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第1页共5页得分得分淮阴师范学院2009级生物工程专业《基因工程》课程考试卷（A）答案2012-2013学年第1学期题号一二三四总分得分一、名词解释(每题4分,共20分)1、同尾酶来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。得分2、S-D序列mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列。SD序列在细菌mRNA起始密码子AUG上游10个碱基左右处，有一段富含嘌呤的碱基序列，能与细菌16SrRNA3’端识别，帮助从起始AUG处开始翻译。得分3、多克隆位点指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段得分4、星号活性II类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件发生改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变。改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星号活性。得分5、基因文库将特定生物个体的全部DNA片段连接入载体DNA分子上，并导入受体细菌或细胞中，经扩增产生的包含该生物全部基因组序列的克隆群体。得分二、选择题(每小题2分,共20分)1、下列哪一种酶作用时需要引物?（C）A、限制酶B、末端转移酶C、反转录酶D、DNA连接酶2、K1enow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了的活性是？（C）A、5’→3’合成活性B、3’→5’外切活性C、5’→3’外切活性D、转移酶活性3、逆转录酶也称反转录酶，是一种（B）A、依赖于DNA的DNA聚合酶B、依赖于RNA的DNA聚合酶系别班级学号姓名密封线第2页共5页得分C、依赖于DNA的RNA聚合酶D、DNA聚合酶或RNA聚合酶4、用下列方法进行重组体的筛选，只有_说明外源基因进行了表达（C）A、Southem印迹杂交B、Northem印迹杂交C、Western印迹D、原位菌落杂交5、下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?（C）A、质粒B、黏粒C、酵母人工染色体(YAC)D、λ噬菌体6、T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是（C）A、2'-OH和5'-PB、2'-OH和3'-PC、3'-OH和5'-PD、5'-OH和3'-P7、用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为（C）A、染色体DNA断成了碎片B、染色体DNA分子质量大，而不能释放C、染色体变性后来不及复性D、染色体未同蛋白质分开而沉淀8、根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成（B）A、2大类B、3大类C、4大类D、5大类9、下面哪一种特性不是密码所具有的?（C）A、偏爱性B、简并性C、重叠性D、连续性10、以下哪些信息无法从cDNA克隆中获得?（B）A、外显子序列B、启动子序列C、序列的相似性D、编码产物的氨基酸序列三、简答题(每小题8分,共40分)1、PCR的原理和主要反应过程？原理PCR技术是以DNA互补链的聚合反应为基础，通过DNA变性、引物与模板DNA一侧的互补序列复性杂交，由DNA聚合酶催化引物延伸,最终获得特异DNA片段的体外扩增方法。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。密封线第3页共5页得分2、理想质粒载体的必备条件？应具有载体的基本条件1.具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性(可转移性)；2.具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点；3.具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点；4.具有较高的外源DNA的载装能力；5.具有合适的筛选标记。除具备载体的基本条件外，作为质粒本身还需要1.具有较小的分子质量和较高的拷贝数。2.具有若干限制性核酸内切酶的单一酶切位点。3.缺失mob基因。4.插入外源基因的重组质粒较易导入宿主细胞并自制和表达。得分3、细菌的限制与修饰系统有什么意义？宿主控制的限制与修饰现象广泛存在于原核细菌中，它有两方面的作用，一是保护自身DNA不受限制；二是破坏入侵外源DNA使之降解。细菌正是利用限制与修饰系统来区分自身DNA与外源DNA的。外源DNA可以通过多种方式进入某一生物体内，但是它必须被修饰成受体细胞的限制内切酶无法辩认的结构形式，才能在寄主细胞内得以生存，否则会很快被破坏。因此，在基因工程中，常采用缺少限制作用的菌株作为受体，以保证基因操作的顺利完成。得分4、什么是α-互补筛选（蓝白斑筛选的原理）？这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌—半乳糖苷酶的基因片段，携带有lac基因片段的载体转入lac的宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚——D—半乳糖苷(X-gal)平板上形成浅蓝色的噬菌斑。外源基因插人lac(或lac基因部分被取代)后，重组的噬菌体将丧失分解X-gal的能力，转入lac-宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚——D—半乳糖苷(X-gal)平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。得分5、抑制性差减杂交所依据的原理SSH的核心技术是抑制性PCR，它是一种将检测子cDNA单链标准化步骤和消减杂交步骤结合为一体的技术。其中标准化步骤均等了检测子中的cDNA单链丰度，而消减杂交步骤去除了检测子和驱赶子之间的共同序列，使检测子和驱赶子之间不同的序列得到扩增。抑制性PCR是利用链内复性优先于链间复性的原理，是非目标序列片段两端的长反向重复序列在复性时产密封线第4页共5页得分生“锅柄样”结构或“发夹结构”而无法与引物配对，从而选择性地抑制了非目标序列的扩增。得分四、论述题(每小题10分,共20分)1、基因工程的基本操作程序及常用方法？(1)从基因文库中获取，利用PCR技术扩增目的基因，如果基因较小，核苷酸序列又已知，可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。(2)基因表达载体的构建(3)转化目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。导入植物细胞方法：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法导入动物细胞方法：显微注射技术常用受体细胞：受精卵导入微生物细胞用钙离子处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。(4)目的基因的检测与鉴定DNA分子杂交技术（检测目的基因、分子杂交技术（检测mRNA）、抗原抗体杂交技术（检测蛋白质）得分2、近期“黄金大米”事件在社会上反响强烈，请依据自己所学的基因工程的知识，谈谈你对该事件的看法转基因技术所带来的好处是显而易见的，在人类历史进步和发展中起到了积极作用。首先，通过该项技术可以提供人们所需要的特性，改良培育新品种；第二，延长食品保存时间或增加营养成分；第三，将抗虫防菌基因转入到作物中，使作物本身产生抵抗病虫害侵袭的能力，减少了农药的使用量，有利于环境保护；第四，转基因技术及基因食物在医学方面得到广泛研究和应用。人们对转基因技术的主要担忧在于环境方面。外源基因的导入可能会造就某种强势生物，产生新物种或超级杂草、损害非目标生物、破坏原有生物种群的动态平衡和生物多样性，也即转基因生物存在潜在的环境安全问题。转基因作物的大面积种植已有数年，食用转基因食品的人群至少有10亿之多，但至今仍未有转基因食品对生命造成危害的实例；更何况目前每一种基因工程食品在上市前，都要经过国家法律认可，食品卫生部门和环境部门的严格检测。只有测试合格了，才能投放市场。因此公众完全可以安全地消费、大胆地食用转基因食品。（或者）随着转基因技术的发展，转基因生物安全问题在国内外已经引起极大的关注，不同领域的专家都从自己的专业角度对这个问题进行了很多研究，积累了丰富的文献。这些研究主要集中在生态学、科技伦理、环境科学等方面，主要通过技术层面来分析转基因生物的安全性问题。随着研第5页共5页究的深入，人们一致认为，生物安全是一个综合性的问题，它对于人类社会的深远影响已经超过人们的预期，原来那种希望仅仅依*科学技术的完善来解决人们对生物安全的疑虑和不安的想法已经显得过于简单。转基因生物安全首先是一个科学的概念，转基因生物从实验室到栽培实验地，到大田，到食品加工厂，到超级市场，到我们的餐桌上，随着消费者离转基因生物及其产品的距离越来越近，在这各个过程中，生物安全涉及到实验室安全、项目审批、大田栽培风险评估、市场准入、运输隔离、食品标签等一系列问题。而在法律的视野中，转基因生物安全包括着两个层面的安全：其一是生态和健康上的风险防范。因为“科学不确定性”的存在，使得法律对转基因生物的风险规制努力只能是“防范”而非“根除”隐患；其二，是指一旦转基因生物造成了损害，法律是否加以救济，提供怎么样的法律框架予以救济。这也是生物安全的另一个方面，是法律框架内的安全。由此我们可以得到这样的转基因生物安全概念，“转基因生物安全，是指为使转基因生物及其产品在研究、开发、生产、运输、销售、消费等过程中受到安全控制、防范其对生态和人类健康产生危害、以及救济转基因生物所造成的危害、损害而采取的一系列措施的总和”。相应地，调整和规范其中每一个过程中产生的法律关系的法律，其总和也就构成了转基因生物安全法。（其他答案合理均给分）得分