的试管中的凝固情况。结果：加入肺组织浸液的试管中的血液快速凝固，加入生理盐水的试管未发生凝血。结论：组织因子（取自肺组织浸液）对家兔血液凝固过程有促进作用。关键词：组织因子；血液凝固；凝血Abstract:Objective:Tostudywhatkindofeffectsthelungtissueimmersion(includingTissueFactor)wouldworkonrabbitbloodclotting.Methods:Thisexperimentusesthebloodfromtherabbitcarotidartery,andthebloodisobservedinvitrowiththelungtissueimmersionandnormalsaline.Results:Thebloodinvitrowhichisjoinedwiththeimmersionoflungtissuehasrapidsolidification,whiletheothertubewiththephysiologicalsalinenotclots.Conclusion:TissueFactor(fromlungtissueimmersion)congratulatestherabbitbloodcoagulationprocess.KeyWords:Tissuefactor;Bloodclotting;Bloodcoagulation肺组织浸液中富含组织因子。YukoKamikura等研究表明静脉血栓形成患者白细胞组织因子（TissueFactor,TF）mRNA表达较健康自愿者升高，静脉血栓合并癌症或DIC患者mRNA表达升高更加明显，同时，静脉血栓病人血浆中TF抗原水平显著升高［1］LauroM.Vieira等研究表明，不管是否经PLS处理，下肢静脉血栓患者单核细胞表面TF表达及血浆水平都较对照组要高［2］。这说明血栓发生与TF表达密切相关，但TF对血液凝固的影响尚属未知。因此，研究TF在血液凝固过程的作用对于临床治疗各类血液高凝状态疾病具有重要意义。1.材料和方法1.1材料1.1.1动物健康家兔1.1.2仪器兔手术台，绑带，手术剪，止血钳，镊子，眼科剪，玻璃分针，动脉夹，线，试管，动脉插管，秒表1.1.3药品及试剂氨基甲酸乙酯，生理盐水，肺组织浸液1.2方法1.2.1捉拿、称重、麻醉、固定用200g/L氨基甲酸乙酯按5ml/kg体重剂量给家兔耳缘静脉注射麻醉，将家兔仰卧位固定于兔手术台上。1.2.2安置动脉插管切开颈部皮肤后，用玻璃分针分离一侧颈总动脉，远心端用线结扎，近心端加上动脉夹。用手指或镊柄从下方固定颈总动脉，使用眼科剪在近结扎线处的血管壁处剪一“V”形小口。向心方向插入动脉插管，用线结扎固定，使插管沿血管方向延伸。1.2.3准备试管取2支试管，分别编号。1号试管中加入生理盐水0.2ml，2号试管中加入肺组织浸液0.2ml。1.2.4向1、2号试管中每管加入家兔动脉血1ml，立刻计时。每隔15s将倾斜一次试管，观察其血液凝固情况。待血液呈完全凝固、仅血清流动状态，停止计时并记录时间。[3]2.结果2号试管中血液凝固速度远远快于1号试管。将原始数据制成表格，可得肺组织浸液（含组因子）对家兔血液凝固原始数据表(表1)。试管编号再加入动脉血（ml)凝血时间为从放血开始计时至血液刚出现不流动为止的时间1120m34s212m32s肺组织浸液0.2ml先加入试剂生理盐水0.2ml表1肺组织浸液（含组织因子）对家兔血液凝固的影响原始数据记录（室温24.5℃）（单位：h:m:s）3.讨论3.1生理性凝血机制血液中具有酶特性的凝血因子都以无活性的酶原形式存在，在机体内组织或器官损伤时经过凝血因子的激活成为凝血酶，从而使血浆中可溶性的纤维蛋白原转变为不溶解的纤维蛋白多聚体，并网罗红细胞成为凝血块[4]。3.2生理盐水对血液凝固的影响王卓强等实验研究结果证实20%的稀释度(相当于在70kg的人体内静脉输入1000ml的液体)能够使血液达到一种高凝状态,表现为ACT、TP的缩短以及CR、PF的上调[5]。在本次实验中，由于设置了生理盐水的对照组，可以排除其影响因素，但在临床上进行急性大量失血扩容治疗时应引起关注。3.3TF对血液凝固的影响本实验采用动物颈动脉放血取血，血液几乎未与TF接触。因此，凝血过程主要是内源性凝血系统的作用。肺组织浸液富含TF，混入家兔血液之后明显加快了血液凝固速度。这也提示了体内血栓形成患者可能存在内皮细胞损伤从而释放TF加快血凝的情况[6]。3.4颈动脉创口创造时血液喷流与及时抢救理想情况下，颈动脉应释放少量血液之后完整暴露创口方便动脉插管。实际操作时，家兔颈动脉因创口的形成迅速形成喷流，大量血液蔓延，污染手术视野。在经历短暂的慌乱之后，我们结合考虑近心端压迫止血无效以及远心端创口处出现疑似漩涡样血流，使用盐水纱布对远心端进行用力压迫止血3min。待血液逐渐停止涌出后，清洁手术视野继续动脉插管。考虑到动脉管极具弹性，远端结扎时应严密、牢固；抢救以找准出血口为第一要务。3.5血容量对血压的影响初步预计家兔血液流失量达60-80ml。一般健康家兔循环血量为59±2.3ml/Kg，本次实验家兔体重为21.5Kg，预测循环血量为1317.95-1219.05ml，失血量约5%20%，对血压变化影响不大。4.结果TF对血液凝固有着较为明显的促进作用，在机体内应表现为促使血栓的形成。虽然对其部分生理机制以及对非凝血功能的探索并未完善，以TF为靶点的抗血栓药物治疗具有切实的临床意义。5.参考文献[1]YukoKamikura,HideoWadaetal.ElevatedlevelsofleukocytetissuefactormRNAinpatientswithvenousthromboembolism,28January2005.[2]LauroM.Vieira,LuciM.S.Dusse,AnaP.Fernandes,etal，Monocytesandplasmatissuefactorlevelsinnormalindividualsandpatientswithdeepvenousthrombosisofthelowerlimbs:Potentialdiagnostictools,9March2006.[3]陆源，林国华，等.机能学实验教程[M].北京：科学出版社，2010:107[4]张志雄，王德山，等.生理学[M].上海：上海科学技术出版社，2011:48-50[5]王卓强,徐震,等.体外不同程度生理盐水稀释血液对凝血功能的影响[J].解放军医学杂志,2008,10(10)[6]陈群.组织因子及其在凝血、非凝血功能中的研究进展刘育成[J].医学信,2011,4(4)附加实验：一、各因素对血液凝固的影响试管编号影响因素放血（ml)从放血开始计时至全部血液刚出现不流动为止的时间为凝血时间3试管静置于室温25℃中125m51s4试管静置于冰块中11h07m54s5试管内表面涂石蜡油130m27s6试管底置少许棉花13m20s7试管底加入8单位/ml的肝素0.2ml12h之内未凝固8试管底加入2%的草酸钾0.2ml12h之内未凝固温度变化光滑面抗凝剂表2.因素对家兔血液凝固的影响实验的原始数据记录（单位：h:m:s）讨论：1．试管3、4对比显示，低温明显延缓家兔血液凝固速度，原因是低温抑制凝血酶活性，因此外科手术中常用温热盐水纱布等进行止血。2．试管5、6对比发现，血液的外源性凝血途径需要接触异物，而仅依靠内源性凝血途径需要耗费较长时间，所以日常使用纱布、棉花等异物对机体破损处产生刺激从而加快血凝速度。3．试管7、8中添加的肝素、草酸钾均为抗凝剂，对血液的凝固过程有着非常明显的抑制延缓作用，在抗血栓治疗、降低血液高凝状态等方面具有临床意义。二、健康家兔颈动脉血压测量血压曲线中可以较为清晰地看出：1、家兔心脏波动形成的一级波、二级波2、数据大致为收缩压90mmHg，舒张压75mmHg，平均压80mmHg，心率305次/分