生物实验常用溶液的配制

常用溶液的配制贮存液配方solutionIngredientsMWDoseNote10M/LNaOHNaOH40.004g搅拌溶解T·H2O10ml1M/LTris·ClTris(HOCH2)3CNH2121.1412.11g微波炉加热溶解，冷却后浓盐酸调pH至8.0，加三蒸水定容至100ml浓盐酸约5mlT·H2O80ml0.1M/LEDTAEDTA（C10H6N2O8）292.252.92g微波炉加热溶解，冷却后10M/LNaOH调pH至8.0，加三蒸水定容至100mlT·H2O80mlRNA酶A母液10mg/mlRNA酶A100℃加热15分钟,使混有的DNA酶失活。冷却后用1.5mleppendorf管分装成小份保存于-20℃10mmol/LTris·Cl(pH7.5),15mmol/LNaCl工作液配方solutionIngredientsmaterialsDoseNote溶液Ⅰ50mmol/LGlucoseGlucose(C6H12O6•H2O)198.170.99g搅拌溶解后定容至100ml，高压灭菌4℃保存25mmol/LTris·Cl1M/LTris·Cl2.5ml10mmol/LEDTA0.1M/LEDTA10mlT·H2O50ml溶液Ⅱ1％SDSSDS1g分开常温保存，用时临配。1ml溶液Ⅱ：1%SDS980μl+10mol/LNaOH20μlT·H2O100ml0.2mol/LNaOH溶液Ⅲ5mol/LKAcCH3COOKMW:98.1460ml定容至100ml,并高压灭菌。溶液终浓度：K+3mol/L,Acˉ5mol/L。冰醋酸11.5mlT·H2O28.5mlLB液体培养基(Luria-Bertani)蛋白胨(Tryptone)10g溶于800ml去离子水中NaOH调pH至7.5，加去离子水至总体积1升,高压下蒸气灭菌20分钟酵母提取物(Yeastextract)5gNaCl10gLB固体培养基LB液体培养基100ml高压灭菌后成凝胶状，用时微波炉加热至100℃以上溶解，加入5mg/mlAmpcillin1ml（终浓度为50ug/ml），摇匀后倒入培养皿中，冷却凝固即可涂板琼脂粉1.2g氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)工作液Ampcillin（规格0.48g,80万U）1支5mg/ml贮存液（终浓度为50ug/ml）,-20℃保存备用三蒸水100ml溶菌酶溶液(10mg/ml)溶菌酶溶液0.1g分装成1ml/小份，保存于-20℃,每一小份一经使用后便予丢弃10mmol/LTris·Cl(pH8.0)10ml3mol/lNaAc(pH5.2)NaAc·3H2O40.81g冰醋酸调pH至5.2，加水定容至100ml，分装后高压灭菌,储存于4℃冰箱三蒸水50mlTE缓冲液10mmo/LTris·Cl，1M/LTris·Cl(pH8.0)0.5ml加水定容至50ml，高压灭菌后EP管分装备用1mmol/LEDTA0.1M/LEDTA(pH8.0)0.5mlT·H2O49mlTBE缓冲液(5×)Tris54g定容至1000ml硼酸27.5g，0.5M/LEDTA(pH8.0)20ml上样缓冲液(6×)0.25%溴酚蓝溴酚蓝0.25g定容至100ml40%(w/v)蔗糖水溶液蔗糖40g三蒸水80ml0.7％琼脂糖凝胶琼脂糖粉0.14g微波炉加热溶解。温度降至50℃左右加入2μlEB（溴化乙锭）后制胶1×TBE20ml50xTAE,pH~8.5(40mMTris碱,40mM醋酸,1mMEDTA)Tris-碱242gTris加300ml去离子水加热搅拌溶解后，加入0.5M的EDTA（pH8.0）100ml，再加冰醋酸，去离子水调整体积到1升冰醋酸57.1g（ml）Na2EDTA·2H2O（0.5MEDTApH8.0）18.61g（100ml）10xTBE(89mMTris碱,89mM硼酸，2mMEDTA)Tris-碱108g硼酸55gNa2EDTA·2H2O7.44g加去离子水调整体积到1升生物化学实验常用缓冲液的配制方法1、0.2mol/L磷酸缓冲液*组份浓度0.2mol/L（pH6.0）*配制量1L*配置方法1.称取磷酸氢二钠.12水8.82g。2.称取磷酸二氢钠.2水27.34g。3.用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。2、洗脱液*组份浓度0.15mol/L（含0.15mol/L氯化钠的0.005mol/LpH6.0的磷酸缓冲液）*配制量10L*配置方法1.称取氯化钠87.66g。2.用0.2mol/LpH6.0的磷酸缓冲液250mL溶解。3.用去离子水稀释至10L。室温保存。3、0.3mol/L磷酸缓冲液*组份浓度0.3mol/L（pH7.8）*配制量0.5L*配置方法1.准确称取磷酸氢二钠.12水49.150g。2.磷酸二氢钠.2水2.000g。3.用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。注意：此为母液，使用时稀释10倍使用。4、0.2mol/L乙酸缓冲液*组份浓度0.2mol/L（pH4.6）*配制量2L*配置方法1.准确称取乙酸钠.3水54.44g。2.加入23mL冰乙酸，溶解。3.用去离子水溶解并定容至2L。4℃保存。5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸缓冲液（pH2.6、4.6、6.6）*组份浓度0.2mol/L*配制量各1L*配置方法1.母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4.12水143.256g，用去离子水定容至2L。2.母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸.1水42.028g用去离子水溶解定容至2L。3.pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制：pH值A（mL）B（mL）2.6109.0891.04.6467.5532.56.6727.5272.54.按上表混匀后，4℃保存。6、20×SSC缓冲液*配制量1L（pH7.0）*配置方法1.准确称取175.2g氯化钠。2.准确称取88.2g柠檬酸钠.2水。3.溶解于800mL去离子水中。4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。5.加去离子水定容至1L。注意：按实验需要可分装后高压灭菌。10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。7、0.15mol/L氯化钠-乙二胺四乙酸二钠缓冲液（pH8.0）*组份浓度0.15mol/L*配制量1L*配置方法1.准确称取氯化钠8.77g。2.称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。3.溶于800mL去离子水中。4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。5.加去离子水定容至1L。8、1/15mol/L的磷酸盐缓冲液（pH7.6）*组份浓度0.15mol/L*配制量1L*配置方法1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：称取KH2PO49.078g，用去离子水溶解定容至1L。2.溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4.2水11.876g（或磷酸氢二钠.12水23.894g）用去离子水溶解定容至1L。3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将①和②按1.4：8.6比例混合即可。9、5×TrisGlycineBuffer（SDSPAGE电泳缓冲液）*组份浓度0.125MTris，1.25MGlycine，0.5％（w/v）SDS*配制量1L*配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tris15.1gGlycine94gSDS5.0g2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。10、5×SDSPAGELoadingBuffer*组份浓度250mMTrisHCl（pH6.8）10％（W/V）SDS0.5％（W/V）BPB50％（V/V）甘油5％（W/V）β巯基乙醇*配制量5mL*配置方法1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。1MTrisHCl1.25mLSDS0.5gBPB25mg甘油2.5mL2.加入去离子水溶解后定容至5mL。3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。5.加入2M-E的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右1、1MTrisHCl*组份浓度1MTrisHCl（pH7.4，7.6，8.0）*配制量1L*配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。pH值浓HCl7.4约70mL7.6约60mL8.0约42mL4.将溶解定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2、1.5MTrisHCl*组份浓度1.5MTrisHCl（pH8.8）*配制量1L*配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调pH值至8.8。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。3、10×TEBuffer*组份浓度100mMTrisHCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）*配制量1L*配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MTrisHClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0）20mL2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。4、3M醋酸钠*组份浓度3M醋酸钠（pH5.2）*配制量100mL*配置方法1.称取40.8gNaOAc.3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。3.加入去离子水将溶液定容至100mL。4.高温高压灭菌后，室温保存。5、PBSBuffer*组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4*配制量1L*配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6、10M醋酸铵*组份浓度10M醋酸铵*配制量100mL*配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100mL。3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、TrisHCl平衡苯酚*配置方法1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：①液化苯酚应贮存于20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。②加入