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1第六章合生元的筛选试验研究第一部分合生元对樱桃谷肉鸭生产性能、免疫器官指数和血清指标的影响合生元作为一种促生长、无副作用的添加剂，被广泛应用替代抗生素。国内外研究发现，寡糖、益生素及其合生元等微生态制剂能够调控畜禽消化道微生态环境，影响氮、硫、钙、磷等的消化吸收及其后肠的发酵，进而提高其生产性能和改善机体健康状况。合生元(probiotics)是由活菌制剂和多糖组成，其中活菌制剂能在动物肠道内大量繁殖，通过产生抗菌物质、营养竞争、占位竞争，增加有益微生物数量，调节胃肠道微生物平衡，保持胃肠道功能正常，从而加强肠道微生物区系的屏障功能和增强非特异性免疫，达到预防疾病和提高生产性能的目的。本试验通过研究合生元对樱桃谷肉鸭生产性能、免疫器官指数和血清指标的影响，为进一步合理利用合生元提供理论依据。1材料与方法1.1试验材料复合芽孢菌为第一期试验中经筛选性能表现最佳的复合芽孢II组，以枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌为主要菌种，产品活菌总数大于1.0×1010CFU/g。1.2试验动物及日粮选取1日龄樱桃谷肉鸭750羽(由湖北春江鸭厂提供)，随机分成5组，每组5个重复，每重复30羽，试验设计方案见表1。试验为期35d，其中1~14d为试验前期，15~35d为试验后期。各期基础日粮配方见表2。表1试验设计方案组别（Groups）日粮（Diets）对照组（Control）基础日粮（Basaldiet）抗生素组（Flavomycin）B+4mg/kg黄霉素复合芽孢组（Probiotic）B+2mg/kg黄霉素+1.0×106cfu/g复合芽孢菌2合生元Ⅰ（SynbioticⅠ）B+2mg/kg黄霉素+0.7×106cfu/g复合芽孢菌+0.5g/kg酵母细胞壁合生元Ⅱ（SynbioticⅡ）B+2mg/kg黄霉素+0.5×106cfu/g复合芽孢菌+0.3g/kg酵母细胞壁+0.15g/kg核苷酸表2基础日粮的组成及营养水平(风干基础)%Table1-2Compositionandnutrientlevelsofthebasaldiet日粮成分Ingredients1～2Week3～5Week营养水平1～2Week3～5Week玉米Corn31.539.0代谢能ME(MJ/kg)12.0011.60次粉Wheatmiddling22.022.0粗蛋白CP20.0016.5米糠Ricebran8.012.0钙Ca0.900.90大豆粕Soybeanmeal27.013.5有效磷AP0.400.4菜籽粕Rapeseedmeal2.05.0蛋氨酸Met0.550.30棉籽粕Cottonseedmeal02.95蛋氨酸+胱氨酸Met+Cys0.900.65鱼粉Fishmeal1.50赖氨酸Lys1.000.80磷酸氢钙CaHPO41.41.60食盐NaCl0.30.4石粉Limestone1.11.1食盐NaCl0.30.4植物油Vegetableoil00.5豆油Soybeanoil3.00赖氨酸Lys00.05蛋氨酸Met0.20.07防霉剂Mildewpreventive0.10.1预混料Premix1.00.9*注：肉鸭预混料为每千克全价料提供：维生素A，10000IU；维生素D3，1000IU；维生素E，15IU；维生素K3，1.5mg；维生素B1，2mg；维生素B2，4mg；维生素B6，8mg；维生素B12，0.02mg；烟酸，30mg；泛酸钙，8mg；叶酸，0.5mg；生物素，0.025mg；氯化胆碱，0.4g；铜，8mg；铁，45mg；锰，60mg；锌，35mg；碘0.35mg；硒，0.25mg。1.3饲养管理3试验鸭于室内同一环境下散养。每个重复1栏，24h光照，每天喂料2次，自由采食和饮水，以重复为单位每天记录饲料投放量和剩余量，每天清洗饮水器和料槽1次。免疫接种及疾病预防、消毒按常规方法进行。1.4样品采集及测定试验的第1天、第21天和第42天分别对樱桃谷肉鸭进行空腹称重，计算均重、平均日增重和料重比，并于第21天每重复中随机选取2只中等大小的公鸭屠宰，分离免疫器官(脾脏、法氏囊和胸腺)并称重，计算胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数，同时采集血液。免疫器官指数=体重（kg）免疫器官重（g）采集的血液迅速分离血清，用自动生化分析仪测定血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)、血糖(GLU)以及谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）、碱性磷酸酶（AKP）的含量。1.5数据处理全部数据均采用SPSS17.0统计软件进行单因子方差分析(One-wayANOVA)，试验数据用平均数±标准误表示。2结果与分析2.1合生元对樱桃谷肉鸭生产性能的影响对樱桃谷肉鸭生产性能的影响结果见表3。由表3可见，在樱桃谷肉鸭前期添加合生元Ⅱ后的平均日增重比空白组与抗生素组均提高了5.75%（p0.05）和4.22%（p0.05）;复合芽孢菌与合生元Ⅰ在前期的平均日增重差异不显著（p0.05）。在生长后阶段，合生元Ⅱ组的平均日增重较空白组提高了2.80%，与其他几组差异不显著。在料肉比方面，在生长前期，合生元Ⅱ较空白组有所下降，其他三组料肉比差异不显著，生长后期料肉比未表现出明显优势，但与空白组相比，有下降趋势。全程死亡率均低于5.0%，其中合生元Ⅰ组全程无死亡率。表3合生元对樱桃谷肉鸭阶段性生产性能的影响组别平均日增重（g）平均采食量（g）料肉比1~14d15~35d1~14d15~35d1~14d15~35d对照组（Control）37.36±5.5268.41±3.5454.43±4.25163.84±6.351.457±0.022.395±0.074抗生素组（Flavomycin）37.91±6.1270.45±4.2756.68±6.30158.09±6.871.495±0.022.244±0.08复合芽孢菌（Synbiotic）38.53±3.2170.81±6.3556.83±6.12163.00±5.321.475±0.042.302±0.18合生元Ⅰ（SynbioticⅠ）38.23±5.6369.46±2.5056.62±5.84165.59±5.941.481±0.012.384±0.06合生元Ⅱ（SynbioticⅡ）39.51±3.7470.33±2.4956.97±5.34165.84±7.121.442±0.052.358±0.09表4合生元对樱桃谷肉鸭全程生长阶段生产性能的影响组别平均日增重（g）平均采食量料肉比全程死亡率（%）对照组（Control）58.54±2.45127.62±5.212.180±0.04ab5.00±0.05抗生素组（Flavomycin）60.41±1.35128.91±6.142.134±0.02ab2.50±0.20复合芽孢菌（Synbiotic）60.84±3.49129.89±8.242.135±0.03ab1.25±0.01合生元Ⅰ（SynbioticⅠ）63.51±2.67136.04±8.652.142±0.02ab0.00±0.00合生元Ⅱ（SynbioticⅡ）63.83±2.99128.81±7.462.018±0.02a0.00±0.002.2合生元对樱桃谷肉鸭免疫器官指数的影响合生元对樱桃谷肉鸭免疫器官指数的影响结果见表5。在胸腺指数方面，与空白对照组和抗生素组相比，三个实验组均有不同程度地提高，其中添加复合芽孢菌和合生元Ⅱ，在刺激胸腺发育方面表现出良好的性能。在法氏囊指数方面，实验结果表明合生元Ⅰ能有效刺激免疫器官的发育，增强了免疫力，这与养殖试验中的死亡率相符合。在脾脏指数方面，三组实验组与空白组相比，结果差异不显著。以上结果表明，合生元Ⅱ组均有不同程度的刺激免疫作用，刺激免疫的主要器官在胸腺与法氏囊，其原因可能与鸭的日龄有关。表5合生元对免疫器官指数的影响（g/kg）组别对照组（Control）抗生素组（Flavomycin）复合芽孢菌（Probiotic）合生元Ⅰ（SynbioticⅠ）合生元Ⅱ（SynbioticⅡ）胸腺指数2.40±0.312.38±0.542.70±0.692.48±0.283.02±0.50法氏囊指数1.04±0.251.17±0.110.91±0.141.24±0.271.21±0.415脾脏指数0.88±0.170.71±0.060.84±0.160.83±0.190.89±0.21注：同行小写字母不同者表示差异显著(P0.05)。2.3合生元对樱桃谷肉鸭血液生化指标的影响合生元对樱桃谷肉鸭血液生化指标的影响结果见表6所示。表6合生元对血清指标的影响组别对照组（Control）抗生素组（Flavomycin）复合芽孢菌（Probiotic）合生元Ⅰ（SynbioticⅠ）合生元Ⅱ（SynbioticⅡ）总蛋白TP28.13±3.5828.18±4.1128.98±2.3732.35±4.5222.85±13.42清蛋白ALB10.85±1.4610.68±1.9410.25±0.9311.80±1.769.97±1.67球蛋白GLB17.28±2.2717.50±2.1718.73±1.4820.55±2.7818.57±0.59尿素氮BUN0.56±0.170.62±0.160.58±0.180.52±0.360.59±0.04血糖GLU8.41±1.617.75±1.298.84±2.018.80±1.958.64±0.47甘油三脂TG0.94±0.090.7±0.281.48±0.631.06±0.351.17±0.88总胆固醇TC4.06±1.204.92±0.584.19±0.255.44±0.974.12±0.36天门冬氨酸氨基转移酶AST27.75±9.1157±32.1842.75±13.8443.25±18.7137.33±9.07碱性磷酸酶ALP768.75±178.70845.5±200.481317±518.271017.5±360.49949.33±199.70丙氨酸氨基转移酶36±4.4050.75±19.0045.25±11.4453.5±16.1345.25±5.6796ALT血液生化指标是反映机体各种生理活动的敏感指标。肝脏是蛋白质代谢非常旺盛的器官，是合成血清蛋白的主要场所，除全部血清蛋白外，还有部分γ-球蛋白和β-球蛋白也在肝内合成。血清蛋白是机体蛋白质的一个来源，可用于修补组织和提供能量。血清球蛋白则是源于B细胞转化为浆细胞后分泌而成，能反映机体的抵抗力。总蛋白是血清蛋白和血清球蛋白之和。总蛋白在一定程度上代表了日粮中蛋白质的营养水平及动物对蛋白质的消化吸收程度。本试验中，复合芽孢菌、合生元Ⅰ组和合生元Ⅱ组的总蛋白含量均高于空白对照组（p0.05），说明饲料中添加微生态制剂对机体的蛋白代谢具有一定的改善作用，但各组由于添加量不一样，导致总蛋白含量差异显著，这可能与益生菌单位区域的活菌数量及有益菌本身生理特性有关。在总胆固醇和甘油三脂2个指标上，添加微生态制剂并未显著降低其水平。这个结果可能与不同的试验条件有关，在不同季节产生的试验结果变异较大，如何提高微生态制剂作用效果的稳定性应成为本领域今后研究的一个重点。正常动物的血糖一般保持相对恒定，血糖水平受胰岛素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、胰高血糖素、甲状腺素和生长素的调节，在临床上，血糖浓度的测定常用于内分泌腺功能的检查。在本试验中，复合芽孢菌组、合生元Ⅰ组和合生元Ⅱ组的血糖含量与空白对照组相比有所上升（p0.05），导致血糖含量增高的原因可能是由于其分泌的淀粉酶增强了鸭对淀粉的消化率所致，也可能是由于微生态制剂的某些活性因子通过某种方式刺激了肾上腺素、胰高血糖素等升糖激素分泌增加所致。正常情况下，细胞内酶（如谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶）由于细胞膜的屏障作用，不易逸出，仅由于细胞的不断更新破坏而少量释入血液。只有当细胞因各种因素（如急性应激）而受到损伤时