细胞因子的检测

第一节细胞因子检测概述一、细胞因子的类型与作用特点二、细胞因子检测的特点与方法由非神经—内分泌细胞产生的一大类与免疫应答活动密切相关的低分子蛋白与多肽。细胞因子细胞因子的类型与作用特点1、细胞因子的分类2、细胞因子的作用特点以生物学作用进行划分的分类白细胞介素（Interleukin）——IL-1、IL-2、……IL-18干扰素（Interferon）——IFN-、IFN-、IFN-肿瘤坏死因子（Tumornecrosisfactor）——TNF-、TNF-集落刺激因子（Colony-stimulatingfactor）——M-CSF、G-CSF转化生长因子（Transforminggrowthfactor）——TGF-趋化因子（Chemokine）——IL-8、GROs、MCP-1生长因子（Growthfactor）——EGF、FGF、IGF、PDGFTNFsILsIFNsTGFsChemokinesCSFs各类细胞因子间关系1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性2、多源与同源性3、高效性4、多效性（pleiotropy）5、丰余性（redundancy）6、协同性7、拮抗性8、网络性细胞因子检测的特点与方法1、检测的特点2、检测的方法细胞因子检测的特点免疫原性较弱样品含量低样品具有时效性生物效应特异性差细胞因子检测的方法免疫学检测方法——抗原性检测细胞生物学检测方法——生物活性检测分子生物学检测方法——基因表达检测第二节细胞因子检测的方法与原理一、细胞因子的细胞生物学检测二、细胞因子的免疫学检测三、细胞因子的分子生物学检测细胞因子的细胞生物学检测1、检测方法与原理2、检测中的操作注意要点检测方法与原理细胞增殖或增殖抑制试验细胞病变抑制试验细胞毒试验细胞趋化试验滤膜：计数受趋化细胞趋化因子细胞趋化试验原理示意检测中的操作注意要点靶细胞的选择与培养检测标本的制备显示检测结果靶细胞的选择与培养1、对所测的细胞因子有特异的敏感性2、易培养、保存、生物学特性稳定3、有良好的生长状态4、种属适配各类细胞因子检测的常用靶细胞细胞因子实验系统干扰因素IL-1D10（M）增殖法IL-2、IL-4EL-4（M）增殖法IL-4A352（H）增殖抑制法IL-2CTLL（M）增殖法IL-4IL-3KG-1（H）增殖法TF-1（H）增殖法GN-CSF、IL-5IL-6、EPOIL-4CTLL（M）增殖法IL-2IL-5BCL-1（M）增殖法IL-4各类细胞因子检测的常用靶细胞细胞因子实验系统干扰因素IL-6B9（M）增殖法IL-4、IL-11BM60（H）增殖法IL-7Clone-IXN/2b（M）增殖法IL-8中性粒细胞（M、H）趋化法GM-CSFTF-1（H）增殖法IL-3、IL-5IL-6、IL-5TNF/L929（M、H）细胞毒法IFNwish（H）病变保护法IFN-、IFN-L929（M）病变保护法IFN-、IFN-检测标本的准备1、分离特定的产生细胞2、对产生细胞进行诱导、激活3、选择适当的收集时间显示检测结果1、细胞增殖状态的显示：放射性核素掺入法、胞内酶活性显示法活细胞染色法细胞荧光测定法2、细胞毒或细胞病变状态的显示活细胞染色法胞内酶活性显示法DNA断片测定法细胞因子的免疫学检测分泌型细胞因子的检测细胞内细胞因子的检测ELISPOT细胞内细胞因子检测技术激活膜抗原标记细胞内细胞因子标记细胞因子的分子生物学检测原位杂交技术Rt-PCR技术第三节常用细胞因子的检测方法一、IL-2的检测二、IFN-γ的检测三、TNF的检测待检样品（细胞上清）指示细胞（CTLL-2）按不同稀释度加入37ºC，16-20小时加入3HTdR（1-5Ci）37ºC，4-6小时收集细胞测定白细胞介素-2的测定示意图待检样品（细胞上清）指示细胞（L929）按不同稀释度加入37ºC，4小时37ºC，24-48小时弃取上清，加入VSV观察细胞病变（镜检或比色）干扰素的测定示意图肿瘤坏死因子的测定示意图待检样品（细胞上清）指示细胞（L929）按不同稀释度加入37ºC，24小时弃取上清，洗涤加入结晶紫染液，洗涤加入细胞裂解液，比色第四节细胞因子受体的检测一、细胞因子受体的类型二、细胞因子受体的检测细胞因子受体的类型膜型细胞因子受体分泌型细胞因子受体细胞因子受体的检测方法膜型细胞因子受体的检测配体检测法抗体检测法分泌型细胞因子受体的检测标记抗体检测法本章小结1、细胞因子的作用特点与检测特点2、细胞因子检测的原理与方法3、常用的细胞因子检测4、细胞因子受体的检测