甲基化整体解决方案

甲基化整体解决方案DNA甲基化是最早发现的修饰途径之一，真核生物中甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA甲基化转移酶（DNMTs）的作用下的CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因重新活化和表达。这种DNA修饰方式在不改变基因序列的前提下实现对基因表达的调控。脊椎动物DNA甲基化状态与生长发育调控及生理状态密切相关，比如在肿瘤发生时，抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加，CpG岛中的CpG则程高度的甲基化状态，导致抑癌基因表达的下降。原核生物中甲基化多发生在CCA/TGG和GATC序列；真核生物中DNA甲基化一般发生在CpG位点上；哺乳动物DNA甲基化只发生在CpG岛的胞嘧啶，植物甲基化发生在CpG和CpNpG。甲基化会使胞嘧啶转为5-甲基胞嘧啶，CpG位点在基因组是不常见的，主要密集于接近基因启动子的位置，统称为CpG岛。CpG位点的甲基化可以对基因表现有重要的影响。哺乳动物中，CpG序列在基因组中出现的频率仅有1%，远低于的其它双核苷酸序列。但在基因组的某些区域中CpG序列密度很高，可以达均值的5倍以上即所谓的CpG岛。通常，CpG岛大约含有500多个碱基，位于基因的启动子区或第一个外显子区。在哺乳动物基因组中约有4万个CpG岛，而且只有CpG岛的胞嘧啶能够被甲基化。编号服务名称内容说明周期价格UBL101甲基化检测—引物设计各种检测方法的引物设计2工作日￥300/对引物UBL102甲基化检测—引物合成对设计好的引物进行合成，2OD1周￥60/对引物长度小于30bp￥2.5/bp引物长度大于30bpUBL103甲基化检测—BSP克隆测序法设计合成引物、DNA质检、亚硫酸氢盐修饰、扩增、克隆、产物测序、4-8周询价分析报告UBL104甲基化检测—HRM法设计合成引物、DNA质检、亚硫酸氢盐修饰、HRMPCR扩增检测、分析报告4-8周询价UBL105甲基化检测—MSP法设计合成引物、DNA质检、亚硫酸氢盐修饰、扩增、琼脂糖电泳检测、分析报告4-6周询价UBL106甲基化检测—焦磷酸测序法设计合成引物、DNA质检、亚硫酸氢盐修饰、扩增、产物测序、分析报告8-10周询价成功案例：中国农业科学院蔬菜花卉研究所、北京朝阳医院、哈尔滨医科大学、中国疾病预防控制中心、中国农业大学、北京协和医院、太原中心医院、第三军医大学、天津总医院、广东医学院附属医学院、宁夏医科大学、淮安市第二人民医院、江苏省人民医院、大连医学院附属第二医院、广东医学院病理教研室、医科院病原所、温州医学院、湖南南华大学、山东大学、中国医科大学附属第一医院、湖南湘雅医院等。甲基化研究思路：1.寻找甲基化位点1)甲基化二代测序寻找甲基化位点；2)对照组和实验组进行甲基化芯片检测，找到相关的甲基化位点；3)一些相关研究显示某些基因存在表达量降低的现象，可预测该基因是否存在CpG岛；4)根据文献寻找相关基因的甲基化位点。2.验证甲基化位点，并进行甲基化程度分析采用对照组和实验组样本进行甲基化验证。1)MSP方法：可进行特定位点甲基化验证，适用于甲基化芯片后的结果，无法进行甲基化程度分析；2)BSP克隆测序法：验证某些相关基因的甲基化位点，并计算出精确的甲基化程度百分比；3)HRM法：适用于大批量样本甲基化验证，并能计算出甲基化程度范围；4）焦磷酸测序法：验证某些相关基因的甲基化位点，并计算出精确的甲基化程度百分比。3.分析甲基化位点与研究的相关性根据对照组和实验组样本的检测结果，分析与研究的相关性。1)比较对照组和实验组相同甲基化位点甲基化是否有差异；2)比对对照组合实验组相同基因启动子区甲基化程度是否有差异；4.验证启动子发生甲基化的基因的表达量变化采用荧光定量PCR的方法检测相关基因的表达量，如果表达量降低，可能由于启动子区发生甲基化导致的，从而影响该基因所在的某些通路，导致一些疾病，或表型发生变化；如果没有发生变化，可能由于发生甲基化的区域与转录因子之间关联不是很密切，从而不会影响基因的表达。