病理技术员培训

病理技术员培训概述病理学是研究疾病的病因、发生机制、病理变化、结局和转归的一门学科。病理学是一门基础学科，但又是联系基础医学和临床医学的桥梁。包括病理解剖学和病理生理学。病理学常用研究方法：1.尸体解剖2.活体组织学检查3.脱落细胞学检查4.动物实验5.组织和细胞培养1.尸体解剖：遗体→病理解剖、观察→正确诊断、查明死因、解释临床症状和体征等临床现象及时发现和确诊新疾病，特别是传染病提供第一手科研材料2.活体组织学检查：局部手术、嵌取、穿刺针吸→肉眼和镜下病理观察→良恶性肿瘤诊断和疑难病例确诊乳腺癌：对乳房肿块诊断不清，怀疑非实质病变者可采取穿刺针吸小块组织做病理检查，方法简单诊断可靠率高，尤其对鉴别诊断有重要价值。如通过各种方法均未取得结果而仍诊断不清，直接切取活体组织检查。前列腺癌：直肠指诊DRE，在前列腺癌的筛选检查中必不可少且简单、经济、方便和穿刺活检以早期发现前列腺癌。前列腺癌的确诊必须通过病理活检证实,经直肠超声引导下前列腺穿刺活检术操作简单、准确性高、安全、并发症少。胃癌：3.脱落细胞学检查：肿瘤的普查和早期发现、早治疗（1）宫颈癌：阴道脱落细胞检查为早期最有效的检查（2）乳腺癌：乳头溢液者，可收集液体涂片送病理查找癌细胞。（3）肺癌：反复痰中查癌细胞，获阳性结果，有确诊价值（4）食道癌：食管拉网细胞学，初筛，承受度和敏感性较低，约束了其广泛使用（5）膀胱癌：尿脱落细胞检查：是一种简单易行又无创伤的膀胱癌检查方法，对膀胱癌的诊断有重要价值，膀胱癌病人约85%尿脱落细胞检查可呈阳性。•5.动物实验:•6.组织和细胞培养：第一节标本制作的常规工作•1.清洁工作：工作实验室要干净整洁，固体废弃物要存放于医用垃圾袋内，防止污染，保持水管通畅。•2.接受标本工作：核对检查申请单、送检标本及标志，对于送检的微小标本必须认真核对容器内或滤纸上是否有组织及数量，容器无名字的应立即写上名字；检查标本固定液是否充足，按顺序存放。•3.标本登记工作：将检查后的标本登记在登记卡，包括验收日期和病理编号，编号写在申请送检单右上角，按顺序排放，为取材做准备。•4.标本取材工作：先核对再取材，取材后在按编号放置，脱水盒背面详细记录取材情况，并写上日期和签上取材人姓名。第一节标本制作的常规工作•5.取材后标本进行固定、脱水、包埋、切片、染色。•6、染色后贴标签送诊断室观察，诊断发出后及时登记诊断结果，切片蜡块及时归档。•7.存放溶液试剂及染料的容器必须及时贴标签，注明名称和配制日期。•8.配制强酸试剂、挥发易燃试剂注意安全。•9.室内不用的电器、灯火须及时关闭。•10.染色液、脱水液如有沉渣，应过滤后备用。第二章组织切片程序•冰冻切片石蜡切片火棉胶切片︳↓︳——————————→先取材←——————————↓再固定↓冰冻←————————-------冲水∣↓∣脱水———————————∣↓↓∣透明乙醚酒精∣↓↓∣浸蜡胶液渗透∣↓↓∣石蜡包埋火棉胶包埋↓↓↓冰冻切片切片切片↓↓↓染色染色染色↓↓↓封固封固封固一、标本取材•切取病变组织或拟研究的组织•应选择病变或可疑病变的组织。必要时选取病变与正常组织交界处。•切取标本的原则是求准而不是求量多，所以切取组织宜小不宜大，以不超过24x24mm2为佳，厚度以3—5mm为度，过大过厚会影响对标本的固定，另方面也影响切片的制作。病理科标本检查和取材制度•1、标本的检查和取材由病理医师承担。•2、病理医师通过肉眼仔细观察标本，判断病变的部位、大小、浸润深度及与切缘和周围组织的关系，然后挑选有代表性的部位取材，做病理切片。取材必须遵从规范要求，以保证诊断的准确性，提供准确的TNM分期信息和其他与治疗、估计预后相关的信息。•3、取材前应核对申请单编号与标本的编号、标本的份数是否相符，申请单与标本应有双标记和双核对，并仔细阅读申请单中的内容，初步判断病变的性质，做到对病变心中有数。•4、标本检查和取材应按照有关的操作规范进行；应当对大体标本进行细致的观察，并有相应的文字记录。•5、取材结束后必须核对组织块，并在取材记录单上标示；随后将记录单交病理技术人员，供切片染色后核对使用。•6、组织块应该每块分别编号，并做到一一对应。•7、取材后剩余的标本应妥善保存，保存至病理报告发出后2周时间。•8、剩余的病理标本和标本容器属于医疗废弃物，应按照“医疗废物”的规定处理，不可随意丢弃。•9、科室质量与安全管理小组定期对取材质量进行自查，及时总结和发现问题，制定措施，持续改进取材质量。标本取材原则：•1.应详细描述标本的数量、大小（mm、cm、多量时聚堆测量)、形状、色泽、和质地等•2.小量小标本，应全部取材•3.多量小标本，取材后剩余者应保管好备用•4.粘膜和皮肤应“立埋”以便观察各层结构大标本取材：•记录标本的手术类型•描述和记录标本大小（三维长度、形状、色泽、表面、质地等）球形标本可测直径•切面：沿大面切开，描述和记录其特点，如实性或囊性，各占比例，色泽、质地、出血坏死，囊壁厚度，内容物颜色等•前列腺、甲状腺、胰腺等脏器应间隔一定距离做多个平行破面，以免漏掉微小肿瘤.•取代表性区域，并与正常组织交界处取材•完整瘤体要带包膜，如甲状腺、乳腺•取材块的大小2cmx1.5cmx0.3cm•编号：数量、剩余组织记录“留”，全部取材时记录（全包）一包等，微小组织试做•重取材要记录活体小组织(小标本)取材：组织标本体积小,在取材时应特别小心,用伊红让标本着色,并用插镜纸包裹,以防丢失,应标明粒数.多瓶组织应将附号标清楚.标本的来源与收集(一)1、临床活检2、尸体解剖3、实验动物（二）1、检查申请单的姓名，标本的件数是否与之相符合。2、标本是否符合要求。取材注意事项1.及时、尽可能新鲜2.迅速固定、冷藏3.刀要快，不要挤压组织4.注意研究目的培养定量对比观察临床诊断临床病理取材注意事项1、检查申请单的姓名是否与标本标注的姓名相符2、检查申请单所列标本是否与实际标本吻合。3、检查申请单所列标本件数是否与实际标本件数吻合。二组织固定概念：用化学试剂保持尸体、器官、组织和细胞固有形态结构的过程谓固定所用的化学试剂谓固定剂或固定液。目的：防止自溶、腐败，保持良好结构原理：使组织及细胞内蛋白凝固；使有关成分沉淀、变性，成为不溶性物质方法：浸泡灌注：局部灌注、全身灌注蒸汽熏蒸固定的作用固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，终止或减少外源性酶和内源性酶的反应，防止细胞自溶，以保持组织的固有形态和结构，更重要的是保存组织或细胞的抗原性，不但使抗原不致失活，还要使抗原不发生弥散，以免在免疫组化染色时产生过深的背景。固定的目的1、能防止细菌的腐蚀和抑制组织的自溶2、能凝固或沉淀细胞内或组织液的蛋白等3、使组织硬化，便于切块4、对某些具有传染性的标本，能防止其扩散5、保存组织细胞中固有的物质6、保存好大体标本7、可增强染色固定时间:常规组织病理学:可长时间固定细胞病理学：可长时间固定细胞化学：不宜过长，约1小时为宜固定后处理：充分洗涤固定时间越长，洗涤时间也应相应增加固定的注意事项①一般应在离体30分钟内固定,越及时越好,并将组织上的血液,分泌物冲洗干净②固定剂的量一般不少于组织块总体积的4倍以上，一般为10--15倍，容器勿过小。③固定的时间应视组织的种类和大小决定,一般小组织4-6小时,大组织18-24小时或更长。④有特殊要求的须用特殊的固定剂;超微结构观察：低温固定⑤不同组织在固定时应注意特殊的处理方法⑤不同组织在固定时应注意特殊的处理方法•为防止组织因固定剂作用而发生变形，对软薄组织如神经、肌腱、肠系膜等应先平摊鱼吸水纸上，在投入固定剂中，可防止蛋白质凝固而引起的扭曲变形；•对含气体而浮于液体表面的组织如肺，可连以重物使其下沉，或在组织上覆盖脱脂棉，以防止组织表面干燥。固定液的选择1、尽量选择对组织收缩少，渗透快的固定液2、选择较通用的固定液，既能做好HE的染色，又能做免疫组化标记3、特殊的病例选择特殊的固定液如：狂犬病——丙酮磷酸酶——丙酮糖原——无水酒精•。固定液的分类Ⅰ.醛类：甲醛、戊二醛、多聚乙醛、丙稀醛等Ⅱ.氧化剂类：四氧化饿（奥酸）、高锰酸钾、重鉻酸钾等Ⅲ.蛋白变性类：醋酸、甲醇、乙醇等Ⅳ.其它：氯化汞，苦味酸等。固定液甲醛溶液：福尔马林，Formeldehyde4％甲醛，或10％福尔马林40％甲醛用于无特要求的组织常规固定乙醇（EthylAlcohol）:95%用于细胞涂片常规固定，糖原固定乙醇乙醚混合固定液:95%：95%乙醇+95%乙醚（1:1）用于细胞涂片巴氏染色固定液的使用（一）甲醛（formaldehyde）一般市售的含37-40%，平时使用都把它看为100%。它由甲醛气体饱和于水而成。比重为1.12，有一股刺鼻的气味。甲醛与组织蛋白质类的反应是多样而复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合。如近来的抗原修复就是认为组织中的蛋白与醛产生交联蛋白后，要将它们显示出来，就必须应用温度高达92℃以上的抗原修复液，才能将其交联的醛键打开，与后来的抗体结合，将其表达出来。甲醛的优点：1、收缩较小2、固定较为均匀，穿透力强3、能使组织硬化并富有弹性4、能保存脂肪及脂类物质5、成本较低甲醛的缺点：1、成分不纯，含少量的甲醇，影响酶反应2、含少量的甲酸，易产生色素3、不能固定尿酸和糖类物质4、易挥发、污染环境5、易产生醛基、封闭抗原应用甲醛配成的固定液有：1、缓冲福尔马林固定液（neutralbufferedformaaldehyde）NaH2PO4·H2O4gNa2HPO4（无水）65g蒸馏水900ml甲醛100ml2、10%福尔马林固定液甲醛10ml自来水90ml3、10%福尔马林盐固定液甲醛10ml自来水90mlNaCl0.9g4、Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液75ml甲醛25ml冰醋酸5ml5、Zonker氏液氯化汞5g重铬酸钾2.5g硫酸钠1g水100ml注：该固定液固定时间为16-24h，染色前应用碘酒除去汞盐的沉淀，否则会影响染色后切片的观察。（二）酒精（alcohol）有无水酒精（99.8%）和工业酒精（95%）在病理技术方面，酒精是一种重要的试剂，它可配成不同的浓度来进行脱水，如：60%、70%、80%、90%、95%等，在切片染色前，用酒精来除去二甲苯，在染完色后则用其来脱水。应当注意的是，组织脱水时应根据组织的大小、器官或部位、取材的大小来确定脱水时间，一般认为浓度越低，脱水时间可以相对延长，如70%可用来长期保存标本，但如果在100%的酒精里时间就不能太长，否则组织易脆不利于切片。酒精可以与其它试剂混合，配成混合固定液，如AAF固定液。酒精的优点：1、可以保存糖原和尿酸结晶。2、能在任何比例的情况下与水混合。3、能溶解苯类物质，为染色法中的桥梁试剂。4、能脱去切片上的水份。5、可配成混合固定液。6、可作为保存标本的固定液。7、可用来消毒。洒精的缺点：1、可溶解脂类及脂肪物质。2、可沉淀白蛋白，球和核蛋白。3、渗透力不强。4、可脱去某些已着染切片的颜色。5、不作为单独的固定液。6、价格昂贵。三、石蜡包埋制样组织块脱水：逐级乙醇脱水透明：二甲苯浸蜡：65°C包埋：溶解蜡（一）脱水•脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂石蜡的渗入，这一过程称为脱水。•脱水剂：乙醇•一般情况下,应将大小标本分别脱水.标本脱水从低浓度开始,一般人标本从70%或75%乙醇,动物标本从50%乙醇开始。脱水后组织收缩、变脆。人工脱水程序(适应于3mm厚的组织块)1、30%酒精24h2、50%酒精24h3、70%酒精24h4、80%酒精24h5、90%酒精12h6、95%酒精4h7、95%酒精4h细小组织脱水程序（适合于胃、肠镜活检，肝、肺、肾穿刺活检的组织）1、80%酒精10-15min2、90%酒精10-15min3、95%酒精10-15min4、100%酒精10-15min5、二甲苯5-10min6、石蜡15-20min1、人工脱水法优点：（1）可根椐不同的组织选择最佳时间。（2）可避免细小的组织经