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1、简述分光光度法的原理和分光光度计的操作步骤。原理：物质对不同波长的光波有选择吸收的特性，利用单色光可测定物质对光的吸收能力。根据Lambert-Beer定律:A=lgl／T=lgI。／I=εbC，在分光光度计的测定范围内，可测定某一浓度物质的A值。注:单色光、稀溶液、0.2-0.8、最大波长处、加合性步骤：（1）预热：通电，开盖，选择“T”，预热20min（2）取比色杯。光面为光通路，手拿毛面，样品入比色杯后，滤纸擦拭杯外液体（3）装样：空白管放在靠近自己的第一个孔，比色杯中液体占总体积2／3~4／5（4）调零：选“T”，关盖，按100:；开盖，按0.选择“A”，关盖，按0（5）测量2、等电点的定义，为什么等电点时蛋白质溶解度最低？定义：蛋白质分子酸性离解与碱性离解相等，静电荷和净迁移率均为0时溶液的pH为该蛋白质的等电点等电点时蛋白质处于等电状态，蛋白质颗粒上的静电荷为零，无电荷间的排斥作用，容易凝集成大颗粒而沉淀，因而最不稳定，溶解度最小。3、以实验folin酚法测定人体血清蛋白含量为例，说明样品待测液显色浓度、样品待测液浓度与样品实际浓度三个基本概念。样品待测液显色浓度：样品与显色试剂甲、乙显色后，和标准液进行颜色强度对比得出的样品浓度；样品待测液浓度:稀释并显色后的样品由分光光度计测定A值，通过标准曲线法查得或标准管法求得的待测管的蛋白质浓度样品实际浓度:稀释500倍的待测血清的实际浓度4、以蔗糖为例，分三个方面简述蔗糖酶专一性测定原理。蔗糖分子组成为α-吡喃葡萄糖-1,2-β-呋喃果糖，蔗糖酶专一水解α-吡喃葡萄糖-1,2-β-呋喃果糖苷键，故能催化蔗糖水解，水解产物与班氏试剂共热可产生红棕色沉淀。实验在同一条件下设置对照组和实验组，变量分别为pH值、温度、蔗糖酶的浓度。5、简述醋酸纤维薄膜电泳法的原理及操作步骤。原理：用醋酸纤维素薄膜作为支持物，用合适pH值的缓冲液使Pr带电，在电场力作用下，带电颗粒向着与其电性相反的电极移动。由于各种蛋白质都有特定的等电点，如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中，则蛋白质将带正电荷而向负极移动。反之，则向正极移动。依据V=Eq／6πrη得蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关，所以，可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。（血清中含有多种蛋白质，它们的等电点都在pH7.5以下。将血清放于pH8.6的缓冲液电泳时，所有的血清蛋白都带有负电荷，在电场中将向正极移动。由于各种血清蛋白在相同pH时所带电荷数量不等，分子颗粒大小不一，因而泳动速度不同，经电泳被分离开来）。分离后的Pr经显色或紫外光等可进行测定。步骤：1.泡膜（薄膜毛面一端1.5cm处铅笔划线）2.准备仪器3.点样4.电泳5.检测鉴定（5.染色6.浸洗7.定量）6、简述凝胶过滤层析法的原理和操作步骤。原理：凝胶颗粒内部有大小不一的孔隙，且孔隙大小有一定范围，相对分子质量大的物质能够更容易从颗粒间缝隙通过而最先被洗脱出来，相对分子量最小的物质最后被洗脱出来，从而将不同成分分离开。操作：1.准备凝胶2.装柱、3.处理样品4.上样、洗脱5.观察、收集6.透析7.鉴定）7、乳酸脱氢酶（LDH）有几种同工酶，经过醋酸纤维薄膜电泳分离前后顺序怎样？由阳极到阴极依次为LDH1、2、3、4、58、什么叫酶动力学？做酶动力学实验操作的注意事项有哪些？酶动力学是研究酶结合底物能力和催化反应速率的科学。预热，保证反应迅速开始；使用微量加样器精确取样和加样；配置各种试剂和反应液必须混匀；加酶液要迅速准确；各酶促反应尽量同时开始，严格控制反应时间相同；注意试剂滴加顺序9、简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中的三个不连续及三种物理效应。三个不连续：缓冲液成分、pH、凝胶孔径不连续三个物理效应：浓缩效应、分子筛效应、电荷效应10、用分光光度法测定物质的浓度时，制作标准曲线须注意些什么？曲线以A为纵坐标，相应的溶液浓度为横坐标；选择合适的标度；做出的曲线为过原点的直线操作1、分光光度法的操作2、刻度吸量管的使用3、离心机的使用4、电泳操作