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维生素C制剂的鉴别、杂质检查、含量测定2010级药学一班陶磊2010102135[摘要]维生素C(VitaminC，AscorbicAcid)又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素，能够治疗坏血病并且具有酸性。在化学结构上和糖类十分相似，有4种光学异构体，其中以L-构型右旋体生物活性最强。ChP2010收载有维生素C原料及其片剂、泡腾片、颗粒剂、泡腾颗粒剂、注射剂和复方制剂维生素C银翘片〔1〕。本文通过查阅文献资料总结了维生素C原料药及各种剂型的鉴别，杂质检查，含量测定，并结合实验室实际情况确定实验方法。[关键词]维生素C；鉴别；杂质检查；含量测定1仪器及试剂1.1仪器754型紫外可见分光光度计；高效液相色谱仪；电炉；250mL碘量瓶；分析天平；电子天平；碱式滴定管；移液管等。1.2试剂0.1mol/LHNO3、硝酸银试液（0.1mol/LAgNO3）、0.05mol/LH2SO4、0.1mol/LHCl、二氯靛酚钠、稀硝酸、草酸、氢氧化钠试液、氯化钙试液、盐酸、淀粉指示液、碘滴定液、0.05%亚甲蓝乙醇液、醋酸盐缓冲液（pH=3.5）、碱性酒石酸铜、标准铁溶液、标准铜溶液、醋酸铵、醋酸钠、醋酸、磷酸二氢钾,均为分析纯;甲醇、乙腈,为色谱纯;蒸馏水,维生素C对照品等。部分试剂的配制如下：（1）淀粉指示剂：称取0.5g可溶性淀粉，加水5mL搅拌均匀，缓缓加入100mL沸水中，边加边搅拌，煮沸2min，放冷，取上清液，应新鲜配制。（2）稀醋酸：量取冰醋酸6mL，加水定容至100mL。（3）碱性酒石酸铜：称取硫酸铜结晶6.93g,加水溶解定容至100mL；称取酒石酸碱钠34.6g,氢氧化钠10g,加水溶解定容至100mL；用时等量混合。2方法2.1鉴别2.1.1与硝酸银反应:除维生素C钙、维生素C钠、维生素注射液、维生素C银翘片，其余制剂均可用此方法。取维生素C0.2g,加水10mL溶解。取该溶液5mL，加硝酸银试液0.5mL,即生成金属银的黑色沉淀。2.1.2与二氯靛酚钠反应：除维生素C注射液和维生素C钠制剂，其余均可用此方法。（1）取维生素C0.2g，加水10mL溶解。取该溶液5mL，加二氯靛酚钠1～2滴，试液的颜色即消失。（2）取维生素C银翘片10片，除去糖衣，精密称定，研细，混匀，充分研磨，精密称定适量(约相当于维生素C0.2g)，置100mL量瓶中，加新煮沸的冷开水10mL、稀醋酸10mL，振摇使充分溶解，用水稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液适量，用氨试液调节pH至中性，加入适量活性炭（每30mL续滤液中加0.5g活性炭），加热至沸，滤过。取二氯靛酚钠试液数滴置点滴板，滴加滤液数滴，试液的蓝色即消退。2.1.3与其他氧化剂的反应：（1）取维生素C注射液，用水稀释制成lmL中含维生素Cl0mg的溶液，取4mL，加0.lmol/L的盐酸溶液4mL，混匀，加0.05%亚甲蓝乙醇溶液4滴，置40°C水浴中加热，3分钟内溶液应由深蓝色变为浅蓝色或完全褪色。（2）取维生素C钠水溶液4mL，加0.1mol/L盐酸溶液1mL，加碱式酒石酸铜试液数滴，加热，生成红色沉淀。2.1.4薄层色谱法：此方法主要用于维生素C制剂的鉴别。（1）取维生素C颗粒细粉适量（约相当于维生素Cl0mg)，加水10mL，振摇使维生素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取维生素C对照品，加水溶解并稀释制成lmL中约含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法，吸取上述两种溶液各2uL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（541)为展开剂，展开，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（254nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。（2）取维生素C注射液，用水稀释制成lmL中含维生素Clmg的溶液，作为供试品溶液；另取维生素C对照品，加水溶解并稀释制成lmL中约含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2uL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（541)为展开剂，展开，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（254nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。（3）取维生素C颗粒细粉适量（约相当于维生素Cl0mg)，加水10mL，振摇使维生素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取维生素C对照品，加水溶解并稀释制成lmL中约含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VB)试验，吸取上述两种溶液各2uL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（541)为展开剂，展开，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（254nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。（4）取维生素C泡腾颗粒细粉适量（约相当于维生素ClOmg)，加水10mL，振摇使维生素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取维生素C对照品，加水溶解并稀释制成lmL中约含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2uL，分别点于同一珪胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（541)为展开剂，展开，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（254nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。（5）取维生素C泡腾片细粉适量（约相当于维生素CLomg)，加水10mL，振摇使维生素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取维生素C对照品，加水溶解并稀释制成lmL中约含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2uL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（541)为展开剂，展开，晾干，立即（1小时内）置紫外光灯（254nm)下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。2.1.5紫外光谱法：维生素C在0.01mol/L盐酸溶液中在243nm波长处有惟一的最大吸收，可采用此方法进行特征鉴别。2.1.6红外光谱法：维生素C的原料药的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集450图）一致。维生素C的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集1039图）一致。维生素C的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集451图）一致。2.2杂质检查ChP2010规定应检查维生素C及其片剂、注射剂的澄清度与颜色，对维生素C原料中的铜、铁离子进行检查，对维生素C及其注射液进行草酸检查。2.2.1溶液的澄清度与颜色检查（1）取维生素C供试品3.0g，加水15mL，振摇使溶解，溶液应澄清无色；如显色，将溶液经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法，在420nm的波长处测定吸光度，不得过0.03。维生素C制剂在加工过程中有色杂质增加，限量比原料药宽一些，维生素C片的测定波长为440nm。（2）取维生素C注射液，用水稀释制成每lml中含维生素C50mg的溶液，照紫外-可见分光光度法，在420nm的波长处测定，吸光度不得过0.06。（3）取维生素C细粉适量（相当于维生素Cl.0g)，加水20mL，振摇使维生素C溶解，滤过，滤液照紫外-可见分光光度法,在440nm的波长处测定吸光度，不得过0.07。（4）取维生素C钙3.0g，加水30mL使溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法，在420nm的波长处测定吸光度，不得过0.06。（5）取维生素C钠l.0g，加水10mL使溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，经4号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法，在420nm的波长处测定吸光度，不得过0.06。2.2.2草酸的检查（1）取维生素C原料药0.25g，加水4.5mL,振摇使维生素C溶解，加氢氧化钠试液0.5mL、稀醋酸lmL与氯化钙试液0.5mL，摇匀，放置1小时，作为供试品溶液；另精密称取草酸75mg，置500mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，加稀醋酸1mL与氯化钙试液0.5mL，摇匀，放置1小时，作为对照溶液。供试品溶液产生的浑浊不得浓于对照溶液（0.3%)。（2）取维生素C注射液，用水稀释制成每1mL中含维生素C50mg的的溶液，精密量取5mL，加稀醋酸1mL与氯化钙试液0.5mL，摇匀，放置1小时，作为供试品溶液；精密称取草酸75mg，置500mL量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，加稀醋酸1ml与氯化钙试液0.5mL，摇匀，放置1小时，作为对照溶液。供试品溶液产生的浑浊不得浓于对照溶液（0.3%）。（3）维生素C钠0.25g，加水5.0mL，振摇使溶解，加稀醋酸lmL与氯化钙试液0.5mL，摇匀，放置1小时，作为供试品溶液；精密称取草酸75mg，置500mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，加稀醋酸lmL与氯化钙试液0.5mL,摇匀，放置1小时，作为对照溶液。供试品溶液产生的浑浊不得浓于对照溶液（0.3%)。2.2.3铁、铜离子的检查（1）取维生素C原料药5.0g两份，分别置25mL量瓶中，一份中加0.lmol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀,作为供试品溶液（B)；另一份中加标准铁溶液（精密称取硫酸铁铵863mg，置1000mL量瓶中，加lmol/L硫酸溶液25ml，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL,100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀）1.0mL，加0.lmol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（A)。照原子吸收分光光度法，在248.3nm的波长处分别测定，应符合规定[若A和B溶液测得吸光度分别为a和b，则要求b(a-b)]。（2）取维生素C原料药2.0g两份，分别置25mL量瓶中，一份中加0.lmol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（B）;另一份中加标准铜溶液（精密称取硫酸铜393mg，置1000mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀）1.0mL，加0.lmol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(A)。照原子吸收分光光度法,在324.8nm的波长处分别测定，应符合规定[若A和B溶液测得吸光度分别为a和b，则要求b(a-b)]。2.3含量测定目前已有一些文献综述了对维生素C的测定方法,常用的方法有光度法〔2-3〕、电化学法、滴定法、酶法〔4〕、色谱法〔5〕、差示旋光法等。2.3.1碘量法：ChP2010采用本法对维生素C原料、片剂、颗粒剂、泡腾颗粒剂、泡腾片、注射剂及维生素C银翘片进行含量测定。为消除辅料对测定的干扰，滴定前要进行必要的处理。如片剂溶解后应滤过，取续滤液测定；注射液测定前应加丙酮2mL，以消除抗氧化剂亚硫酸氢钠对测定的影响。（1）取维生素C原料药约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100mL于稀醋酸10mL使溶解，加淀粉指示液lmL,立即用碘滴定液（0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪，每lmL碘滴定液（0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。（2）取维生素C片20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素C0.2g)，置100mL量瓶中，加新沸过的冷水100mL与稀醋酸10mL的混合液适量，振摇使维生素C溶解并稀释至刻度，摇匀，迅速滤过，精密量取续滤液50mL，加淀粉指示液lmL，立即用碘滴定液（0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并持续30秒钟不褪。每lmL碘滴定液（0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。（3）精密量取维生素C注射液适量（约相当于维生素C0.2g)，加水15mL与丙酮2mL，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4mL与淀粉指示液lmL，用碘滴定液（0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并持续30秒钟不褪。每lmL碘滴定液（0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。（4）取维生素C银翘片10片，除去糖衣，精密称定，研细，混匀，充分研磨，精密称定适量(约相当于