病理组织的免疫组织化学技术探讨

病理组织的免疫组织化学技术探讨【摘要】目的：探讨病理组织的免疫组织化学技术。方法：选取2013年1月-2015年1月我院收治的肿瘤患者50例，分别采用活检穿刺和免疫组织化学技术进行检验，比较两种方法的检测阳性率。结果：经穿刺活检，50例患者中AFP、Glypican-3阳性的有32例，阳性率为64.0%，经免疫组织化学技术检验，47例患者的细胞组织呈现变异性，阳性率为94.0%，免疫组织化学技术检验的阳性率明显高于穿刺活检的阳性率，比较差异具有统计学意义（P0.05）。结论：病理组织中运用免疫组织化学技术进行诊断具有较高的准确性，将其和病理形态学诊断结合使用可以为患者疾病的诊断和治疗提供有效的依据，值得推广使用。【关键词】病理组织；免疫组织；化学技术免疫组织化学染色技术是通过抗原和抗体的结合的反应来确定被检测的细胞中是否存在特异性的抗体，从而对疾病进行诊断。将免疫组织化学技术运用到病理组织的诊断中，使我国的病理诊断水平又提高了一个层次，在诊断以及鉴别诊断方面都具有重要的意义[1]。我院以肿瘤患者50例为研究对象，采用免疫组织化学染色技术诊断，取得了满意的效果，现报道如下。1.资料与方法1.1一般资料选取2013年1月-2015年1月我院收治的肿瘤患者50例，分别采用活检穿刺和免疫组织化学技术进行检验，比较两种方法的检测阳性率。50例肿瘤患者中，其中女性有20例，男性有30例，年龄（24-61）岁，平均年龄（40.6±1.8）岁；其中转移性肿瘤26例，肝细胞肝癌19例，血管瘤8例，子宫癌13例。1.2方法活检穿刺：经过CT扫面确认病变位置，嘱咐患者在活检穿刺前5个小时之内禁食，在CT引导下经皮穿刺取得病理标本进行检验。免疫组织化学技术：取每例患者的一块组织，采用10%的中性缓冲甲醛固定液固定两小时，固定完成后用脱水也脱水1个小时，分别在透明液和浸蜡液中各放置一个小时，然后用石蜡包埋，采用常规的切片方法切片，切片的厚度为2um。将固定好的切片脱蜡，脱蜡后在室温下用3%的双氧水孵育10min，然后用蒸馏水洗涤3次，每次保持3min，之后用高压锅在110度环境下修复2min,用PBS洗液洗涤3次，每次5min，加入一滴一抗，在室温下孵育2个小时，接着用PBS洗液洗涤3次，每次5min，加入UltarsensitiveTM试剂之后在室温下孵育20分钟，再用PBS液洗涤，洗涤之后用DAB显色，采用蒸馏水冲洗，采用苏木素复染1个小时，采用梯度乙醇脱水，使用二甲苯透明，用中性树胶封固，再采用PBS作为阴性对照，染色呈现棕黄色为阳性。1.3统计学分析两组检验方法的统计方法为：采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计分析；计数资料采用χ2检验进行统计学分析，P0.05表示差异具有统计学意义。2.结果50例患者，经穿刺活检，AFP、Glypican-3阳性的有32例，阳性率为64.0%，经免疫组织化学技术检验，47例患者的细胞组织呈现变异性，阳性率为94.0%，免疫组织化学技术检验的阳性率明显高于穿刺活检的阳性率，比较差异具有统计学意义（P0.05）。3.讨论免疫组织化学染色是近年来发展起来的一种病理技术，是病理诊断中的一种常见方法，尤其在肿瘤的诊断中具有较高的实际价值。在免疫组织化学染色技术中，抗体是最基本也是最重要的材料，分为第一抗体和第二抗体，第一抗体是针对组织细胞中的靶细胞抗原或者目的抗原的抗体，与靶细胞中的抗原结合，而第二抗体是用来放大反应的，当第一抗体和抗原结合之后，再与第二抗体结合，第二抗体是可见的，方便检验。免疫组织化学显色是一种酶促反应，抗原抗体的复合物的碱性磷酸酶和过氧化物与底物反应，就生产了一种由颜色的复合物，沉淀在组织或者细胞中的抗原位置。免疫组织化学染色主要包括固定、染色、切片、脱色等过程，整个过程的操作虽然比较简单，但是却容易受到外界环境因素的影响，导致病理诊断中出现一定的误诊现象，所以这就要求操作人员在操作过程中应该严格按照标准操作规程进行操作[2]。值得注意的是，在整个染色过程中，切片应该一直保持湿润，在孵育的过程中，孵育盒中的蒸馏水量要合理的放置，孵育盒要放平，保证抗体液体在组织上的均匀性，避免抗体流到组织的一旁造成假阴性的结果。在加抗体的时候，应该选择单克隆的抗体，因为所有组织标本的来源基本不同，抗原的含量不一样，细胞分化程度也是不一样的，所以显色反应的时间也是不一样的[3]。免疫组织化学技术是一门新兴的技术，还存在着一些不完善的地方，例如在检查瘤细胞的时候，瘤细胞内可能含有多种抗原，而抗体只会对特异性的抗原反应表达，所以很多时候会受到交叉反应的干扰，所以免疫组织化学技术在病理诊断中也具有一定的局限性，但是由于技术人员在操作上的失误导致的误诊是可以避免的。但是不可否认的是，这并不影响免疫组织化学技术的发展。免疫组织化学技术在肿瘤患者的预后中也发挥着非常重要的作用，可以提供很多有效的预后信息[4]。例如，增生细胞核是否呈现阳性以及阳性细胞的多少都可以指示着肿瘤细胞的增长速度，为患者的预后提供依据。而突变型P21、P53的表达的蛋白如果在多种肿瘤过度表达则说明肿瘤细胞的生长速度非常快，并且发生了转移，恶性程度较高。Ⅳ型胶原是基膜中的重要组成成分，完整的基膜更是良性上皮细胞的标志，如果基膜断裂或者消失的话则说明肿瘤已经发展成为了恶性肿瘤[5]。免疫组织化学技术通过观察抗体对特异性抗原的颜色反应来对组织的抗原进行诊断，与传统的病理诊断相比具有优越性。本研究结果显示，50例患者，经穿刺活检，AFP、Glypican-3阳性的有32例，阳性率为64.0%，经免疫组织化学技术检验，47例患者的细胞组织呈现变异性，阳性率为94.0%，免疫组织化学技术检验的阳性率明显高于穿刺活检的阳性率，与穿刺活检相比，免疫组织化学技术在肿瘤诊断中具有优越性，比较差异具有统计学意义（P0.05）。本研究结果与郭晋关于病理组织的免疫组织化学技术分析的研究报道数据吻合[6]。说明免疫组织化学技术在病理组织中具有重要的诊断意义。综上所述，在病理组织诊断中运用免疫组织化学技术具有良好的效果，准确性高，在不同类型的肿瘤疾病中也可以比较准确的判断，从而为患者的疾病治疗提供有效的依据，值得临床推广使用。【参考文献】[1]徐松,李海,陈芳,张阳,陈金珍.免疫组化在肝脏穿刺组织病理诊断中的应用[J].中国实用医刊,2013,40(2):114-115.[2]兰蕾,常小荣,张国山,石佳.艾烟对大鼠病理组织切片和肺HSP.7O及Caspase-9表达的影响[J].中华中医药杂志,2012,27(4):1042-047.[3]何春燕.免疫组化在肝脏穿刺组织病理诊断中的应用研究[J].中国卫生产业,2013,36（51）：3-5.[4]赵亮,戴朝六,彭松林,薛今琦.双重免疫组化染色检测DLKI与PCNA在肝细胞癌组织中的表达及临床意义[J].山东医药,2012,52(20):54-56.[5]]周猜玮,张永乐,李冰茄,黄从想,吴晓星.慢性乙型肝炎患者肝组织免疫组化表达与血清HBVDNA、HBeAg的关系[J].中国卫生检验杂志,2011,2-1(5):207-1208.[6]郭晋.病理组织的免疫组织化学技术分析[J].航空航天医学杂志，2014,24（36）：473-474.