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共三页1江苏师范大学制药工程专业《细胞工程》本科函授试卷答案卷命题人：罗丽审核人：一、名词解释（每题3分，共30分）1.原代培养原代培养也叫初代培养，是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。2.动物细胞大规模培养技术是指在人式条件（除满足培养过程必需的营养要求外，还要进行pH和溶解氧的最佳控制）下，在细胞生物工程反应器中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。3.愈伤组织指在人工培养基上，由外植体的表面形成的一团不定形的排列疏松的薄壁细胞。4.脱分化指在植物组织细胞培养中，一个成熟细胞或已分化细胞转变为未分化状态的过程。5.固定化培养固定化细胞是指固定在载体上，在一定的空间范围内进行生命活动的细胞。以这种方式进行的细胞培养叫做细胞固定化培养。6.植物脱毒由人工用物理、化学和生物方法将植物体组织器官病原体消除，以使这些组织器官生成完整植株。7.人工种子是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。8.永久细胞系大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖，当超过有限世代后，在体外永久存活下来发育成永久细胞系或称连续细胞系。9.细胞同步化在一般培养条件下，群体中的细胞处于不同的细胞周期时相之中。为了研究某一时相细胞的代谢、增殖、基因表达或凋亡，常需采取一些方法使细胞处于细胞周期的同一时相，这就是细胞同步化技术。10.体细胞胚离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞）。二、填空题（每空0.5分，共10分）1.体外培养（或组织培养）主要包括_细胞培养_，_组织培养_，和_器官培养_三种类型。2.培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。3.细胞培养中塑料制品中主要采用＿射线消毒＿方法进行灭菌，人工合成培养基和酶液采用＿＿＿过滤消毒＿＿＿方式进行灭菌。4.BSS中文名称为＿＿平衡盐溶液＿，具有维持渗透压、稳定PH等作用，常用作洗涤组织和细胞以及配置各种培养用液的基础溶液。5.目前，较常用的消化试剂有胰蛋白酶、胶原酶、EDTA消化液。6.细胞冻存时DMSO常用的浓度为10%的浓度。7.在动物细胞大规模培养中，能为细胞提供贴附表面的培养目前主要有旋转瓶、中空纤维、细胞工厂和微载体等。8.无论培养何种细胞，就操作方式而言，深层培养可分为分批式、流加式、半连续式、连续式和灌注式五种发酵工艺。9.肿瘤细胞培养过程中常用的促细胞生长因子有胰岛素、氢化可的松、雌激素。三、选择题（每题1分，共20分）12345678910ABDDBDDBDB11121314151617181920CDACAADCDC四、判断题（每题1分，共10分）12345678910××√√×√×√√×五、问答题（每题10分，共30分）1.配制植物细胞培养基时为什么要配制母液?如何配制培养基的各种母液？对各种母液浓缩的倍数有何要求？答：为使用方便和用量准确，配制培养基前常要配制母液。各种母液的配制方法如下：①共三页2大量母液，按照配方用量，各种化合物扩大10倍称取后，蒸馏水溶解混合并定容至1000ml；②微量元素，按配方用量100倍，蒸馏水溶解、稍加热，按一定顺序混合并定容至1000ml；③铁盐母液，分别称取一定量硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠配成100倍浓度螯合态铁盐混合冷却定容至1000ml；④有机物质母液，按配方用量100倍分别称取，溶解后定容至100ml；⑤植物激素母液，一般配制浓度0.1~2mg/ml。生长素类（IAA、NAA、IBA）ＮＡＯＨ或酒精溶解后定容所需体积。细胞分裂素类（ＫＴ、６－BA）少量HCL加热溶解后加水定容。2.常见的植物细胞生物反应器有哪些？各有何优缺点？答：常见的植物细胞生物反应器有搅拌式、非搅拌式（气升式、鼓泡式），另外还有植物细胞固定化反应器等。一、搅拌式生物反应器优点：混合性能好、传氧效率高、操作弹性大、可用于细胞高密度培养等缺点：由于植物细胞对搅拌时所产生的剪切力的忍耐性较差，传统的搅拌式反应器通常易对植物细胞产生伤害。搅拌式生物反应器搅拌轴和罐体问的轴缝往往容易因泄漏造成染菌源，二、非搅拌式生物反应器1．气升式生物反应器优点：具有结构简单、没有泄漏点、剪切力小、氧传递速率较高在长期的植物细胞培养过程中容易保持更好的无菌状态且运行成本和造价低等优点。缺点：操作弹性小，低气速在高密度培养时，其混合效果较差，植物细胞生长较慢通气量的提高会导致产生泡沫和较高的溶解氧，且泡沫会夹带一些有用的挥发性物质(女C02等)，这会严重影响植物细胞的生长。2．鼓泡式生物反应器优点：没有活动的搅拌装置，整个系统密闭，容易长期保持无菌操作，气体从底部通过喷嘴或孔盘穿过液池实现气体的传递和物质的交换，培养过程中无需机械能的消耗。缺点：混合性能差，对氧的利用率较低，对于高密度及教度较大的培养体系，反应器的培养效率会降低。为增加氧含量需采用较大通气量，而增加通气量，所产生的湍流会提高反应器的剪切力，这样会造成对细胞生长的不利影响。3．膜反应器优点：具有容易控制、易于放大、产物易分离、简化了下游工艺等特点缺点：由于膜材料的限制，构建膜反应器的成本较高3.常用的排除成纤维细胞的方法有哪些？简述其操作过程。机械刮除法、反复贴臂法、消除排除法机械刮除法：a.制备无菌刮头b.标记c.刮除d.用Hanks液冲洗一两次，冲洗被刮掉的细胞e.注入培养液继续培养，如发现仍有成纤维细胞残留，可重复刮除至完全除掉为止反复贴臂法：a.细胞生长达一定数量后，倒出原瓶内培养液，用以蛋白酶消化后，Hanks液冲洗2次，加入不含血清的培养液，反复吹打制成细胞悬液b.取三个培养瓶，分别编号为A、B、C先把悬液接种入A培养瓶中，然后置温箱中静止培养5~20min，取出并轻轻倾斜培养瓶，让液体集中在培养瓶的一个角后，慢慢吸出全部培养液，，再转接到B培养液中；向A瓶中补充少许完全培养液置温箱中继续培养。c.B培养瓶中细胞培养5~20min后，按A瓶的处理方法，把培养液注入C培养瓶中置温箱中培养；再向B瓶中补加完全培养机制温箱中继续培养。